努爾麥麥提·葉爾遜 地力夏提·阿不都熱合曼 梁燦燦△

1.省部共建中亞高發(fā)病成因與防治國家重點實驗室,新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科 (新疆 烏魯木齊, 8300002) 2.省部共建中亞高發(fā)病成因與防治國家重點實驗室,新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血管甲狀腺外科

冠心病是指脂類物質(zhì)和炎癥細(xì)胞沉積在冠狀動脈血管壁導(dǎo)致冠狀動脈狹窄≥50%的一類疾病,是臨床上最常見的心血管疾病,可引起心肌缺血缺氧,甚至心肌梗死[1-3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指無過量飲酒史,但有其他明確的損肝因素所致,以彌漫性肝實質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪蓄積為主要臨床特征的病理綜合征[4-6]。目前二者已成為危害我國人民身體健康的常見病、多發(fā)病。相關(guān)文獻(xiàn)證實,血脂代謝紊亂、全身低度炎癥反應(yīng)以及內(nèi)臟脂肪堆積是冠心病和NAFLD共同的危險因素,并且NAFLD是冠心病的易患因素,可明顯增加冠心病患者不良心血管事件的發(fā)生率[7-9]。miRNA-122是最早發(fā)現(xiàn)的具有組織特異性的一種miRNA,其編碼基因位于第18號染色體, 在肝組織高豐度特異性表達(dá)[10]。相關(guān)研究顯示,miRNA-122在NAFLD、非酒精性脂肪性肝炎、病毒性肝炎、肝癌等疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用[11,12]。本研究通過檢測冠心病合并NAFLD患者血清中miRNA-122表達(dá)水平,探討其在此類患者血清中的表達(dá)以及臨床意義,有助于幫助臨床醫(yī)師早期識別冠心病合并NAFLD的高?；颊?采取及時有效治療措施,降低冠心病患者不良心血管事件發(fā)生率,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年1月至2022年12月在我院就診的200例冠心病患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):基線資料完整;冠心病診斷符合2019版冠心病診斷與治療指南中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[13];NAFLD的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2018版《非酒精性脂肪性肝病防治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[14]。排除標(biāo)準(zhǔn):過量飲酒史;合并其他慢性病毒性肝炎、自身免疫性肝病、藥物性肝炎、遺傳性肝病、肝硬化、肝癌等;合并除冠心病外其他心臟疾病如風(fēng)濕性心臟病、主動脈夾層、心肌炎、肥厚梗阻性心肌病、擴(kuò)張性心肌病、肺心病、感染性心內(nèi)膜炎、心力衰竭等;肺部感染、肺栓塞、慢性阻塞性肺疾病;妊娠期及哺乳期婦女。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn),所有患者以及家屬均知情同意(倫理審批號:202012-06)。

1.2 臨床資料收集 收集患者入院后一般臨床資料,包括年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病、 冠心病類型、 SYNTAX評分、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、空腹血糖、空腹胰島素以及肝臟硬度, 計算患者胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(IU/L)/22.5。

1.3 血清miRNA-122檢測 所有患者入院均抽取空腹靜脈血5 ml,標(biāo)本離心后取上清液,-70℃保存?zhèn)溆?。采用實時熒光定量PCR法檢測患者血清miRNA-122的表達(dá)情況。提取血清中的總RNA,反應(yīng)體系為:模板2 μl,特異引物2 μl,緩沖液10 μl和無RNA酶的滅菌水4 μl。擴(kuò)增條件:預(yù)變性95℃ 10 min;95℃ 10 s,60℃ 20 s,72℃ 15 s,45～70個循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)入熔解曲線分析。反應(yīng)體系及反應(yīng)條件嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。miRNA水平用閾值循環(huán)(Ct值)表達(dá),采用2-△△Ct法評估 miR-122 的相對表達(dá)量,以2-△Ct代表每組細(xì)胞的表達(dá)量,并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行統(tǒng)計分析[11]。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般臨床資料比較 見表1。

表1 兩組患者一般臨床資料比較

2.2 影響冠心病患者合并NAFLD的多因素Logistic回歸分析 以冠心病患者是否合并NAFLD(是=1,否=0)作為因變量,以單因素分析中有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo):SYNTAX評分(實際值)、TG(實際值)、TC(實際值)、LDL(實際值)、CRP(實際值)、空腹血糖(實際值)、HOMA-IR(實際值)以及miRNA-122(實際值)作為自變量,多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,SYNTAX評分、HOMA-IR以及miRNA-122為影響冠心病患者合并NAFLD的獨立預(yù)測因素(P<0.05),其中miRNA-122每減少1個單位,冠心病患者合并NAFLD的風(fēng)險增加1.532倍(OR:0.395, 95%CI: 0.178～0.789, P=0.001 ),見表2。

表2 影響冠心病患者合并NAFLD的多因素Logistic回歸分析

2.3 預(yù)測冠心病患者合并NAFLD的列線圖模型的構(gòu)建 基于多因素分析獲得的3個獨立預(yù)測因素:SYNTAX評分、HOMA-IR以及miRNA-122,構(gòu)建預(yù)測冠心病患者合并NAFLD的列線圖模型:P=1/(1+e-x)。P 代表冠心病患者合并NAFLD的概率,數(shù)值越接近1,冠心病患者合并NAFLD的概率越大,e為自然常數(shù),X可通過下列公式計算得出:X=0.778×SYNTAX評分+0.732×HOMA-IR-0.867×miRNA-122-0.914,例如1位冠心病患者有如下特征:SYNTAX評分為40分,HOMA-IR為4.1,miRNA-122為1.9,則3個特征性變量的得分分別為49分、40分、75分,則該患者的列線圖總評分為164分,該冠心病患者合并NAFLD的概率為75.4%,見圖1。

圖1 預(yù)測冠心病患者合并NAFLD的列線圖模型

2.4 列線圖模型的內(nèi)部驗證 列線圖模型的校準(zhǔn)曲線顯示,冠心病患者合并NAFLD概率的預(yù)測值與實際觀測值符合度良好(P>0.05),ROC分析結(jié)果顯示,SYNTAX評分、HOMA-IR以及miRNA-122預(yù)測冠心病患者合并NAFLD的曲線下面積(AUC)分別為0.775(95%CI: 0.721～0.856)、0.752(95%CI: 0.711～0.813)以及0.822(95%CI: 0.784～0.873),3者聯(lián)合預(yù)測的AUC最大為0.918(95%CI: 0.878～0.959),見圖2、3。

圖2 列線圖模型的校準(zhǔn)曲線

圖3 預(yù)測冠心病患者合并NAFLD的ROC曲線

2.5 冠心病合并NAFLD患者miRNA-122與臨床指標(biāo)的相關(guān)性 按冠心病合并NAFLD患者miRNA-122的中位數(shù)將100例冠心病合并NAFLD患者劃分為高miRNA-122組62例(62.0%)和低miRNA-122組38例(38.0%),低miRNA-122組患者TG、TC、LDL、肝臟硬度、SYNTAX評分、CRP以及HOMA-IR明顯高于高miRNA-122組(P<0.05),見表3。

表3 冠心病合并NAFLD患者miRNA-122與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

NAFLD病變初期多屬于單純脂肪性肝病,隨著糖脂代謝紊亂以及胰島素抵抗水平的加重,肝臟氧化通路中氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)物增加,導(dǎo)致線粒體功能紊亂,促進(jìn)肝細(xì)胞炎癥壞死、凋亡與肝纖維化[8,9];另一方面,NAFLD患者長期的糖脂代謝紊亂以及胰島素抵抗還可導(dǎo)致冠狀動脈血管脂質(zhì)沉積,斑塊內(nèi)大量炎癥細(xì)胞浸潤,炎癥細(xì)胞分泌和釋放的炎癥因子引發(fā)的炎癥反應(yīng)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,進(jìn)一步促進(jìn)大量炎性因子表達(dá)和釋放,一氧化氮釋放減少,血小板與白細(xì)胞數(shù)量增加,形成高凝狀態(tài),從而導(dǎo)致冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成[15]。相關(guān)研究證實,NAFLD可促進(jìn)冠心病的發(fā)生、發(fā)展,與正常人群相比,NAFLD患者冠心病的發(fā)生率明顯增加[16]。還有研究證實[17],NAFLD與冠心病患者冠狀動脈病變的嚴(yán)重程度明顯相關(guān),相較于單純冠心病患者,冠心病合并NAFLD患者的冠狀動脈多支病變、重度狹窄、完全閉塞比例以及SYNTAX評分明顯升高。而本研究結(jié)果顯示,SYNTAX評分、HOMA-IR為影響冠心病患者合并NAFLD的獨立預(yù)測因素,與之前的研究結(jié)果基本一致[17,18]。

miRNA-122作為近年來新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因,特異表達(dá)于肝臟組織中,并且與病毒性肝炎、NAFLD、肝纖維化、肝硬化、肝癌等肝臟相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[19,20]。相關(guān)研究證實,miRNA-122作為機(jī)體重要的糖脂代謝的調(diào)控因子,通過直接或間接地調(diào)節(jié)膽固醇、甘油三酯和脂肪酸的合成與輸出,在肝臟脂質(zhì)代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用[21-23]。Refeat等[24]的小鼠動物模型實驗發(fā)現(xiàn),相較于對照組小鼠,miRNA-122轉(zhuǎn)基因小鼠血清TG、TC以及LDL表達(dá)水平明顯降低,而HDL表達(dá)水平明顯升高,而對照組小鼠有向NAFLD和脂肪性肝炎發(fā)展的趨勢,由此得出結(jié)論:miRNA-122能夠降低膽固醇相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而使膽固醇合成減少,并且抑制膽汁酸和脂肪酸氧化,在肝臟脂質(zhì)代謝調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Friedrich等[25]的研究在miRNA-122缺失的小鼠肝臟發(fā)現(xiàn)大量炎癥浸潤細(xì)胞,這種炎癥浸潤細(xì)胞具有單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的形態(tài),可以產(chǎn)生大量的炎癥因子如白細(xì)胞介素-6(IL-6)、IL-8、IL-1β以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α),促進(jìn)肝細(xì)胞炎癥壞死、凋亡和肝纖維化。Liu等[26]的研究發(fā)現(xiàn),相較于健康人群,NAFLD患者血清miRNA-122表達(dá)水平降低,并且肝細(xì)胞對TC和TG的調(diào)節(jié)能力也隨之降低,由于長期過多的脂類物質(zhì)在肝細(xì)胞中堆積,此類患者發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝癌的風(fēng)險也明顯增加。而本研究結(jié)果顯示,miRNA-122為影響冠心病患者合并NAFLD的獨立預(yù)測因素,其中miRNA-122每減少1個單位,冠心病患者合并NAFLD的風(fēng)險增加1.532倍,提示冠心病患者血清miRNA-122表達(dá)水平越低,其并發(fā)NAFLD的風(fēng)險越高。本研究證實了血清miRNA-122可以作為識別冠心病患者合并NAFLD的敏感性和特異性指標(biāo)。

此外,本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),在冠心病合并NAFLD患者中,低miRNA-122組患者TG、TC、LDL、肝臟硬度、SYNTAX評分、CRP以及HOMA-IR明顯高于高miRNA-122組,提示冠心病合并NAFLD患者血清miRNA-122表達(dá)水平較低者,其血脂水平、炎癥因子以及胰島素抵抗水平較高,冠狀動脈病變程度和肝纖維化程度較重,考慮其可能原因為:miRNA-122表達(dá)水平較低者,體內(nèi)血脂水平和胰島素抵抗水平較高,炎癥反應(yīng)較重,以上因素共同促進(jìn)了肝纖維化和冠狀動脈粥樣硬化病變的進(jìn)展[27]。

綜上所述,基于SYNTAX評分、HOMA-IR以及miRNA-122構(gòu)建的列線圖模型對于冠心病患者合并NAFLD具有較高的預(yù)測價值,冠心病合并NAFLD患者中血清miRNA-122表達(dá)水平較低者,其肝纖維化和冠狀動脈粥樣硬化病變程度較重。