王 留，方磊涵，郭全海，王向國

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 商丘 476000）

奶牛乳房炎是奶牛養(yǎng)殖過程中一種常見的臨床多發(fā)病，臨床型乳房炎不僅引起奶牛產(chǎn)奶量的嚴(yán)重下降，同時(shí)導(dǎo)致牛奶品質(zhì)降低，給奶牛產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。引起奶牛乳房炎的因素包括環(huán)境因素、奶牛機(jī)體抵抗力降低、致病性微生物感染等，其中致病性微生物感染起主導(dǎo)作用。臨床上多采用抗生素治療臨床型乳房炎，但是抗生素殘留和細(xì)菌的抗生素耐藥性問題日益突出[1]，導(dǎo)致抗生素的治療效果和臨床應(yīng)用受到一定的限制。中草藥具有綠色、低毒、低殘留、不易誘導(dǎo)細(xì)菌耐藥性等特點(diǎn)，針對奶牛乳房炎致病菌篩選抗菌抗炎效果較好的蒲公英、金銀花、連翹、紫花地丁等中草藥，根據(jù)中獸藥方劑配伍原理，通過組方并加工成復(fù)方蒲公英乳房灌注劑，用于奶牛臨床型乳房炎的治療。本試驗(yàn)使用復(fù)方蒲公英乳房灌注劑對奶牛臨床型乳房炎進(jìn)行臨床治療試驗(yàn)，通過測定用藥前后乳中體細(xì)胞數(shù)、奶牛血清炎性因子、臨床有效率和治愈率的變化，探索復(fù)方蒲公英乳房灌注劑對奶牛臨床型乳房炎治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑 便攜式體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，韓國Digital Bio Technology 公司；多功能酶標(biāo)儀，上海酶聯(lián)生物科技有限公司；淀粉樣蛋白A（SAA）雙抗夾心ELISA檢測試劑盒，上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)藥物 復(fù)方阿莫西林乳房注入劑，浙江海正動(dòng)物保健品有限公司；復(fù)方蒲公英乳房灌注劑，由課題組自制，按照處方配伍比例稱取蒲公英、金銀花、連翹、紫花地丁等中藥材，經(jīng)水提醇沉法提取，過濾后的上清液濃縮至含生藥量1 g/mL。調(diào)節(jié)pH 7.0，添加0.2%活性炭煮沸20 min，抽濾后的濾液經(jīng)高壓蒸汽滅菌后分裝為每袋100 mL，4 ℃ 冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 從商丘市某奶牛場飼養(yǎng)的中國荷斯坦奶牛中選取2～3胎次的健康奶牛10頭和臨床型乳房炎奶牛20頭進(jìn)行治療試驗(yàn)。試驗(yàn)?zāi)膛＞鶡o其他疾病發(fā)生，也未接受抗生素治療。10頭健康奶牛為健康對照組，試驗(yàn)過程中不給藥。20頭臨床型乳房炎奶牛隨機(jī)分為試驗(yàn)藥物組和抗生素對照組，每組10頭，試驗(yàn)藥物組奶?；疾∪閰^(qū)注射復(fù)方蒲公英乳房灌注劑20 mL（含生藥量1 g/mL）；抗生素對照組奶?；疾∪閰^(qū)注射復(fù)方阿莫西林乳房注入劑1支（含阿莫西林200 mg，舒巴坦鈉50 mg，潑尼松龍10 mg）。2次/d，7 d為一療程。試驗(yàn)前和試驗(yàn)過程中，供試奶牛自由飲水，統(tǒng)一飼喂，試驗(yàn)藥物組和抗生素對照組連續(xù)給藥7 d，觀察奶牛的精神狀態(tài)、食欲變化和乳房炎治療效果。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 試驗(yàn)第0、1、4、7天，溫水清洗乳房，75%酒精棉球消毒，棄去前3把奶，然后分別采集30 mL牛奶于離心管內(nèi)，4 ℃ 保存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)第0、4、7天，分別采集奶牛靜脈血5 mL于無抗凝劑的采血管內(nèi)，室溫凝固1 h后4000 r/min離心5 min分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測指標(biāo)及方法 便攜式體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定乳樣中的體細(xì)胞數(shù)（SCC）；ELISA檢測試劑盒測定血清樣品中淀粉樣蛋白A（SAA）炎性標(biāo)志物。

1.2.3 臨床療效判定 給藥前及給藥期間觀察奶牛的精神狀態(tài)、飲食欲和乳房局部癥狀（潮紅、腫脹、疼痛、乳汁異常）變化情況，參考張鳳鳳等[1]制定的標(biāo)準(zhǔn)綜合判定治療效果，治療效果分為治愈、有效、無效。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行差異顯著性比較。

2 結(jié)果

2.1 乳樣中體細(xì)胞數(shù)檢測結(jié)果

復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑對臨床型乳房炎奶牛乳樣中體細(xì)胞數(shù)的影響見表1。試驗(yàn)前（第0天）試驗(yàn)藥物組、抗生素對照組乳樣中體細(xì)胞數(shù)（SSC）與用藥第7天相比均差異顯著（P＜0.05）。試驗(yàn)藥物組與抗生素對照組乳樣中體細(xì)胞數(shù)（SSC）試驗(yàn)前（第0天）差異不顯著（P＞0.05），分別為236.07萬個(gè)/mL和228.59萬個(gè)/mL，均高于奶牛乳房炎的判定標(biāo)準(zhǔn)（SSC＞50萬個(gè)/mL）；用藥第1天2組間SSC差異顯著（P＜0.05），用藥第4天和第7天2組間SSC均差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑能顯著減低臨床型乳房炎奶牛乳樣中體細(xì)胞數(shù)，與市售商品復(fù)方阿莫西林乳房注入劑相比無顯著差異。

表1 乳房炎奶牛乳樣中體細(xì)胞數(shù) （萬個(gè)/mL）

2.2 血清淀粉樣蛋白A（SAA）檢測結(jié)果

復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑對臨床型乳房炎奶牛血清淀粉樣蛋白A（SAA）的影響見表2。試驗(yàn)前（第0天）試驗(yàn)藥物組、抗生素對照組SAA與用藥第4天相比差異不顯著（P＞0.05），與用藥第7天相比均差異顯著（P＜0.05）。用藥第4天試驗(yàn)藥物組、抗生素對照組SAA與用藥第7天相比均差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明，復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑能顯著降低臨床型乳房炎奶牛血清淀粉樣蛋白A含量，與市售商品復(fù)方阿莫西林乳房注入劑相比無顯著差異。

表2 乳房炎奶牛血清淀粉樣蛋白A（SAA）檢測結(jié)果（μg/mL）

2.3 臨床治愈率和有效率

復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑對臨床型奶牛乳房炎的治療效果見表3。試驗(yàn)藥物組治愈率和有效率分別為69.2%、23.1%，總有效率為92.3%；抗生素對照組治愈率和有效率分別為71.4%、19.7%，總有效率為91.1%。試驗(yàn)藥物組總有效率與抗生素對照組差異不顯著（P＞0.05 ）。

表3 復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑對臨床型奶牛乳房炎治療效果

3 討論與結(jié)論

乳房炎是奶牛養(yǎng)殖中的常見病和多發(fā)病，引起患病奶牛產(chǎn)奶量和牛奶品質(zhì)降低，牛奶中體細(xì)胞數(shù)增加。每毫升牛奶中所含的細(xì)胞總數(shù)稱為牛奶體細(xì)胞數(shù)，白細(xì)胞數(shù)量占98%以上，其余為乳腺組織脫落的少量上皮細(xì)胞[2]。奶牛乳房存在損傷或炎癥時(shí)，牛奶中體細(xì)胞數(shù)升高，因此牛奶體細(xì)胞數(shù)能夠反映奶牛乳腺組織損傷、牛奶質(zhì)量和奶牛的飼養(yǎng)管理情況，是奶牛乳房健康狀況的監(jiān)測指標(biāo)，可用于奶牛乳房炎的檢測[3]。當(dāng)奶牛發(fā)生乳房炎時(shí)，大量的白細(xì)胞進(jìn)入乳腺組織以清除感染的致病菌，引起牛奶中體細(xì)胞數(shù)快速升高，臨床上以牛奶中體細(xì)胞數(shù)超過50萬個(gè)/mL作為診斷乳房炎的標(biāo)準(zhǔn)[2]。田猛等[4]研究發(fā)現(xiàn)，由黃芪、王不留行、魚腥草等組成的混合發(fā)酵中草藥能顯著降低隱性乳房炎牛奶中的體細(xì)胞數(shù)，并且不影響牛奶中的乳蛋白率和乳脂率。本試驗(yàn)通過檢測用藥前后乳樣中的體細(xì)胞數(shù)研究復(fù)方蒲公英乳房灌注劑對奶牛乳房炎的治療效果，結(jié)果顯示復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑能顯著減低臨床型乳房炎奶牛乳樣中體細(xì)胞數(shù)，與市售商品復(fù)方阿莫西林乳房注入劑相比無顯著差異。

血清淀粉樣蛋白A（SAA）是由肝臟合成的一種高密度脂蛋白特異性載脂蛋白，為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，參與體內(nèi)的多種炎癥反應(yīng)，當(dāng)機(jī)體存在感染等炎癥刺激時(shí)，血清淀粉樣蛋白A會(huì)在短時(shí)間內(nèi)快速升高，因此可作為一種新型的炎癥反應(yīng)標(biāo)志物，用于機(jī)體內(nèi)的炎癥監(jiān)測和預(yù)后評估[5]。血清淀粉樣蛋白A用于奶牛乳房炎監(jiān)測的研究相對較少，薛永康等[6]對患隱性乳腺炎奶牛乳汁中急性期蛋白含量與奶牛隱性乳腺炎的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳汁中血清淀粉樣蛋白A有可能作為奶牛隱性乳腺炎的診斷指標(biāo)。尹柏雙等[7]采用Elisa試劑盒檢測乳清中淀粉樣蛋白A含量研究不同程度奶牛隱性乳房炎與乳清淀粉樣蛋白A含量變化的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳清淀粉樣蛋白A含量與乳腺損傷程度和乳汁體細(xì)胞數(shù)增加呈正相關(guān)，乳清淀粉樣蛋白A含量變化與隱性乳房炎發(fā)病程度具有一定相關(guān)性。田猛等[4]研究發(fā)現(xiàn)，混合發(fā)酵中草藥能顯著降低隱性乳腺炎奶牛血清中淀粉樣蛋白A。本試驗(yàn)通過檢測用藥前后奶牛血清淀粉樣蛋白A含量變化研究復(fù)方蒲公英乳房灌注劑對奶牛乳房炎的治療效果，結(jié)果顯示復(fù)方蒲公英奶牛乳房灌注劑能顯著降低臨床型乳房炎奶牛血清淀粉樣蛋白A含量，與市售商品復(fù)方阿莫西林乳房注入劑相比無顯著差異。

治愈率和有效率是評價(jià)奶牛乳房炎治療藥物治療效果的臨床指標(biāo)。隋國燕等[8]通過臨床觀察、細(xì)菌清除率及體細(xì)胞計(jì)數(shù)變化指標(biāo)研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方阿莫西林乳房注入劑對奶牛臨床型乳房炎的臨床治愈率為58.3%。潘康鎖等[9]通過乳樣體細(xì)胞計(jì)數(shù)及臨床治療效果觀察發(fā)現(xiàn)高劑量（口服，600 g/次）公英翹蘆散對奶牛乳房炎的有效治愈率為100%，臨床治療效果良好。張鵬舉等[10]通過加州乳房炎檢驗(yàn)和乳中體細(xì)胞數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，公英翹蘆散治療亞臨床型奶牛乳房炎有效率可達(dá)97.56%，說明公英翹蘆散可以作為治療亞臨床奶牛乳房炎的有效藥物，治療效果顯著。復(fù)方蒲公英乳房灌注劑由抗菌抗炎效果較好的蒲公英、金銀花、連翹、紫花地丁等中草藥，根據(jù)中獸藥方劑配伍原理，通過組方并加工制成的治療奶牛乳房灌注劑，對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌等奶牛乳房炎致病菌有較好的抗菌作用。本試驗(yàn)通過臨床觀察、乳樣體細(xì)胞數(shù)和血清淀粉樣蛋白A研究復(fù)方蒲公英乳房灌注劑治療臨床型奶牛乳房炎的治療效果，結(jié)果顯示總有效率為92.3 %，治療效果顯著。