陳 躍 張紅強(qiáng) 王佳慧 張佳美 曹福敏

1. 山西振東制藥股份有限公司，山西長(zhǎng)治，047100；

2. 山西振東健康護(hù)理科技股份有限公司，山西長(zhǎng)治，047100

頭皮脂溢性皮炎（seborrheic dermatitis）是一種慢性復(fù)發(fā)性炎癥性頭皮疾病[1]，它的特點(diǎn)是生成紅斑或輕至中度的鱗片，引起頭皮油膩和片狀頭皮屑并伴隨著瘙癢。在成年人群中，其患病率高達(dá)5%，選擇去屑洗發(fā)產(chǎn)品是人們解決這一煩惱的首選手段。

二硫化硒通過減少細(xì)胞生成，抑制核分裂，降低細(xì)胞功能等作用機(jī)制對(duì)抑制皮脂形成和殺滅真菌具有顯著作用，且對(duì)細(xì)菌和寄生蟲也有明顯抑制作用[2]。二硫化硒洗劑（2.5%）對(duì)多種真菌感染性皮膚病均有良好的效果[3]，如對(duì)脂溢性皮炎、接觸性皮炎等[4]具有效果顯著、不良反應(yīng)少、應(yīng)用廣泛等優(yōu)勢(shì)[5]。

二硫化硒已收錄在《已使用化妝品原料名稱目錄（2021版）》[6]，其限用添加量為1%。本文旨在考察含1%二硫化硒洗發(fā)水的人體試用去屑止癢性能和抑菌測(cè)試。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 原料

瓜爾膠羥丙基三甲基氯化銨、檸檬酸、月桂醇聚醚硫酸酯鈉（有效物含量70%）、丙烯酸（酯）類共聚物、椰油?；谆；撬徕c（有效物含量30%）、椰油酰胺丙基甜菜堿（有效物含量30%）、椰油酰胺MEA（有效物含量100%）、丙二醇，上?？埔?qū)崢I(yè)有限公司；PPG-3 辛基醚，湖北巨勝科技有限公司；二硫化硒，海南君森化學(xué)科技有限公司。

1.2 菌株

糠秕馬拉色菌，白色念珠菌均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。

1.3 試劑

改良Leeming-Notman培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基、橄欖油均由北京三藥科技開發(fā)公司提供，濾紙由通用電氣生物科技有限公司提供。

1.4 儀器

頭皮影像分析儀（放大倍數(shù)：50倍），集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（型號(hào)DF-101S，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），分析天平（精度：0.000 1 g），立式壓力蒸汽滅菌器（型號(hào)YXQ-LS-100A，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司），培養(yǎng)箱（型號(hào)LRHS-250BF，上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），游標(biāo)卡尺，超聲波破碎儀，濁度計(jì)，冰箱。

1.5 樣品配制方法

按表1的配方及以下方法配置洗發(fā)水。

表1 二硫化硒去屑洗發(fā)水配方

將A相依次加入瓜爾膠羥丙基三甲基氯化銨先用純化水分散，邊攪拌邊加熱，直至溶解；加熱至80 ℃，依次加入B相，直至完全溶解，攪拌均勻；降溫至60 ℃，將C相混合用均質(zhì)機(jī)進(jìn)行有效分散后加入，攪拌均勻；降溫至35 ℃，最后加入D相，直至完全溶解，攪拌均勻，取樣檢測(cè)合格，過濾出料。

2 試驗(yàn)方法

2.1 抑菌實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 樣品處理

將樣品用PBS溶液稀釋，作為檢測(cè)樣品母液，稀釋后樣品濃度為50%。

2.1.2 測(cè)試方法

將20 μL檢測(cè)樣品根據(jù)實(shí)際使用濃度滴加在濾紙片上，干燥后備用：對(duì)于溶出性固體試樣，制成直徑為5 mm、厚不超過4 mm的圓片。用無(wú)菌棉拭子蘸取濃度為（5.0×105～5.0×106） CFU/mL的試驗(yàn)菌懸液，在培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每次試驗(yàn)貼放1個(gè)染菌平板，每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片，1片陰性對(duì)照樣片，共5片。蓋好平板，置（30±1） ℃培養(yǎng)72 h后觀察結(jié)果，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑。

2.1.3 質(zhì)控

分別以糠秕馬拉色菌和白念珠菌為指示菌，設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組和樣品組，每組設(shè)計(jì)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，采用抑菌環(huán)法，游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈。

2.1.4 評(píng)價(jià)方法

根據(jù)形成的抑菌圈大小對(duì)洗發(fā)水樣品的去屑功效進(jìn)行評(píng)價(jià)，參照WS/T 650—2019《抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法》中抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，直徑大于7 mm者，具有抑菌作用。

陽(yáng)性結(jié)果：受檢樣品在一定濃度下可以抑制糠秕馬拉色菌的生長(zhǎng)，抑菌環(huán)直徑大于7 mm，且抑菌環(huán)越大代表該受檢樣品具有的去屑效果越好。

陰性結(jié)果：受檢樣品在一定濃度下可以抑制糠秕馬拉色菌的生長(zhǎng)，抑菌環(huán)直徑小于7 mm，代表該受檢樣品不具有去屑效果。

2.2 去屑功效評(píng)估

2.2.1 研究對(duì)象

隨機(jī)選取30名具有明顯頭皮屑、脂溢性皮炎等頭皮皮膚病患者作為受試者，年齡22～40歲，其中男性10名，女性20名。排除標(biāo)準(zhǔn)：①1個(gè)月內(nèi)參加藥物臨床試驗(yàn)或其他試驗(yàn)者；②一周內(nèi)使用對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響的洗發(fā)水者；③1個(gè)月內(nèi)有外用或內(nèi)服抗真菌藥物或糖皮質(zhì)激素者。退出標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)期間因妊娠、不良反應(yīng)等不符合研究對(duì)象要求的受試者。試驗(yàn)在開展前均已通過長(zhǎng)治市上黨區(qū)中醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審，同時(shí)所有受試者在充分了解整個(gè)試驗(yàn)過程及潛在的風(fēng)險(xiǎn)后，自愿簽署知情同意書。

2.2.2 測(cè)試方法

選取符合測(cè)試條件受試者30名，按個(gè)人洗發(fā)水使用習(xí)慣連續(xù)使用二硫化硒洗發(fā)水持續(xù)28 d。在使用前、14 d、28 d使用頭皮分析儀器觀察變化情況。受試者在測(cè)試周期完成后對(duì)頭屑、頭癢的癥狀進(jìn)行使用前后的對(duì)比，依照自身情況對(duì)二硫化硒洗發(fā)水進(jìn)行評(píng)分。

2.2.3 評(píng)估方法

判斷標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2 判斷標(biāo)準(zhǔn)

3 結(jié)果

3.1 樣品體外糠秕馬拉色菌抑菌結(jié)果

糠秕馬拉色菌抑菌結(jié)果見表3。

表3 糠秕馬拉色菌抑菌結(jié)果

由表3可看出，被檢樣品三次重復(fù)試驗(yàn)中，陰性對(duì)照均無(wú)抑菌環(huán)產(chǎn)生，被檢樣品抑菌環(huán)直徑均大于7 mm，判為有抑菌效果，表明檢測(cè)樣品具有去屑功效。

3.2 樣品體外白念珠菌抑菌結(jié)果

白念珠菌抑菌結(jié)果見表4。

表4 白念珠菌抑菌結(jié)果

由表4可看出，被檢樣品三次重復(fù)試驗(yàn)中，陰性對(duì)照均無(wú)抑菌環(huán)產(chǎn)生，被檢樣品抑菌環(huán)直徑均大于7 mm，判為有抑菌效果，表明檢測(cè)樣品具有去屑功效。

3.3 圖像分析

在使用前、使用后14 d、28 d分別使用頭皮影像分析儀觀察頭屑的變化情況（表5）。

表5 其中4位受試者頭屑頭皮影像分析儀的圖像分析

從表5可看出，通過頭皮影像分析儀觀察有改善的受試者頭皮隨著使用時(shí)間的增加，受試者頭屑減少。

3.4 去屑止癢效果評(píng)價(jià)

采用人體試用評(píng)價(jià)，并對(duì)使用樣品28 d后的試用情況進(jìn)行回訪比較，評(píng)價(jià)結(jié)果見表6。

表6 樣品去屑止癢效果評(píng)價(jià)

由表6可以看出，二硫化硒洗發(fā)水較市場(chǎng)去屑洗發(fā)水對(duì)頭屑和頭癢均有更顯著的效果，使用二硫化硒洗發(fā)水28 d后，高達(dá)93.3%的受試者感到頭屑癥狀明顯減輕或消失，高達(dá)90%的受試者認(rèn)為樣品止癢效果突出。

4 討論

本研究采用與陰性對(duì)照相比，受檢樣品濃度在50%時(shí)，對(duì)白念珠菌和糠秕馬拉色菌的抑菌環(huán)直徑均大于7 mm，證明對(duì)兩種菌都有抑菌作用，說(shuō)明該受檢樣品具有去屑效果。抑菌試驗(yàn)方法為體外非生物系統(tǒng)模型，相對(duì)于機(jī)體而言，非生物系統(tǒng)沒有考慮機(jī)體的代謝和免疫等系統(tǒng)方面的影響，通過人體功效評(píng)價(jià)結(jié)果證明，使用二硫化硒洗發(fā)水的受試者連續(xù)使用28 d后，頭屑、頭癢現(xiàn)象有明顯改善，證明樣品具有去屑效果。