趙思燁 葉明星 陳山珊 丘志龍 茍文韜 顏偉泓 張偉云

【摘 要】 目的：研究南鶴虱的水提物和乙醇提取物對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激性反應(yīng)，以評(píng)價(jià)其安全性。方法：參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法》，通過(guò)皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，分析南鶴虱的水提物及乙醇提取物皮膚應(yīng)用的安全性，為南鶴虱的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。結(jié)果：一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)中，小鼠的皮膚反應(yīng)刺激強(qiáng)度得分均小于0.5分；連續(xù)多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)中，小鼠的皮膚反應(yīng)刺激強(qiáng)度得分均為0分，表明南鶴虱的水提物和乙醇提取物對(duì)小鼠的正常皮膚及劃傷皮膚均無(wú)刺激性。結(jié)論：南鶴虱的水提物和乙醇提取物對(duì)小鼠的正常皮膚及劃傷皮膚均無(wú)刺激性，為今后開發(fā)南鶴虱護(hù)膚的相關(guān)產(chǎn)品提供一定的參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 南鶴虱；水提物；乙醇提取物；皮膚刺激性

【中圖分類號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）02-0014-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402004

Preliminary Research on the Effect of Aqueous Extract and Alcohol

Extract of Daucus carota L．on the Skin of Mice

ZHAO Siye1 YE Mingxing1 CHEN Shanshan1 QIU Zhilong1 GOU Wentao1 YAN Weihong1 ZHANG Weiyun1，2*

1.Department of Pharmacy，Xiamen Medical College/Xiamen Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Bio-engineering，

Xiamen 361023，China;

2.College of Pharmacy，F(xiàn)ujian Medical University，F(xiàn)uzhou 350122，China

Abstract：Objective To study whether the aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.induced irritating reactions to the skin to evaluate its safety.Methods Referring to the “Safety Evaluation Procedures and Methods of National Standards for Cosmetics of the Peoples Republic of China” issued by the State Food and Drug Administration，the safety of aqueous extract and ethanol extract skin application of Daucus carota L.was analyzed through skin irritation experiments，which provided a theoretical basis for the development and utilization of Daucus carota L.Results In one administered skin irritation experiment，the skin response stimulation intensity score of mice was less than 0.5 points，and in the continuous skin irritation experiment，the skin response stimulation intensity score of mice was 0，indicating that the aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.had no irritation to normal skin and scratched skin of mice.Conclusion The aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.had no irritation to normal skin and scratched skin of mice，which providedcertain reference value for the development of skin care products of Daucus carota L.in the future.

Keywords：Daucus carota L.;Aqueous Extract;Alcohol Extract;Skin Irritation

南鶴虱又稱竊衣子、野蘿卜子，是傘形科植物野胡蘿卜（Daucus carota L.）的干燥成熟果實(shí)，在我國(guó)主要分布于江蘇、湖北、陜西、河南等?。?］。南鶴虱性平，味苦，微毒性；其歸脾、胃經(jīng)；具有殺蟲消積功效［2］，用于蛔蟲、蟯蟲、絳蟲病等體內(nèi)蟲積病癥的治療［3］?！缎滦薇静荨分杏涊d該藥“主蛔、曉蟲，為散”；《開寶本草》中記載該藥 “蟲心痛，以淡醋和半匕服”，功效皆為殺蟲［4］。

南鶴虱的化學(xué)成分主要有揮發(fā)油、萜類、黃酮、甾體類等［5-9］。研究［10］表明，南鶴虱的揮發(fā)性成分對(duì)蚊幼蟲具有很好的殺滅作用；南鶴虱的甲醇提取物、戊烷提取物有一定的抑菌、抗腫瘤作用［11-12］；南鶴虱中還存在具有改善認(rèn)知功能障礙［13］、修復(fù)肝臟損傷［14］等作用的成分。目前已有學(xué)者嘗試將南鶴虱用于治療皮膚?。?5］，且在現(xiàn)代研究中乙醇和水為最常用的提取溶劑［16］，水是強(qiáng)極性溶劑，南鶴虱中的親水性成分都能被水溶出，乙醇是最常用的親水性有機(jī)溶劑，乙醇的溶解范圍廣，故本實(shí)驗(yàn)采用水、乙醇分別對(duì)南鶴虱進(jìn)行提取，為進(jìn)一步驗(yàn)證其皮膚用藥的安全性，故開展皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚍从呈茉囄飳?duì)皮膚是否存在刺激性，可用于初步評(píng)價(jià)受試物作用于皮膚的安全性。

實(shí)驗(yàn)以南鶴虱的水提物和乙醇提取物作為研究對(duì)象，分別對(duì)小鼠正常皮膚及劃傷皮膚涂抹給藥，通過(guò)觀察小鼠的皮膚情況和計(jì)算皮膚刺激積分的平均分值，從而評(píng)價(jià)南鶴虱皮膚用藥的安全性，為后續(xù)進(jìn)一步研發(fā)南鶴虱的護(hù)膚產(chǎn)品提供一定的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥材 實(shí)驗(yàn)所用南鶴虱采自中國(guó)河南省，由廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系中藥學(xué)專業(yè)的向云亞老師鑒定其為傘形科植物野胡蘿卜（Daucus carota L.）的干熟成熟果實(shí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級(jí)ICR小鼠36只，雌雄各半，體重20～25 g，浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（浙）2019-0002，合格證編號(hào)：20210506Abzz0100000542（雌）、20210506Abzz0100000316（雄）。

1.3 儀器 脫毛膏（廣州諾菲化妝品有限公司）、EYEL4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取物的制備

2.1.1 南鶴虱水提物的制備 取河南產(chǎn)南鶴虱藥材500 g，分為5份，每份分別與1000 mL的蒸餾水共同加入2000 mL圓底燒瓶中，浸泡1 h，電熱套設(shè)定溫度為150 ℃，將藥材加熱煎煮至沸騰，共煎3次，每次1 h，停止加熱，將3次濾液合并。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)操作4次，合并濾液，濃縮，得到南鶴虱水提物（3.3 g生藥/mL），置于4 ℃冰箱暫存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 南鶴虱乙醇提取物的制備 取河南產(chǎn)南鶴虱藥材500 g，分為5份，每份分別與1000 mL的75%乙醇溶液共同加入2000 mL圓底燒瓶中，電熱套設(shè)定溫度為85 ℃，回流提取3次，每次1 h，將三次濾液合并，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)操作4次，合并濾液，濃縮，得到南鶴虱乙醇提取物（3 g生藥/mL），置于4 ℃冰箱暫存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 取SPF級(jí)ICR小鼠18只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組、一次給藥水提物組和一次給藥醇提物組，每組6只。隨機(jī)分組后，使用脫毛膏去除小鼠背部脊柱兩側(cè)的毛發(fā)，脫毛范圍為2 cm×3 cm，將小鼠右側(cè)皮膚劃傷為 “=”字形，以皮膚滲血為度［17］，分為左側(cè)的正常皮膚區(qū)與右側(cè)的劃傷皮膚區(qū)?？瞻讓?duì)照組兩側(cè)皮膚均涂純水，水提物組、醇提物組于皮膚兩側(cè)分別涂抹南鶴虱水提物、乙醇提取物，涂抹面積均為2 cm×3 cm。給藥后用紗布覆蓋兩側(cè)的脫毛區(qū)域并用無(wú)刺激的醫(yī)用膠布進(jìn)行固定，24 h后拆除［18］，用蒸餾水清洗凈小鼠兩側(cè)皮膚，在清洗后的1 h、24 h、48 h、72 h時(shí)刻分別觀察涂抹部位是否出現(xiàn)紅斑、水腫等現(xiàn)象，按皮膚刺激反應(yīng)積分以及皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.3 連續(xù)多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)方法與一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)相同，空白對(duì)照組每日于皮膚兩側(cè)涂抹純水1次，涂抹面積為2 cm×3 cm，連續(xù)涂抹7 d；水提物組、醇提物組每日于皮膚兩側(cè)分別涂抹南鶴虱水提物、乙醇提取物1次，涂抹面積為2 cm×3 cm，連續(xù)涂抹、觀察7 d；7 d后三組小鼠用蒸餾水擦洗凈兩側(cè)皮膚后再觀察7 d。每次在相同的時(shí)間內(nèi)觀察，連續(xù)觀察14 d，按皮膚刺激反應(yīng)積分以及皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.4 皮膚刺激評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 皮膚刺激反應(yīng)的表現(xiàn)主要是觀察皮膚是否有紅斑，水腫的現(xiàn)象［19］。參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法》對(duì)皮膚紅斑、水腫的現(xiàn)象進(jìn)行分類，每一類對(duì)應(yīng)一種積分［20］，見表1。皮膚刺激強(qiáng)度的評(píng)價(jià)：每只動(dòng)物的平均分值=（紅斑總分+水腫總分）/ 動(dòng)物數(shù)量，得出的分值即為相應(yīng)的皮膚刺激強(qiáng)度［20］，見表2。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對(duì)每天的小鼠皮膚反應(yīng)積分采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理（水提物組、醇提物組分別與空白對(duì)照組比較），計(jì)量資料以“均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差”（x±s）表示，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 一次給藥后，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)各組小鼠行為、活動(dòng)均無(wú)異常，無(wú)死亡現(xiàn)象?？瞻讓?duì)照組小鼠在各時(shí)刻兩側(cè)皮膚均正常，無(wú)紅斑、水腫現(xiàn)象。一次給藥水提物組中，在1 h時(shí)刻有小鼠左側(cè)皮膚出現(xiàn)中度紅斑，右側(cè)皮膚出現(xiàn)中度水腫現(xiàn)象，在24 h、48 h、72 h時(shí)刻皮膚紅斑、水腫現(xiàn)象逐漸消退，其余小鼠各時(shí)刻兩側(cè)皮膚均無(wú)紅斑、水腫現(xiàn)象。一次給藥醇提物組中，在24 h時(shí)刻有小鼠右側(cè)皮膚出現(xiàn)輕度紅斑現(xiàn)象，在48 h、72 h時(shí)刻皮膚紅斑現(xiàn)象逐漸消退，其余小鼠各時(shí)刻兩側(cè)皮膚均無(wú)紅斑、水腫現(xiàn)象。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比較，南鶴虱水提物組、醇提物組兩側(cè)皮膚的皮膚反應(yīng)積分均無(wú)顯著性差異。各組皮膚反應(yīng)積分值見表3，皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)見表4，小鼠皮膚反應(yīng)代表性照片如圖1。

3.2 連續(xù)多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 多次給藥后，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)各組小鼠行為、活動(dòng)均無(wú)異常，無(wú)死亡現(xiàn)象?？瞻讓?duì)照組、多次給藥水提物組及醇提物組小鼠兩側(cè)皮膚均正常，無(wú)紅斑、水腫現(xiàn)象。各組小鼠的皮膚反應(yīng)刺激強(qiáng)度得分均為0分，表明在連續(xù)多次給藥實(shí)驗(yàn)中，南鶴虱的水提物及乙醇提取物對(duì)小鼠的正常皮膚和劃傷皮膚均無(wú)刺激性。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比較，南鶴虱水提物組、醇提物組兩側(cè)皮膚的皮膚反應(yīng)積分均無(wú)顯著性差異。

4 討論

皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)是指皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的局部可逆性損傷，包括一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)和多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)［20］，其典型表現(xiàn)是出現(xiàn)紅斑或水腫現(xiàn)象。一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛑苯臃从呈茉囄飳?duì)皮膚的刺激程度，多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)則能夠反映受試物對(duì)皮膚的刺激性以及受試物對(duì)皮膚長(zhǎng)期的慢性積累刺激性［21］。

本實(shí)驗(yàn)參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法》，對(duì)南鶴虱的水提物及乙醇提取物作用皮膚的安全性進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，一次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)中，南鶴虱水提物組、醇提物組各有1只小鼠皮膚出現(xiàn)紅斑、水腫現(xiàn)象，其余小鼠皮膚均正常，按照皮膚刺激評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算，小鼠的皮膚反應(yīng)刺激強(qiáng)度得分均小于0.5分，以表4評(píng)價(jià)皮膚刺激強(qiáng)度，表明南鶴虱的水提物及乙醇提取物對(duì)小鼠正常皮膚和劃傷皮膚均無(wú)明顯刺激性。在連續(xù)多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)中，各組小鼠均沒有產(chǎn)生明顯的刺激反應(yīng)，小鼠皮膚均無(wú)紅斑、水腫現(xiàn)象，小鼠正常皮膚及劃傷皮膚的皮膚反應(yīng)平均積分值均為0分，表明南鶴虱的水提物及乙醇提取物對(duì)小鼠正常皮膚和劃傷皮膚均無(wú)刺激性。

綜上所述，南鶴虱的水提物及乙醇提取物對(duì)正常皮膚和劃傷皮膚的刺激性小，為前期課題組開展南鶴虱提取物驅(qū)蚊、護(hù)膚的相關(guān)研究提供了實(shí)驗(yàn)參考，也為探討南鶴虱更廣泛的用途提供一定的理論依據(jù)。但本實(shí)驗(yàn)僅在一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有局限性，仍需在多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上進(jìn)行研究相互驗(yàn)證，以獲取更加準(zhǔn)確的結(jié)果。

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（收稿日期：2023-05-05 編輯：劉斌）