王 菲

青蛙王子（福建）嬰童護理用品有限公司，福建漳州，363005

覆盆子酮的別名：懸鉤子酮。CAS為5471-51-2，化學(xué)式為C10H12O2，熔點在82～83 ℃，不溶于水，主要應(yīng)用在食品香料中，也應(yīng)用在化妝品及皂的香精中[1]。覆盆子酮是《已使用化妝品原料目錄（2021年版）》清單中第02380號，其在淋洗類產(chǎn)品和駐留類產(chǎn)品中的最高歷史使用量都為0.4%[2]，是一種粒狀或白色針狀結(jié)晶。

近年來，隨著相關(guān)部門對化妝品防腐劑使用監(jiān)管力度加大，越來越多的植物防腐劑成為配方師爭先恐后研究的重點，其中覆盆子酮也進入研究者的研究目錄中。朱會霞[3]的研究表明，覆盆子酮對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等具有抑制作用，并且覆盆子酮在pH值為4～8范圍內(nèi)時，抑菌作用是穩(wěn)定的。孔秋嬋等[4]的研究結(jié)果表明，覆盆子酮與1,2己二醇或苯氧乙醇復(fù)配，具有顯著的抑菌效果，可以滿足乳液和膏霜劑型防腐的需求。

目前，對覆盆子酮的檢測方法有高效液相色譜法-熒光法[5]、氣相色譜法[6]、分光光度法[7]及核磁共振內(nèi)標(biāo)法[8]等，但采用高效液相色譜法測定化妝品中覆盆子酮的含量還未有相關(guān)的研究。同時，覆盆子酮與4-（4-羥基苯基）-2-丁醇有相似的結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)可能會導(dǎo)致消費者皮膚患白斑病[9]。因此，開發(fā)一種采用高效液相色譜法測定化妝品中覆盆子酮的檢測分析方法具有重要的研究意義。

1 實驗部分

1.1 主要試劑與儀器

覆盆子酮，純度≥9 8.0 0%，Stanford Analytical Chemicals Inc.；甲醇，色譜純，西隴科學(xué)股份有限公司；純水，實驗室自制。

島津分析天平（AUY220），島津企業(yè)管理(中國)有限公司；HPLC（LC-15C），SHIMADZU儀器（蘇州）有限公司；超聲波清洗機（A K-031SD），深圳市鈺潔清洗設(shè)備制造中心；混勻器（XK90-A），江蘇新康醫(yī)療器械有限公司；離心機（80-1），江蘇科析儀器有限公司；純水機（ROEDI-250L），汕頭市正華達環(huán)?？萍加邢薰尽?/p>

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：采用shim-pack GWS C18，色譜柱的規(guī)格為：250 mm×4.6 mm×5 μm；

流動相：甲醇∶水（V/V）=40%∶60%；

流速：1.0 mL/min；

檢測波長：220 nm；

檢測器：二極管陣列檢測器（DAD）；

柱溫：30 ℃；

進樣量：10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取覆盆子酮標(biāo)準(zhǔn)品0.020 0 g用甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，配制成0.8 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液作為儲備液，并于4 ℃ 冰箱中儲存?zhèn)溆?。覆盆子酮?biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成濃度為8 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3 樣品溶液制備

將0.50～1.00 g（精確到0.000 1 g）的化妝品，精確稱取于具塞比色管（刻度10 mL）中，加入適量甲醇，置于混勻器內(nèi)，使試樣充分的混合分散，超聲提取20 min，離心，用甲醇定容到10 mL混勻后再用0.45 μm或0.22 μm濾膜過濾，供試樣品溶液備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相對測試的影響

覆盆子酮可溶于甲醇和乙腈中，且兩種溶劑對不同劑型的化妝品都具有較好的溶解分散性。研究了V（甲醇）∶V（水）和V（乙腈）∶V（水）不同混合比例對分離效果及檢測時間的影響，測試采用V（甲醇）∶V（水）＝30∶70、40∶60、50∶50為流動相，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以V（甲醇）∶V（水）＝50∶50為流動相時，分離效果較差，而以V（甲醇）∶V（水）＝30∶70作為流動相時，檢測時間較長，因此選擇流動相為V（甲醇）∶V（水）＝40∶60。同時以V（乙腈）∶V（水）＝40∶60為流動相時，分離效果和檢測時間與V（甲醇）∶V（水）＝40∶60相同，考慮到溶劑對實驗者安全的影響，最終選取流動相為V（甲醇）∶V（水）＝40∶60，其在試樣中的分離度可達3.167，理論塔板數(shù)可達20 558，拖尾因子可達1.120，覆盆子酮的色譜圖見圖1。

圖1 覆盆子酮對照品和樣品中覆盆子酮的色譜圖

2.2 檢測波長的選擇

覆盆子酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在1.2.1色譜條件下進行190～800 nm范圍內(nèi)的全掃描，從掃描的光譜可以看出，在220 nm附近覆盆子酮具有極強的紫外吸收能力，因此覆盆子酮的檢測波長選擇220 nm，光譜圖如圖2。

圖2 覆盆子酮全掃描吸收峰

2.3 溶劑和超聲時間的影響

2.3.1 提取溶劑的影響

在1.2.1的色譜條件下，選擇較難分散的膏霜類體系作為研究對象，將甲醇、乙腈和流動相作為溶劑來提取膏霜中的覆盆子酮，樣品制備過程參考1.2.3樣品溶液制備。實驗結(jié)果顯示，采用這三種溶劑分別有98.5%、99.0%和98.3%的提取率。這三種溶劑對膏霜中覆盆子酮的提取率相當(dāng)，因此選擇甲醇作為萃取溶劑。

2.3.2 提取時間的影響

由于膏霜體系的化妝品成分比較復(fù)雜，不易分散萃取，故選擇研究膏霜中覆盆子酮超聲萃取時間為10 min、15 min、20 min、25 min時對提取率的影響，實驗結(jié)果見圖3，結(jié)果顯示以超聲萃取20 min為宜。

圖3 超聲時間與膏霜中覆盆子酮的提取率的關(guān)系

2.4 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

將1.2.2中配置的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，取10 μL測試，按每個系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和峰面積，得到線性回歸方程（表1）。根據(jù)檢出限（LOD）是信噪比（S/N）為3時化合物的濃度，得到該方法對覆盆子酮的檢出限為2 μg/mL，定量限（LOQ）是信噪比（S/N）為10時化合物的濃度，得到該方法對覆盆子酮的定量限為8 μg/mL。因此可以滿足化妝品中覆盆子酮的最大添加量0.4%的檢測要求。

表1 覆盆子酮標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)系列濃度對應(yīng)的峰面積

2.5 精密度與回收率

水劑類、乳液類、膏霜類為空白加標(biāo)基質(zhì)，加標(biāo)水平回收率和精密度實驗采用3個濃度（16、66、110 μg/mL），實驗結(jié)果如表2所示。由表2可知，3個濃度加標(biāo)的回收率為95.3%～117.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.04%～2.45%（n＝3），表明該方法準(zhǔn)確度、精密度較好。

表2 覆盆子酮（n＝3）的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.6 重復(fù)性實驗

平行制備6份濃度為40 μg/mL的供試樣品溶液，按1.2.3的方法進行處理，6份平行供試品溶液對應(yīng)的峰面積如表3。以6次測定值來考察方法重復(fù)性，RSD為0.2%（n＝6），說明該方法具有良好的重復(fù)性。

表3 6份濃度為40 μg/mL的供試樣品溶液的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.7 實際樣品檢測

購買市面上標(biāo)簽上顯示含有覆盆子酮的三種劑型的潔面泡沫、膏霜、爽膚水并測試其覆盆子酮的含量。樣品按照1.2.3進行處理。測得覆盆子酮的含量分別為0.11%、0.30 %和0.12%。

3 結(jié)論

采用H P L C 法測定化妝品中覆盆子酮的含量，甲醇為萃取溶劑，超聲提取20 min，分離采用shim-pack GWS C18柱，二極管陣列檢測器（DAD）檢測。該分析方法簡單易操作，檢出限、定量限、回收率、精密度等均符合檢測要求。