魏文艷

(天水市動(dòng)物衛(wèi)生技術(shù)工作站,甘肅 天水 741020)

虎紅平板凝集試驗(yàn)是一種經(jīng)典的血清凝集試驗(yàn),靈敏度高、價(jià)格便宜、操作方便的優(yōu)點(diǎn)。常用于布病的檢測(cè)。虎紅平板凝集試驗(yàn)的意義是輔助診斷布魯菌病,當(dāng)布魯菌感染動(dòng)物之后,如果急性感染,虎紅平板凝集試驗(yàn)可能出現(xiàn)陽性的表現(xiàn),陽性率可以達(dá)到80%～90%。如果是慢性感染,只有30%～60%會(huì)出現(xiàn)陽性,所以比較大的意義是篩查。

1 虎紅平板實(shí)驗(yàn)檢測(cè)布病存在的問題

1.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果受實(shí)驗(yàn)操作者的主觀影響較大

虎紅平板雖然實(shí)驗(yàn)步驟相比較于動(dòng)物的其它實(shí)驗(yàn)步驟是相對(duì)簡(jiǎn)單的一個(gè)實(shí)驗(yàn),但對(duì)實(shí)驗(yàn)者的操作的手法和主觀的判斷的能力要求比直觀能看出結(jié)果的實(shí)驗(yàn)要高的多,如果操作者受經(jīng)驗(yàn)的影響,對(duì)出現(xiàn)的假陽性和弱陽性不能夠準(zhǔn)確的作出判斷,那么可能會(huì)出現(xiàn)較大程度的誤判。同時(shí)這個(gè)實(shí)驗(yàn)由于很大程度依賴于實(shí)驗(yàn)者,那么由于主觀上對(duì)出現(xiàn)的某種結(jié)果有偏好或者偏見的,對(duì)同一份檢測(cè)血清兩個(gè)檢測(cè)者可能會(huì)出現(xiàn)完全不同的兩種結(jié)果也就不足為怪了。這樣虎紅平板實(shí)驗(yàn)快速檢測(cè)的目的達(dá)到了,但結(jié)果的準(zhǔn)確性不能夠保證,這樣對(duì)大面積篩查布病帶來不利的影響。

1.2 實(shí)驗(yàn)者存在感染的風(fēng)險(xiǎn)

在傳統(tǒng)的虎紅平板實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)用的板子是玻璃的,用玻璃的板子一來是可能重復(fù)的使用,節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本,二來是玻璃的板子便于實(shí)驗(yàn)者觀察實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,受光線,溫度,濕度的影響較小,是理想的實(shí)驗(yàn)器材。但是玻璃板子邊緣較鋒利,不注意會(huì)割破手套把手劃傷,布病實(shí)驗(yàn)中有傷口感染的風(fēng)險(xiǎn)是呈幾何數(shù)量增加的。還有在洗玻璃板子的過程中,由于玻璃上感染了陽性的血清,并且作過的板子必須清洗干凈,清洗不干凈會(huì)對(duì)下一板子的血清造成不必要的干擾,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此在清洗的過程中沖洗的水流稍不注意會(huì)濺到清洗者的面部或者其它部位增加了實(shí)驗(yàn)者的感染的風(fēng)險(xiǎn),一旦感染布病對(duì)人體的傷害是極大的。

1.3 實(shí)驗(yàn)過程中不設(shè)立對(duì)照組

虎紅平板有有些操作者對(duì)陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為只有出現(xiàn)雪花狀的就是布病的陽性,其它的都可以判定為陰性。但是由于血清和試劑批次的不同,檢測(cè)結(jié)果存在微小的差異,不設(shè)立對(duì)照組憑經(jīng)驗(yàn)來判斷,可能出現(xiàn)較多的假陽性,同時(shí)對(duì)弱陽性由于沒有對(duì)照主觀上判斷為正常,直接會(huì)影響整體篩查的結(jié)果。

2 改進(jìn)的措施

2.1 提高實(shí)驗(yàn)者的技能水平

虎紅平板實(shí)驗(yàn)雖然過程比較簡(jiǎn)單,但是操作過程中一些事項(xiàng)要注意才能更好的對(duì)陽性的篩選工作。其中注意的地方有必須將抗原和血清平衡至室溫,否則會(huì)降低實(shí)驗(yàn)的敏感性、輕柔振搖虎紅抗原試劑瓶,使其均質(zhì),吸取等體積的抗原加至靠近血清樣品的白色背景的反應(yīng)板上、血清和抗原的混合直徑為2 cm的圓形或者橢圓形狀為好、一次混合的樣品數(shù)不能太多,導(dǎo)致前面的結(jié)果沒有觀察,樣品已經(jīng)干了。觀察時(shí)在自然光下觀察,排隊(duì)其它燈光對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。在平時(shí)的實(shí)驗(yàn)中對(duì)一份血清做兩次,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比對(duì),只有不斷的學(xué)習(xí)中,才能最大可能的排除實(shí)驗(yàn)者主觀原因?qū)Y(jié)果的影響。

2.2 對(duì)實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行升級(jí)

在以前做虎紅平板實(shí)驗(yàn)中,由于受單位經(jīng)費(fèi)的影響和沒有可以代替玻璃板的器材,所以一直用玻璃板做實(shí)驗(yàn)。但是隨著單位對(duì)實(shí)驗(yàn)室重視,逐年對(duì)實(shí)驗(yàn)室的投入增加,經(jīng)費(fèi)比較充裕,同時(shí)現(xiàn)在也出現(xiàn)了可以替代玻璃板的一次的玻璃紙,價(jià)格便宜的優(yōu)點(diǎn),最主要的是不需要重復(fù)使用,這樣實(shí)驗(yàn)者不再清洗有布病陽性血清的玻璃板,最大限度的保證了實(shí)驗(yàn)者的身體健康。如果玻璃板清洗不干凈也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成不必要的干擾,而一次性的玻璃紙避免了上述情況的出現(xiàn)。

2.3 在實(shí)驗(yàn)的過程中設(shè)立陰陽性的對(duì)照組

在做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,不管實(shí)驗(yàn)結(jié)果在不做對(duì)照的情況下多么明顯的可以判斷出,但是如果實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程中要求設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,那么必須嚴(yán)格按照要求設(shè)立對(duì)照組。在虎紅平板的實(shí)驗(yàn)中只有布病是強(qiáng)陽性的情況下結(jié)果很明顯的可以看出,可是由于血清和試劑的不同,實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)表現(xiàn)出差異,只有設(shè)立陰陽性對(duì)照組,才能對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的假陽性和弱陽性作出準(zhǔn)確的判斷。這樣才能夠在大范圍的篩選中保證篩查出陽性病例。3虎紅平板和試管凝集實(shí)驗(yàn)兩者互用使檢測(cè)高效準(zhǔn)確虎紅平板在大規(guī)模的篩杳陽性病例中的不二選擇,在工作中改進(jìn)出現(xiàn)的問題,那么在陽性可以快速的發(fā)現(xiàn)并且處置,對(duì)虎紅平板實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的假陽性和判斷不準(zhǔn)的樣品,可以用更加精細(xì)的試管凝集實(shí)驗(yàn)再次檢測(cè),虎紅平板和試管凝集實(shí)驗(yàn)兩者相互使用,那么實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性將大大的提高。讓布病的凈化工作快速、準(zhǔn)確。