孟令海，關(guān) 琛，方素芳，王 鵬，呂 江，王 瓊，顧小龍，崔 平*

（1.河北北方學(xué)院動物科技學(xué)院，河北 張家口 075000；2.河北省張家口市畜牧技術(shù)推廣站，河北 張家口；3.河北省張家口市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北 張家口；4.河北省張家口市動物疫病預(yù)防控制中心，河北 張家口）

雞柔嫩艾美耳球蟲病是一種寄生于雞盲腸中的寄生蟲病，一般以10～40日齡以內(nèi)的雛雞最易感染，受害嚴(yán)重，死亡率達(dá)80%以上，病愈后的雛雞生長發(fā)育受阻，成年雞多為帶蟲者，會導(dǎo)致體增重和產(chǎn)蛋率下降，嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展[1]。迄今為止，使用化學(xué)藥物防治寄生蟲病仍是養(yǎng)雞業(yè)中常采用的技術(shù)手段。托曲珠利（Toltrazuril，TOL）是一種具有廣譜、高效、低毒等特點的化學(xué)合成藥物，也是目前用藥劑量較低的一類抗球蟲藥[2]。但隨著抗球蟲藥物的長期使用，耐藥蟲株不斷出現(xiàn)，為雞球蟲病的預(yù)防與治療帶來諸多問題[3]?；诖耍驹囼炌ㄟ^檢測雞柔嫩艾美耳球蟲對不同劑量托曲株利的耐藥性，為托曲珠利的科學(xué)使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 14日齡體重一致的308肉雞220只（復(fù)壯球蟲用10只，耐藥性試驗用210只），飼養(yǎng)條件為嚴(yán)格消毒過的環(huán)境，飼料為不添加抗球蟲藥的全價飼料。

1.1.2 試驗藥物 托曲珠利溶液（生產(chǎn)廠家：大連奧普動物藥業(yè)有限公司；批準(zhǔn)文號：20200511）

1.1.3 試驗蟲株 從張家口地區(qū)不加任何抗球蟲藥的養(yǎng)雞場采集糞便，通過單卵囊分離球蟲，培養(yǎng)柔嫩艾美耳球蟲至孢子化，95%卵囊孢子化后收集卵囊，在4 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 將210只雞隨機分成7個組，每組30只。分別為I組（飲水治療劑量為25 mg/L），II組（飲水治療劑量為50 mg/L），III組（飲水治療劑量為75 mg/L），IV組（飲水治療劑量為100 mg/L），V組（飲水治療劑量為125 mg/L），VI組（陽性組，感染不給藥），VII組（陰性組，不感染不給藥組）。

1.2.2 攻蟲與給藥 除VII組外，其他組在試驗開始第1天時分別經(jīng)口感染孢子化柔嫩艾美耳球蟲卵囊5×103個/只，除VI組和VII組外，各試驗組均于病毒感染前1 d開始飲水給藥。感染后每天觀察雞的狀況、糞便變化和采食情況，于感染后第7～15天每天收集糞便稱重，觀察記錄糞便情況及其卵囊數(shù)。

1.2.3 耐藥性判定指標(biāo) 選用抗球蟲指數(shù)（ACI）、病變記分減少率（RLS）、相對卵囊產(chǎn)量（ROP）和最適抗球蟲活性百分率（POAA）4項指標(biāo)對耐藥性進行綜合判定[4]。（1）抗球蟲指數(shù)（Anti-coccidial index, ACI）：抗球蟲指數(shù)=（相對增重率+存活率）－（病變值+卵囊值），當(dāng)ACI＜160，耐藥；當(dāng)ACI≥160，敏感。①存活率：以VII組的存活率為100%，計算其他各組試驗雞存活率，存活率×100%，可得存活率得分。②相對增重率：以不感染不給藥組（即VII組）在試驗期間每組雞的平均增重為100%，計算其它各組每雞的平均增重百分率，即相對增重率。③病變值：感染后9 d剖殺試驗雞，采取盲腸組織觀察其病變情況并記分，盲腸病變記分的評定（詳見表1，組內(nèi)平均病變記分×10為該組病變值）。此外，因球蟲感染死亡也記4分，并作全組平均后計算出病變值。④卵囊值：把剖檢后消化的盲腸勻漿內(nèi)卵囊數(shù)與該組第5～8天糞便卵囊數(shù)相加。根據(jù)卵囊比數(shù)換算成卵囊值，詳見表2。其中，卵囊比數(shù)=試驗組卵囊數(shù)或不感染對照組卵囊數(shù)/感染對照組卵囊數(shù)乘以100%。每項指標(biāo)用陰性（－）表示無耐藥性，用陽性（+）表示有耐藥性。判斷結(jié)果如下：完全耐藥（Complete resistant，CR）：4項指標(biāo)全為陽性；重度耐藥（Serious resistant，SR）：4項指標(biāo)中有3項指標(biāo)為陽性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項指標(biāo)中有2項指標(biāo)為陽性；輕度耐藥（Light resistant，LR）：4項指標(biāo)中有1項指標(biāo)為陽性；敏感（Sensitive，S）：4項指標(biāo)均為陰性。

表2 卵囊值計算方法

（2）病變計分減少率（Reduction of lesion scores,RLS）。病變計分減少率（RLS）=感染不給藥組平均病變計分－感染用藥組平均病變計分/感染不用藥組平均病變計分×100%。當(dāng)RLS＜50%，耐藥；當(dāng)RLS≥50%，不耐藥。（3）相對卵囊產(chǎn)量（Relative oocysts production,ROP）。相對卵囊產(chǎn)量（ROP）=感染用藥組平均卵囊百萬數(shù)/感染不用藥組平均卵囊百萬數(shù)×100%。當(dāng)ROP＜15%，不耐藥；當(dāng)ROP≥15%，耐藥。（4）最適抗球蟲活性百分率[5]（Percent of optimum anti-coccidial activity, POAA）。最適抗球蟲活性百分率（POAA）=感染用藥組GSR－感染不用藥組GSR/不感染不給藥組GSR－感染不給藥組GSR×100%。當(dāng)POAA≤50%，耐藥；當(dāng)POAA＞50%，不耐藥。增重與存活率（Growth and survival ratio，GSR）=籠末重/籠初重。綜上所述，本試驗選用ACI、RLS、ROP和POAA四項指標(biāo)進行綜合判定，每項指標(biāo)用陰性（－）表示無耐藥性，用陽性（+）表示有耐藥性。判斷結(jié)果如下：完全耐藥（Complete resistant, CR）：4項指標(biāo)全為陽性；重度耐藥（serious resistant，SR）：4項指標(biāo)中有3項指標(biāo)為陽性；中度耐藥（Middle resistant，MR）：4項指標(biāo)中有2項指標(biāo)為陽性；輕度耐藥（Light resistant, LR）：4項指標(biāo)中有1項指標(biāo)為陽性；敏感（Sensitive, S）：4項指標(biāo)均為陰性。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀和病理變化

I～VI組在開始攻蟲過程中，均出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、羽毛逆立等癥狀。I～V組在使用托曲珠利后開始逐漸恢復(fù)食欲與精神，試驗雞均存活，I組和II組的體重增長緩慢，從III組開始，體重持續(xù)增長，總體上所有劑量的托曲珠利對試驗雞的生長性能無顯著影響。剖殺時，對比7個試驗組，I～V組，盲腸的狀況良好，VI組（陽性組）的盲腸病變較嚴(yán)重，VII組（陰性組）的盲腸無病變。

2.2 耐藥性檢測結(jié)果

通過測定四項指標(biāo)表明，所有試驗組POAA值均≥50%，結(jié)果為陰性，敏感；所有試驗組RLS值≥50%，結(jié)果是陰性，敏感；所有試驗組ROP＜50%，結(jié)果是陰性，敏感；ACI值測定中，I組和II組的值均＜160，呈陽性，有耐藥性，而III組、IV組和V組值均＞160，呈陰性，無耐藥性，詳見表3。

表3 耐藥性檢測結(jié)果

結(jié)果表明，I組和II組僅ACI指標(biāo)呈陽性，結(jié)果為I組和II組為輕度耐藥，III組、IV組和V組的四項指標(biāo)呈陰性，結(jié)果為敏感，見表4。

表4 綜合耐藥性判定

3 討論

本試驗?zāi)退帣z測結(jié)果表明，25 mg/L作為正常劑量的托曲株利與二倍劑量的托曲株利均出現(xiàn)輕度耐藥性，使用托曲株利原始濃度抗雞球蟲的敏感性在逐步減弱。蔣祿峰[6]等對河北省部分地區(qū)柔嫩艾美耳球蟲野外分離株進行耐藥性檢測，試驗結(jié)果表明，石家莊、滄州、保定、唐山四個地區(qū)的分離株對妥曲珠利分別為重度耐藥、中度耐藥、重度耐藥和完全耐藥，這可能與當(dāng)?shù)氐挠盟幨泛陀盟幏椒ㄓ泻艽箨P(guān)系。耿天天[7]等開展河南省和湖北省部分地區(qū)雞球蟲分離株對地克珠利耐藥性調(diào)查研究表明，河南省和湖北省雞球蟲對地克珠利均存在耐藥現(xiàn)象。地克珠利與妥曲珠利均屬三嗪類抗球蟲藥，曾因高效低毒被廣泛應(yīng)用，然而長期用藥已使雞球蟲產(chǎn)生了抗藥性，本次采集的張家口地區(qū)分離株對正常劑量的托曲珠利與二倍劑量的地克珠利具有抗藥性，建議在雞球蟲防治過程中可配合其他抗球蟲藥進行輪換用藥和穿梭用藥。

本研究雖然能夠為張家口地區(qū)的球蟲病防治提供一些理論依據(jù)和實際指導(dǎo)，但是要徹底解決球蟲對當(dāng)?shù)仞B(yǎng)雞業(yè)的阻礙，還需從多方面努力。據(jù)盧緒峰[8]報道，在潮濕高溫的夏秋季，溫濕度過高，雞球蟲病的發(fā)病率呈直線上升趨勢，其死亡率呈指數(shù)增長；預(yù)防雞球蟲病重要的環(huán)節(jié)是要保持圈舍內(nèi)的環(huán)境良好和干凈衛(wèi)生，應(yīng)該避免小日齡雞和成年雞生活在一起，以避免成年帶蟲雞感染小日齡雞。養(yǎng)雞場在做好日常管理的同時，有條件的雞場盡量進行球蟲耐藥性測定，然后根據(jù)測定結(jié)果制定出適合本雞場的預(yù)防和治療用藥方案[9-10]，將球蟲耐藥性降至更低，減少經(jīng)濟損失，提高雞場的經(jīng)濟效益，為養(yǎng)雞業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展打下堅實基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

本次試驗研究表明，張家口地區(qū)雞柔嫩艾美耳球蟲對托曲株利的耐藥濃度為50 mg/L，75 mg/L及以上劑量仍能有效防治雞球蟲感染。