李 楠，鄧艷平

福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122

納米制劑的發(fā)展將帶來更多創(chuàng)新或個性化的療法，為攻克更多重大疾病帶來希望[1]?；诖耍Ｓ眉{米制劑如脂質(zhì)體[2-3]、膠束[4-5]、固體脂質(zhì)納米粒（solid lipid nanoparticle，SLN）[6-7]等已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。但納米制劑的安全性、工藝及質(zhì)量的可控性、關(guān)鍵設(shè)備及輔料對國外的過度依賴性等問題仍是需要應(yīng)對的挑戰(zhàn)[8]。

傳統(tǒng)制劑的開發(fā)基于質(zhì)量的檢測和生產(chǎn)出發(fā)，而引入質(zhì)量源于設(shè)計（quality by design，QbD）理念，改進(jìn)制造過程，可確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。QbD 已經(jīng)廣泛應(yīng)用于美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）和歐洲藥物管理局（European Medicines Agency，EMA）。QbD的基本內(nèi)容（圖1）是：以預(yù)先設(shè)定的目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況（quality target product profile，QTPP）作為研發(fā)的起點，在確定產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性（critical quality attributes，CQAs）的基礎(chǔ)上，基于風(fēng)險評估和實驗研究，確定關(guān)鍵物料屬性（critical material attributes，CMAs）和關(guān)鍵工藝參數(shù)（critical process parameters，CPPs），進(jìn)而建立能滿足產(chǎn)品性能且工藝穩(wěn)健的控制策略，最終完成設(shè)計、完善整體戰(zhàn)略方案，實施產(chǎn)品和工藝的生命周期管理（包括持續(xù)改進(jìn)）。QbD 原則[9-10]在近年來成功應(yīng)用于開發(fā)納米制劑遞藥系統(tǒng)如脂肪乳[11]、納米粒[12]。

圖1 QbD 理念在處方工藝優(yōu)化中的實施過程Fig.1 Implementation of QbD concept in prescription process optimization

因多酚類藥物具有良好抗氧化、腫瘤預(yù)防作用，但大部分具有水溶性低、腸道壁通透性差、胃腸道代謝等缺點，阻礙了該類藥物研發(fā)成口服制劑的發(fā)展進(jìn)程[13]。而大黃素屬于典型的多酚類藥物，故本實驗以大黃素為模型藥物，利用QbD 開發(fā)大黃素固體脂質(zhì)納米粒（emodin solid lipid nanoparticle，Emo-SLN）。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀，安捷倫科技（中國）有限公司；DF-101S 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；ME104 E型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Centrifuge 5430 R 型離心機(jī)，德國艾本德生命科學(xué)公司；ZQTY 50 型震蕩培養(yǎng)箱，上海知楚儀器有限公司；Sonics 型超聲細(xì)胞破碎儀，上海書俊儀器設(shè)備有限公司；Anton Paar LitesizerTM500 型激光納米粒度/電位儀，安東帕（上海）商貿(mào)有限公司。

1.2 樣品與試劑

單辛酸丙二醇酯（CapryolTM90，批號85883-73-4）、油酰聚氧乙烯甘油酯（Labrafil M 1944 CS，批號192796）、單月桂酸丙二醇酯（LauroglycolTM90，批號127903）、單亞油酸甘油酯（MaisineTM，批號125116）、山崳酸甘油酯（Compritol 888 ATO，批號156632）、單雙硬脂酸甘油酯（批號143048）、雙硬脂酸甘油酯（Percirol ATO 5，批號131343）、硬脂酰聚氧乙烯甘油酯（Gelucire 50/13，批號121651）、月桂酰聚氧乙烯-32 甘油酯（Gelucire 44/14，批號125008）、二乙二醇單乙醚（Transcutol?HP，批號145272）均為法國Gattefossé 公司惠贈；聚乙二醇400（PEG 400，批號20101214）、聚山梨酯20（Tween 20，批號20200303）、聚山梨酯80（Tween 80，批號20100502）均為南京威爾集團(tuán)有限公司所產(chǎn)；曲拉通X-100（Triton X-100，批號20131918）由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司所產(chǎn)；中鏈甘油三酯（MCT，批號 19985）、丙二醇二辛酸酯（propylene dioctanoate，批號131202）、三乙酸甘油酯（triacetin，批號Z16J7Y9191）均由北京鳳禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司所產(chǎn)；聚乙二醇-15 羥基硬脂酸酯（Solutol?HS15，批號96146968E0）、聚氧乙烯氫化蓖麻油（Cremophor?RH40，批號16894024UO）均為德國BASF 公司惠贈。大黃素對照品，批號518-82-1，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，購于上海麥克林生化科技股份有限公司；甲醇為色譜純試劑，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 Emo-SLN 的QbD 評價

2.1.1 QTPP 大黃素對光敏感、易氧化分解，為使用和貯存帶來不便；且由于大黃素難溶于水，且存在胃腸道代謝，以口服給藥為途徑，將其制成SLN，可提高其溶解度，使藥物穩(wěn)定性增加，提高藥物在人體的生物利用度的同時還可減少藥物劑量，提高患者用藥依從性。為改善大黃素難溶和不穩(wěn)定等一系列問題，以安全、穩(wěn)定且有效的口服SLN 為目標(biāo)產(chǎn)品，通過查閱文獻(xiàn)，結(jié)合臨床用藥的特點，總結(jié)上述目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量概況，結(jié)果如表1 所示。

表1 Emo-SLN 的QTPPTable 1 QTPP for Emo-SLN

2.1.2 CQAs CQAs 是“物理、化學(xué)、生物學(xué)或微生物學(xué)性質(zhì)或特點，應(yīng)在適宜的限度、范圍或分布內(nèi)以保證預(yù)期藥品的質(zhì)量”[17]。根據(jù)大黃素的性質(zhì)和魚骨圖法[18]，得表2 及圖2 中的CQAs 包含的粒徑、包封率、載藥量、體外釋放等參數(shù)。

表2 Emo-SLN 的CQAsTable 2 CQAs of Emo-SLN

圖2 Emo-SLN 的魚骨圖Fig.2 Fish bone diagram of Emo-SLN

2.1.3 制劑的風(fēng)險評估 根據(jù)Emo-SLN 的CQAs，對制劑進(jìn)行風(fēng)險評估[19]，以評估每種屬性可能對制劑CQAs 的影響。使用故障模式、影響和危害性分析（failure mode and effects criticality analysis，F(xiàn)MECA）方法（表3、4）進(jìn)行評估[20]。

表3 FMECA 法進(jìn)行風(fēng)險評估Table 3 FMECA methods for risk assessment

表4 FMECA 法的風(fēng)險優(yōu)先系數(shù) (RPN) 評價標(biāo)準(zhǔn)Table 4 FMECA methods for risk priority number (RPN)evaluation criterion

SLN 主要由原料藥、脂質(zhì)、表面活性劑（乳化劑）、助表面活性劑（助乳化劑）和水組成。脂質(zhì)主要作為SLN 的載體，可提高大黃素的溶解度，影響SLN 的安全性和穩(wěn)定性。表面活性劑作為SLN 中的重要成分，可降低界面勢能，與其穩(wěn)定性和安全性高度相關(guān)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及制劑經(jīng)驗，采用FMECA 法對Emo-SLN 的處方變量包括：原料藥、表面活性劑、脂質(zhì)和助表面活性劑進(jìn)行風(fēng)險評估。結(jié)果如表5 所示。采用熔融乳化法制備SLN，其中，相轉(zhuǎn)變溫度、超聲功率、超聲時間是影響該制劑SLN 制備的關(guān)鍵因素。對其進(jìn)行風(fēng)險評估（表6），并對SLN 進(jìn)行QbD 評價（圖3）。

表5 處方變量的風(fēng)險評估Table 5 Risk assessment of formulations

表6 工藝變量的風(fēng)險評估Table 6 Risk assessment of processes

圖3 SLN 的QbD 評價圖Fig.3 Diagram of QbD evaluation for SLN

2.2 Emo-SLN 的CMAs 篩選

分別于相應(yīng)的脂質(zhì)、表面活性劑、助表面活性劑中加入過量大黃素，置于恒溫?fù)u床避光振搖24 h后取出，于37 ℃、10 000 r/min 離心（離心半徑為10 cm）15 min。取上清液，用0.45 μm 濾膜濾過后進(jìn)樣HPLC 分析，計算大黃素的溶解度。結(jié)果如表7、8 所示，選擇CapryolTM90 為脂質(zhì)，Cremophor?RH40 作為表面活性劑。

表7 大黃素在脂質(zhì)中的溶解度Table 7 Solubility of emodin in lipids

表8 大黃素在表面活性劑中的溶解度Table 8 Solubility of emodin in emulsifiers

2.3 Emo-SLN 的制備

以50 ℃為制備溫度，選用熔融乳化法，于50℃分別加水及處方量的大黃素與脂質(zhì)CapryolTM90（質(zhì)量比1∶160）、表面活性劑Cremophor?RH40、助表面活性劑Transcutol?HP 混勻，攪拌3 min，于超聲細(xì)胞破碎儀（功率200 W，超聲時間5 min，工作2 s，暫停2 s）破碎，2～8 ℃保存12 h 后過0.8 μm 的濾膜，即得Emo-SLN。

2.4 SLN 的質(zhì)量控制研究

2.4.1 含量測定 選用HPLC 法[24]進(jìn)行測定，色譜條件如下：色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為水-甲醇（10∶90）；體積流量1.0 mL/min；檢測波長265 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

精密稱取1 mg 大黃素，溶解于甲醇溶液中，作為大黃素對照品溶液。并按“2.3”項下的方法制備空白SLN（除了不加大黃素其余步驟同上）。取適量的空白SLN 按其與甲醇體積比（1∶9）的比例下加入甲醇，渦旋破乳后，以流動相稀釋；同法操作，進(jìn)樣稀釋后的Emo-SLN 和大黃素對照品溶液，對比3 個樣品的出峰時間，判斷輔料是否會對樣品產(chǎn)生干擾，以及制得的Emo-SLN 檢測到的色譜峰是否為大黃素的樣品峰。如圖4 所示，表明溶劑和輔料在該色譜條件下對藥物大黃素的測定沒有干擾，結(jié)果表明藥物大黃素測定的專屬性良好。在100～2 500 μg/mL 呈良好的線性關(guān)系；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率試驗均符合要求。

圖4 Emo-SLN (A)、大黃素對照品 (B) 和空白SLN (C) 的HPLC 圖Fig.4 HPLC of Emo-SLN (A), emodin reference substance(B) and blank SLN (C)

2.4.2 Emo-SLN 的形態(tài)、粒徑和ζ 電位 吸取5 μL Emo-SLN 溶液滴到銅網(wǎng)上，靜置1 h，滴加2%的磷鎢酸至銅網(wǎng)表面，負(fù)染1～2 min，室溫自然晾干。置于TEM 下，逐漸放大至30 000 倍，觀察其形態(tài)。所制SLN 用超純水稀釋100 倍后，用激光納米粒度儀測定其粒徑、ζ 電位和多分散系數(shù)（polydispersity index，PDI）。

2.4.3 包封率和載藥量測定 取一定量體積Emo-SLN 溶液，按其與甲醇體積比（1∶9）的比例加入甲醇進(jìn)行破乳，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，在“2.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣檢測，即可測得W總。再另取1 mL Emo-SLN 溶液于30 000×g、4 ℃下高速離心（離心半徑為10 cm）1 h，取上層乳液，同法測定，即得W游離。按如下公式計算包封率和載藥量。

包封率＝W游離/W總

載藥量＝(W總－W游離)/(W總－W游離＋W脂質(zhì))

W游離、W總、W脂質(zhì)分別為Emo-SLN 的未包載藥物量、總藥物含量和SLN 內(nèi)除了大黃素以外的所有脂質(zhì)輔料的質(zhì)量

2.4.4 穩(wěn)定性考察 將Emo-SLN 置于2～8 ℃冰箱，于不同時間（0、7、21、32 d）取樣檢測其粒徑和PDI。

2.4.5 安全性考察 以體外溶血實驗考察Emo-SLN 的安全性。選用《中國藥典》2020 年版中的方法測定[25]，取健康家兔的新鮮血液，1 000 r/min 離心（離心半徑為10 cm）10 min，棄去上清液。將所得紅細(xì)胞用生理鹽水配成2.0%的混懸液備用；取300 μL 的30、50、70 μmol/L Emo-SLN 溶液加入2.5 mL 該紅細(xì)胞懸液后再加入2.2 mL 生理鹽水，均勻混合后，放入37 ℃恒溫水浴孵育60 min，后1 800 r/min 離心（離心半徑為10 cm）10 min。取上清，用紫外分光光度計測定波長540 nm 下的吸光度（A）值。以生理鹽水為空白對照組，以超純水為陽性對照組，每組設(shè)3 個平行復(fù)孔。按照下列公式計算溶血率。

溶血率＝(A實驗－A生理鹽水)/(A蒸餾水－A生理鹽水)

2.4.6 體外釋放實驗 采用透析袋法[26]進(jìn)行體外釋放測定。分別取1 mg/mL Emo-SLN 溶液及大黃素溶液1 mL，以200 mL 0.05 g/mL 十二烷基硫酸鈉（SDS）為溶出介質(zhì)[27]，溫度為37 ℃，轉(zhuǎn)速為8 r/min，分別于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、7.0、19.0、24.0 h 取樣1 mL，同時補(bǔ)充超純水1 mL，樣品處理后以HPLC 進(jìn)行測定。

2.5 Emo-SLN 的處方優(yōu)化試驗設(shè)計

2.5.1 處方優(yōu)化試驗設(shè)計 通過文獻(xiàn)報道[26-29]，綜合考慮上述列出的CMA、CPP，選擇以藥脂比（1∶X1）、表面活性劑用量（X2）、超聲功率（X3）為自變量，并以SLN 的粒徑（Y1）、PDI（Y2）和包封率（Y3）為評價指標(biāo)，基于單因素實驗結(jié)果，確定3個自變量的設(shè)計范圍：藥脂比（X1160～300）、表面活性劑用量（X23%～5%）和超聲功率（X3200～300 W）。根據(jù)Box-Behnken 設(shè)計（BBD）響應(yīng)面原理[30]，本實驗采用3 因素5 水平的星點設(shè)計，并根據(jù)響應(yīng)面試驗進(jìn)行優(yōu)化分析。操作步驟同“2.3”項。試驗設(shè)計及結(jié)果見表9～12?？傻贸隽降幕貧w方程為Y1＝286.49－39 913.53X1＋11.43X2＋0.19X3，R2＝0.702 3，Radj2＝0.633 6，Rpred2＝0.456 0；PDI 的回歸方程為Y2＝140.00－19 834.48X1－31.24X2－0.17X3－2 876.71X1X2＋58.12X1X3－0.05X2X3＋1.70X12＋6.81X22＋2.80×10?4X32，R2＝0.853 7，Radj2＝0.665 5，Rpred2＝0.488 0；模型相關(guān)系數(shù)R2分別為0.702 3、0.853 7，這說明該試驗?zāi)Ｐ团c實際試驗擬合較好，實際試驗中約70.23%、85.37%的結(jié)果可以通過擬合模型進(jìn)行解釋。校正后的決定系數(shù)R2adj分別為0.633 6、0.665 5，與R2相對接近，說明2 模型均有較好的準(zhǔn)確性和通用性。

表9 響應(yīng)面實驗設(shè)計及結(jié)果Table 9 Design and results of response surface method

而包封率的回歸方程為Y3＝?59.09＋156.46X1＋25.31X2＋0.52X3－4.16X1X2－0.45X1X3－0.10X2X3，R2＝0.5750，Radj2＝0.320 0，Rpred2＝0.108 2；該試驗?zāi)Ｐ团c實際試驗擬合一般，且數(shù)據(jù)間無顯著性差異，故后續(xù)以PDI 為主，判斷不同因素對其影響。由表10 可以看出，對于粒徑影響的因素順序為藥脂比＞表面活性劑＞超聲功率；由表11 可以看出，對于PDI 影響的因素順序為表面活性劑＞超聲功率＞藥脂比。兩模型的P值均＜0.05，響應(yīng)面回歸模型達(dá)到了顯著性水平。

表10 粒徑 (Y1) 的回歸模型方差分析Table 10 Variance analysis of established regression model for particle size (Y1)

表11 PDI (Y2) 的回歸模型方差分析Table 11 Variance analysis of established regression model for PDI (Y2)

表12 包封率 (Y3) 的回歸模型方差分析Table 12 Variance analysis of established regression model for encapsulation efficiency (Y3)

2.5.2 Box-Behnken 響應(yīng)面交互作用 在回歸模型方差分析結(jié)果的基礎(chǔ)上，采用Design-Expert 13 軟件依據(jù)Y1、Y2，在回歸模型方差分析結(jié)果的基礎(chǔ)上繪制響應(yīng)面圖及等高線圖，分析藥脂比、表面活性劑用量和超聲功率對Emo-SLN 中大黃素粒徑、PDI的影響（圖5）；3D 響應(yīng)曲面和等高線圖可直觀反映交互作用對響應(yīng)值的影響程度，曲面越陡，等高線越密集，則影響越顯著，等高線越接近橢圓，2個因素的交互作用越強(qiáng)[31]。

圖5 藥脂比、表面活性劑用量、超聲功率對PDI 交互影響的響應(yīng)面圖和等高線圖Fig.5 Response surface diagram and contour plots illustrating interaction effects of drug-lipid ratio, surfactant concentration and ultrasonic power on PDI

藥脂比與超聲功率對PDI 的影響最大，藥脂比與表面活性劑對其影響次之，表面活性劑與超聲功率對其影響最?。▓D5）。在藥脂比較低的情況下，隨著表面活性劑比例的增加，PDI 先減少后增加（圖5）；當(dāng)藥脂比在較高水平時，反之，響應(yīng)面的傾斜度較高，坡度較為陡峭，且等高線呈橢圓形，說明藥脂比和表面活性劑的交互作用對PDI 的影響較大；同理，說明超聲功率和表面活性劑的交互作用對PDI 的影響較?。▓D5）；藥脂比和超聲功率的交互作用對PDI 的影響較大（圖5）。

2.6 Emo-SLN 的制備工藝驗證

根據(jù)“2.5”項設(shè)計所得的最優(yōu)條件進(jìn)行實驗：藥脂比為1∶170，表面活性劑比例為4.13%，超聲功率為216.14 W，據(jù)此平行制備3 批Emo-SLN，對該處方設(shè)計進(jìn)行驗證，將測定的粒徑、PDI與“2.5”項預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較（表13）。由表13 可知，預(yù)測值與實測值間的偏差均小于1，二者較為接近，說明該模型較為可靠。綜上，選擇藥脂比為1∶170，表面活性劑用量為4%，超聲功率為216 W 為最優(yōu)處方，該處方的包封率為（98.28±1.43）%，載藥量為（0.23±0.01）%。實驗發(fā)現(xiàn)制備的Emo-SLN為球形，無黏連，大小均一，且粒徑在100～200 nm，ζ 電位（?21.90±0.50）mV（圖6～8），分散性良好（PDI 小于0.3），符合CQAs 要求。

表13 預(yù)測值與實際值的比較 (±s, n = 3)Table 13 Comparison of predictive value and actual value(±s, n = 3)

表13 預(yù)測值與實際值的比較 (±s, n = 3)Table 13 Comparison of predictive value and actual value(±s, n = 3)

優(yōu)化指標(biāo) Y1/nm Y2預(yù)測值 145.90 4.10實測值 146.89±3.41 5.65±1.05偏差 0.50 0.77

圖6 Emo-SLN 的粒徑分布圖Fig.6 Particle size distribution of Emo-SLN

圖7 Emo-SLN 的電位分布圖Fig.7 Potential distribution of Emo-SLN

圖8 Emo-SLN 的透射電鏡圖Fig.8 TEM image of Emo-SLN

根據(jù)上述最佳條件制備的Emo-SLN在2～8 ℃儲存32 d 內(nèi)，其粒徑（RSD 均小于1.5%）和分散系數(shù)（RSD 均小于0.01%）變化微小（表14），說明其具有良好穩(wěn)定性。

表14 Emo-SLN 的穩(wěn)定性 (2～8 ℃,±s, n = 3)Table 14 Stability of Emo-SLN at (2—8 ℃,±s, n = 3)

t/d 粒徑/nm PDI 0 138.90±1.14 0.063±0.006 7 108.63±1.38 0.152±0.005 14 143.87±0.25 0.087±0.007 21 127.77±0.46 0.238±0.006 32 136.30±0.28 0.086±0.003

Emo-SLN 的溶血性實驗結(jié)果如表15 和圖9 所示，其在30～70 μmol/L 濃度范圍內(nèi)無溶血現(xiàn)象（溶血率測定結(jié)果均小于5%），從而證明其不會引起體外紅細(xì)胞溶血。

表15 Emo-SLN 的體外溶血率 (±s, n = 3)Table 15 In vitro hemolytic rate of Emo-SLN (±s, n = 3)

表15 Emo-SLN 的體外溶血率 (±s, n = 3)Table 15 In vitro hemolytic rate of Emo-SLN (±s, n = 3)

組別 濃度/(μmol?L?1) 溶血率/%水 ? 100生理鹽水 ? 0 Emo-SLN 30 ?0.660±0.085 50 2.027±0.439 70 3.864±0.455

圖9 Emo-SLN 與紅細(xì)胞、水、生理鹽水孵育后的圖片F(xiàn)ig.9 Picture of Emo-SLN at different concentrations incubated with red blood cells, water and saline

大黃素原料藥與Emo-SLN 體外釋放結(jié)果如圖10 所示，相對原料藥，Emo-SLN 的釋放僅有30%左右（7 h），說明Emo-SLN 具有緩釋的作用。對其進(jìn)行動力學(xué)方程擬合，結(jié)果如表16 所示，發(fā)現(xiàn)其體外釋藥行為符合一級線性方程，Qt＝80.003 (1－e?0.084t)，R2＝0.988 3。

表16 Emo-SLN 的藥物釋放模型Table 16 Drug release kinetic models of Emo-SLN

圖10 Emo-SLN 和大黃素溶液的體外釋放情況 (±s,n = 3)Fig.10 In vitro release profiles of Emo-SLN and free emodin (±s, n = 3)

3 討論

根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于大黃配方顆粒[32]，1 g 含總蒽醌以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量計，應(yīng)為10.0～25.0 mg。可見目前使用的處方中大黃素含量較低，且給藥劑量大，故已上市并在臨床上長期使用的大黃素制劑幾乎沒有。開發(fā)一個可供臨床使用的大黃素納米制劑迫在眉睫。

2021 年國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心（CDE）發(fā)布的《納米藥物質(zhì)量制研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中也有引入QbD 的概念，且在該指導(dǎo)原則中提及納米藥物應(yīng)重點關(guān)注可能與體內(nèi)行為相關(guān)的質(zhì)量指標(biāo)，如粒徑、藥物釋放度以及與其特性相關(guān)的性能指標(biāo)，如結(jié)構(gòu)形態(tài)、包封率、載藥量、納米粒穩(wěn)定性等，同時也需對納米藥物進(jìn)行全過程質(zhì)量控制，包括納米藥物用到的原料藥、輔料、制備的工藝參數(shù)等[33]。

故本研究引入QbD 理念對該Emo-SLN 工藝進(jìn)行全面且深入的分析。首先，確認(rèn)Emo-SLN 的質(zhì)量概況，采用魚骨圖法和查閱文獻(xiàn)，確定其CQAs（粒徑、包封率、載藥量、體外釋放），再采用風(fēng)險管理工具篩選出影響其質(zhì)量的潛在CMAs（脂質(zhì)、表面活性劑、助表面活性劑、脂質(zhì)與藥物質(zhì)量比）。

實驗發(fā)現(xiàn)大黃素在脂質(zhì)材料CapryolTM90，表面活性劑Solutol?HS 15 中的溶解度比較好，且熔點較低。但因Solutol?HS 15 是一種親水性極強(qiáng)的輔料［親水親油平衡值（HLB）為14～16］，CapryolTM90 為水不溶性的脂質(zhì)（HLB 值為5），二者無法均勻地混合，混合后靜置即會分層，所以本實驗采用溶解度次之的Cremophor?RH40作為表面活性劑材料，其他皆選用上述藥物在其溶解度最大的材料。經(jīng)查閱文獻(xiàn)[34]，發(fā)現(xiàn)，助表面活性劑Transcutol?HP的溶解度大于PEG 400，所以選擇Transcutol?HP作為助表面活性劑。選用的脂質(zhì)CapryolTM90[35]可能增加脂質(zhì)和蛋白質(zhì)區(qū)域的腸脂膜流動性，從而通過跨細(xì)胞途徑促進(jìn)腸道對胰島素的吸收，且CapryolTM90 是一種生物利用度增強(qiáng)劑，因此，此脂質(zhì)有望促進(jìn)大黃素在腸道的吸收，增強(qiáng)其在腸道的生物利用度。且有文獻(xiàn)報道[36]Cremophor?RH40有可能影響經(jīng)細(xì)胞色素CYP3A4 轉(zhuǎn)化的藥物代謝及處置，增加藥物的生物利用度，對藥物的臨床應(yīng)用產(chǎn)生顯著影響；以Cremophor?RH40 為輔料的大黃素納米乳通過減少在MDCK II 細(xì)胞高表達(dá)的葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶醛酸化而增加跨細(xì)胞滲透，可作為提高大黃素口服生物利用度的一種有前途的策略[37]。Cremophor?RH40 的這一特點可針對大黃素存在的首關(guān)消除效應(yīng)，從而提高大黃素在體內(nèi)的生物利用度。且Cremophor?RH40 與CapryolTM90 合用，一方面有望提高大黃素在腸道的吸收，另一方面又可降低大黃素在腸道的代謝。

Emo-SLN 中大黃素的溶解度為大黃素溶液的近10 倍，顯著地提高了藥物的溶解度?；赒bD設(shè)計，并篩選了CMAs 及CPPs，17 組樣品測得的包封率均大于80%，較其他Emo-SLN 的包封率提高了25%左右[38]，PDI 小于0.5，表面活性劑比例較其他的大黃素納米制劑小[23]，可減少表面活性劑的毒性，安全性更大，以上結(jié)果均符合CQAs 的要求。本實驗以QbD 為理論基礎(chǔ)，成功設(shè)計Emo-SLN的開發(fā)，并為SLN 及其他納米藥物的開發(fā)研究提供了思路。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突