湯倩倩, 張慶, 王燕, 李愛萍

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科(河南鄭州 450014)

妊娠期糖尿病(GDM)是一種常見妊娠期并發(fā)癥,患者血糖調(diào)節(jié)能力、免疫功能、心肺功能、脂代謝功能等出現(xiàn)異常,易引發(fā)巨大兒、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局,嚴(yán)重威脅母嬰健康[1]。微小核糖核酸(miR)是一種長約22 nt的非編碼核糖核酸,在病毒、高等哺乳動物、植物中廣泛存在[2]。相關(guān)研究指出,miR參與細(xì)胞分化、凋亡、增殖等,與GDM的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),并可對妊娠結(jié)局造成影響[3]。其中微小核糖核酸-27a(miR-27a)可加劇胰島素抵抗,影響糖脂代謝[4]。而微小核糖核酸-146a-5p(miR-146a-5p)最初被認(rèn)為具有免疫調(diào)節(jié)作用,后有學(xué)者報道,其表達(dá)水平在糖尿病患者中明顯下降[5]。但現(xiàn)階段,臨床對miR-27a、miR-146a-5p與GDM患者妊娠結(jié)局的關(guān)系缺乏研究。基于此,本研究檢測妊娠結(jié)局良好、妊娠結(jié)局不良患者的miR-27a、miR-146a-5p水平,探討以上指標(biāo)與GDM患者妊娠結(jié)局的關(guān)系。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選取2020年1月至2022年12月我院接收的60例GDM患者當(dāng)作研究對象,依照妊娠結(jié)局劃分成不良組(n=29)、良好組(n=31)。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《婦產(chǎn)科學(xué)(第8版)》[6]中GDM診斷標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)B超、葡萄糖耐量試驗等檢查證實;(2)孕周≥28周;(3)年齡20～35歲;(4)自然受孕,單胎;(5)配合度高;(6)臨床資料齊全。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有惡性腫瘤、重要臟器功能嚴(yán)重不全、心血管疾病、凝血功能障礙、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、急性炎癥;(2)伴有認(rèn)知障礙、精神疾病、視聽障礙;(3)合并其他妊娠期并發(fā)癥;(4)合并其他影響糖代謝的疾病;(5)妊娠前患有糖尿病;(6)入組前接受過相關(guān)治療;(7)妊娠期間檢查結(jié)果顯示胎兒異常;(8)有不良妊娠史;(9)近期有重大外傷史、手術(shù)史。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過,且患者簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般信息收集 詢問所有入選者年齡、孕前體重、身高、孕周、生產(chǎn)史、吸煙史、飲酒史等一般信息,計算孕前體質(zhì)指數(shù)[體重(kg)/身高2(m2)]。

1.2.2 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平檢測 所有入選者均于入組后第2天,晨起空腹抽取5 mL外周靜脈血,置于凍存管,放于-80℃冰箱內(nèi)待檢。以上海羽哚生物科技有限公司提供的RNA提取試劑盒提取血液中總RNA,以紫外分光光度計對總RNA的純度、濃度進(jìn)行檢測,留存吸光度值1.8～2.0的樣本。以上?？泼羯锟萍加邢薰咎峁┑哪孓D(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄RNA為cDNA,保存于-20℃下備用。使用Primer Premier 5.0進(jìn)行引物設(shè)計,由上海吉瑪生物有限公司合成。miR-27a、miR-146a-5p引物序列見表1。實時熒光定量PCR反應(yīng)體系為20 μL,反應(yīng)條件如下:95℃預(yù)變性30 s;94℃ 5 s,60℃ 34 s,72℃ 5 s,40個循環(huán)。均以U6為內(nèi)參,使用2-ΔΔCt法計算miR-27a、miR-146a-5p表達(dá)水平。

表1 miR-27a、miR-146a-5p引物序列

1.2.3 其他臨床與實驗室指標(biāo)檢測 血壓水平:囑咐所有入選者測量前切勿飲用濃茶、咖啡,休息15 min,測量時保持手掌向上,高度與胸口持平,以電子血壓計(日本歐姆龍公司,型號:HBP-9021)測定收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP),連續(xù)測量3次,最終取平均值。肝功能、血脂水平:抽取空腹靜脈血,以全自動生化分析儀(德國西門子公司,型號:Atellica CH930)測定肝功能[天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)]、血脂水平[總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)]。

1.2.4 不良妊娠結(jié)局判定標(biāo)準(zhǔn) 不良妊娠結(jié)局包括巨大兒、早產(chǎn)、新生兒低血糖、羊水過多、胎膜早破。巨大兒是指體重>4 kg的新生兒;早產(chǎn)是指孕周<37周生產(chǎn);新生兒低血糖是指血糖值<2.2 mmol/L;羊水過多是指妊娠期間羊水量>2 000 mL;胎膜早破是指分娩前胎膜破裂[7-9]。

2 結(jié)果

2.1 GDM患者妊娠結(jié)局單因素分析 兩組年齡、孕周、孕前體質(zhì)指數(shù)、生產(chǎn)史、吸煙史、飲酒史、AST、ALT、SBP、DBP比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),兩組TC、TG、miR-27a、miR-146a-5p比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 GDM患者妊娠結(jié)局單因素分析

2.2 GDM患者妊娠結(jié)局logistics多因素回歸分析 以GDM患者是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局為因變量,以TC、TG、miR-27a、miR-146a-5p水平為自變量,行l(wèi)ogistics多因素回歸分析,賦值見表3,結(jié)果顯示,miR-27a、miR-146a-5p為GDM患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的危險因素(P<0.05),見表4。

表3 GDM患者妊娠結(jié)局logistics多因素回歸分析的變量賦值表

表4 GDM患者妊娠結(jié)局logistics多因素回歸分析

2.3 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平與GDM患者妊娠結(jié)局的相關(guān)性 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示,外周血miR-27a水平與不良妊娠結(jié)局發(fā)生呈正相關(guān),外周血miR-146a-5p水平與不良妊娠結(jié)局發(fā)生呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見表5、圖1。

圖1 miR-27a、miR-146a-5p預(yù)測GDM患者妊娠結(jié)局的ROC曲線

表5 外周血miR-27a、miR-146a-5p水平與GDM患者妊娠結(jié)局的相關(guān)性分析

2.4 miR-27a、miR-146a-5p對GDM患者妊娠結(jié)局的預(yù)測價值 以GDM患者不良妊娠結(jié)局為陽性樣本,以良好妊娠結(jié)局為陰性樣本繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,miR-27a、miR-146a-5p預(yù)測GDM患者妊娠結(jié)局的AUC為0.915、0.902,聯(lián)合預(yù)測的AUC最大,為0.979,見表6、圖1。

表6 miR-27a、miR-146a-5p對GDM患者妊娠結(jié)局的預(yù)測價值

3 討論

GDM的發(fā)生主要是隨著孕周增加,機(jī)體對葡萄糖的需求量增大,若胰島素分泌不足,將出現(xiàn)胰島素抵抗,加之運動缺乏、飲食不當(dāng),會導(dǎo)致代謝異常,進(jìn)而引發(fā)該疾病。GDM危害較大,既會造成不良妊娠結(jié)局,又會增加產(chǎn)婦病死風(fēng)險。相關(guān)文獻(xiàn)報道,加強(qiáng)產(chǎn)前檢查能有效減少不良事件發(fā)生,改善GDM患者妊娠結(jié)局[10]。因此,探尋影響GDM患者妊娠結(jié)局的敏感生物標(biāo)志物十分重要。

miR可由胎盤分泌,并穩(wěn)定存在于母體血液中,可調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡、增殖、前移及糖脂代謝等,在妊娠期病理學(xué)變化(包括GDM發(fā)病、胎盤發(fā)育異常、胎兒血管內(nèi)皮細(xì)胞受損等)中發(fā)揮重要作用,極大影響GDM患者健康及胎兒生長發(fā)育[11]。Poirier等[12]指出,在GDM患者中miR發(fā)揮代謝與發(fā)育調(diào)節(jié)劑的作用,可能參與GDM發(fā)病,并影響妊娠結(jié)局。miR-27a屬基因間區(qū)域miR,具有促炎、促進(jìn)血管生成、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、調(diào)控細(xì)胞分化與增殖等作用[13]?，F(xiàn)有研究指出,miR-27a是過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)的負(fù)調(diào)節(jié)因子和直接靶標(biāo),PPAR-γ發(fā)揮調(diào)節(jié)胰島素敏感性、脂質(zhì)代謝的作用,外周血miR-27a過表達(dá)可降低PPAR-γ水平,影響脂質(zhì)代謝,阻礙脂肪細(xì)胞分化,造成脂肪組織堆積[14]。miR-27a還參與葡萄糖代謝調(diào)節(jié),其水平異常升高可阻止葡萄糖攝取、消耗,造成葡萄糖代謝異常,出現(xiàn)胰島素抵抗。Yu等[15]研究結(jié)果顯示,miR-27a可能參與糖脂代謝異常、細(xì)胞外基質(zhì)沉積、氧化應(yīng)激等糖尿病形成的病理過程。Radojii等[16]研究發(fā)現(xiàn),GDM患者miR-27a水平明顯較健康人群高,且miR-27a水平與糖化血紅蛋白濃度呈正相關(guān),miR-27a具有診斷GDM的潛力。Choi等[17]也指出,miR-27a多態(tài)性可能是預(yù)測2型糖尿病風(fēng)險的潛在標(biāo)記。本研究發(fā)現(xiàn),外周血miR-27a水平在不良組患者中表達(dá)較高,高水平miR-27a是不良妊娠結(jié)局的危險因素,進(jìn)一步行Spearman相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,外周血miR-27a水平與不良妊娠結(jié)局發(fā)生呈正相關(guān),提示miR-27a水平上升可能加重GDM病情,促進(jìn)妊娠不良結(jié)局發(fā)生。

miR-146a-5p是一種多功能miR,參與免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、惡性腫瘤發(fā)病等多種病理過程[18]。本研究數(shù)據(jù)顯示,良好組外周血miR-146a-5p水平較不良組高,進(jìn)一步行l(wèi)ogistics多因素回歸分析、Spearman相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,miR-146a-5p為GDM患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的危險因素,外周血miR-146a-5p水平與不良妊娠結(jié)局發(fā)生呈負(fù)相關(guān),提示檢測miR-146a-5p水平可初步預(yù)測不良妊娠結(jié)局。分析原因在于,一方面,miR-146a-5p可調(diào)控細(xì)胞因子,監(jiān)管Toll樣受體(TLR)信號,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,其低表達(dá)會增加炎性因子分泌量,核因子-κB是重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,對炎性因子、生長因子、趨化因子等靶基因表達(dá)發(fā)揮調(diào)控作用,miR-146a-5p還可作用于核因子-κB通路,從而促進(jìn)糖尿病發(fā)生與發(fā)展;另一方面,miR-146a-5p可提高脂肪酸活性,促進(jìn)胰島β細(xì)胞凋亡,維持胰島素分泌功能,其水平異常下降易引發(fā)胰島功能障礙,加劇胰島素抵抗,進(jìn)而誘發(fā)不良妊娠結(jié)局[19-21]。另外,ROC曲線顯示,聯(lián)合預(yù)測的AUC、敏感度高于miR-27a、miR-146a-5p單一方法,進(jìn)一步說明外周血miR-27a、miR-146a-5p水平與GDM患者妊娠結(jié)局有關(guān),且各指標(biāo)聯(lián)合使用可提升預(yù)測價值。

綜上所述,外周血miR-27a、miR-146a-5p水平與不良妊娠結(jié)局發(fā)生有關(guān),且聯(lián)合檢測對妊娠結(jié)局具有較高預(yù)測價值,有助于GDM患者妊娠結(jié)局的早期判斷,為防治工作開展提供指導(dǎo),以減輕GDM對母嬰健康的損傷。但本研究存在納入病例數(shù)較少、納入病例具有一定隨機(jī)性等不足,后續(xù)有待增加樣本量深入研究,以提高所得結(jié)論的客觀性、科學(xué)性。

利益相關(guān)聲明:所有作者聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明:湯倩倩負(fù)責(zé)論文撰寫;張慶負(fù)責(zé)資料收集;王燕負(fù)責(zé)統(tǒng)計學(xué)分析;李愛萍負(fù)責(zé)項目指導(dǎo)、論文審校。