王雪婷 鄭 斌

乙二胺四乙酸(EDTA)是一種重要的絡(luò)合劑,被廣泛應(yīng)用于生活中的各方面[1-5]。次氮基三乙酸又稱氨三乙酸、氮川三乙酸,能與各種金屬離子形成絡(luò)合物。乙二胺四乙酸二鈉生產(chǎn)過(guò)程中排出的廢水中含有少量的EDTA、次氮基三乙酸(NTA)、羥基乙酸及甲酸等有機(jī)雜質(zhì),會(huì)造成水污染[6],其中,EDTA在環(huán)境中難以被生物降解,會(huì)對(duì)黏膜、上呼吸道、眼睛及皮膚產(chǎn)生刺激作用[7];NTA進(jìn)入人體會(huì)有誘發(fā)癌癥的風(fēng)險(xiǎn),且NTA及其鈉鹽對(duì)胎兒有致畸性[8]。長(zhǎng)期飲用含EDTA、NTA的水可能會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生不良影響[9]。

目前,EDTA的檢測(cè)方法主要有滴定法、氣相色譜法、離子色譜法、高效液相色譜法和液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法等[10-12]。滴定法無(wú)法對(duì)兩種物質(zhì)進(jìn)行同時(shí)測(cè)定,很難將EDTA絡(luò)合物與其他絡(luò)合物分開,誤差大、操作繁瑣,而且還需要基準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)定;氣相色譜法則需要對(duì)NTA進(jìn)行酯化使其具備揮發(fā)性后方可進(jìn)行測(cè)定,處理過(guò)程比較復(fù)雜,且衍生效率會(huì)影響分析的準(zhǔn)確度,檢出限達(dá)不到要求;采用離子色譜法分析NTA簡(jiǎn)單易行,主要是由于NTA易溶于水,且以離子形式存在于水溶液中,但目前未見離子色譜法同時(shí)測(cè)定飲用水中EDTA和NTA的相關(guān)研究,且離子色譜柱的價(jià)格昂貴;而液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法的測(cè)定成本較高。液相色譜法是目前檢測(cè)食品中EDTA含量最多的方法,但有關(guān)NTA的檢測(cè)研究卻較少[13-15]。試驗(yàn)擬針對(duì)水中EDTA和NTA的檢測(cè)方法進(jìn)行研究,以期為生活用水的檢測(cè)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

水樣:市售礦泉水;

液相色譜儀:U3000型,配DAD檢測(cè)器,賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;

電子天平:BSA02S型,賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;

離心機(jī):H2050R型,長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司;

渦旋振蕩器:MS3型,德國(guó)艾卡公司;

超聲波清洗機(jī):KQ-800DE型,昆山市超聲儀器有限公司;

pH計(jì):PB-10型,精度為0.01,賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;

色譜柱:Thermo-C18(4.6 mm×250 mm),賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司。

1.2 試劑

配制溶液用水:GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水;

乙二胺四乙酸(EDTA)、次氮基三乙酸(NTA):上海安譜科技股份有限公司;

甲醇:色譜純,上海安譜科技股份有限公司;

鹽酸、磷酸(H3PO4):優(yōu)級(jí)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;

甲酸:色譜純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;

四丁基溴化銨、乙酸鈉、三氯化鐵:分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

(1) 10 mmol/L三氯化鐵溶液:稱取0.165 5 g三氯化鐵溶于90 mL水中,加入1.0 mL鹽酸,轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,用水定容,混勻,該溶液可保存6個(gè)月。

(2) 0.22 mmol/L三氯化鐵溶液:吸取220 μL濃度為10 mmol/L的三氯化鐵溶液于10 mL容量瓶中,加水定容,搖勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。

(3) 磷酸緩沖溶液(pH 2.5):稱取6.071 g一水合磷酸二氫鈉于100 mL容量瓶中,加水超聲溶解,定容,用少量磷酸溶液(50%)調(diào)節(jié)pH值至2.5。

(4) 流動(dòng)相B:稱取3.04 g一水合磷酸二氫鈉和0.65 g四丁基溴化銨于1 000 mL容量瓶中,加900 mL水超聲溶解,加入1.0 mL濃度為10 mmol/L的三氯化鐵溶液,定容,用少量磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

(1) EDTA和NTA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別稱取約10 mg的EDTA和NTA標(biāo)準(zhǔn)品,用水溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中,得質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)液瓶中,4 ℃貯藏備用。

(2) EDTA和NTA標(biāo)準(zhǔn)溶液:分別吸取100 μL EDTA和NTA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶,制備質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液,將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液稀釋,配制成質(zhì)量濃度為0.1,0.2,0.4,0.8,1.0,2.0 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.3 試樣處理 取1.0 mL水樣于1.5 mL棕色進(jìn)樣小瓶中,加50 μL濃度為0.22 mmol/L三氯化鐵溶液和50 μL磷酸緩沖溶液,渦旋混勻,靜止放置衍生2 h,過(guò)0.22 μm水相濾膜后上液相色譜測(cè)定。以空白水樣品進(jìn)行空白試驗(yàn)。

1.3.4 儀器參數(shù)及測(cè)定條件 色譜條件:色譜柱為Thermo-C18(250 mm×4.6 mm);檢測(cè)器波長(zhǎng)258 nm;柱溫30 ℃;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量100 μL;流動(dòng)相A為甲醇,流動(dòng)相B為0.2 mmol/L四丁基溴化銨—磷酸緩沖溶液(pH 2.5);梯度洗脫程序:0～2.00 min,90% B;2.00～5.00 min,60% B;5.00～7.00 min,20% B;7.00～10.10 min,90% B;10.10～12.00 min,90% B。

1.3.5 方法學(xué)考察 分別取質(zhì)量濃度為0.1,0.2,0.4,0.8,1.0,2.0 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1.0 mL,加入50 μL濃度為0.22 mmol/L的氯化鐵溶液和50 μL磷酸緩沖溶液,渦旋混勻,靜止放置2 h后上液相色譜測(cè)定。采用外標(biāo)法定量,以待測(cè)物化合物濃度為橫坐標(biāo),待測(cè)物化合物峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算線性方程,考察EDTA和NTA的線性關(guān)系。EDTA和NTA的加標(biāo)水平均為0.1,0.4,1.0 mg/L,每個(gè)水平重復(fù)6次,對(duì)方法的回收率、重復(fù)性和精密度進(jìn)行考察。

1.3.6 數(shù)據(jù)分析 通過(guò)對(duì)方法學(xué)的考察,對(duì)生活飲用水中EDTA和NTA的含量進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 衍生試劑的選擇

Wang等[16]研究發(fā)現(xiàn),EDTA與金屬離子形成螯合物的條件穩(wěn)定常數(shù)順序?yàn)镸o6+>Bi3+>Fe3+>Cu2+>Zn2+>Al3+>Fe2+>Mn2+>K+>Ca2+>Mg2+,而NTA與金屬離子形成螯合物的條件穩(wěn)定常數(shù)順序?yàn)镕e3+>Hg2+>Cu2+>Al3+>Zn2+>Co2+>Mn2+>Ca2+>Mg2+,相比之下,Fe3+與EDTA、NTA更容易形成絡(luò)合物;魏峰等[17]研究發(fā)現(xiàn),EDTA、NTA可以與多種金屬離子形成穩(wěn)定的絡(luò)合物,所形成的絡(luò)合物可以發(fā)生配位場(chǎng)躍遷,紫外吸收強(qiáng)度增大且吸收范圍發(fā)生紅移,因而可以提高檢測(cè)的靈敏度,達(dá)到檢測(cè)所需檢出限要求,與其他金屬離子相比,Fe3+形成的螯合物比較穩(wěn)定,與GB 5009.287—2016中使用的衍生試劑一致。因此,試驗(yàn)選擇三氯化鐵與EDTA、NTA絡(luò)合。由于高濃度的三氯化鐵溶液絡(luò)合后產(chǎn)生的雜峰響應(yīng)高,經(jīng)試驗(yàn)優(yōu)化后選擇0.22 mmol/L三氯化鐵溶液作為衍生試劑。為減小溶劑效應(yīng),在加入衍生試劑時(shí)加入流動(dòng)相中使用的磷酸鹽緩沖液,可以提升檢測(cè)物質(zhì)的靈敏度。

2.2 儀器參數(shù)與測(cè)定條件

2.2.1 色譜柱的選擇 選用Athena HILIC、Thermo-C18兩種色譜柱進(jìn)行測(cè)試。由圖1可知,Athena HILIC得到的色譜峰型較差,而Thermo-C18對(duì)EDTA和NTA均有較好的分離效果,且色譜峰型良好。因此,選擇Thermo-C18作為分離色譜柱。

圖1 EDTA和NTA的液相色譜分離圖

2.2.2 流動(dòng)相優(yōu)化 試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),未使用離子對(duì)試劑,只采用甲醇和水作為流動(dòng)相時(shí),通過(guò)液相色譜儀分析得到的峰形較差且響應(yīng)較低,可能是目標(biāo)物在該條件下的穩(wěn)定性差,與色譜柱填料間的作用力加大而難以洗脫,因此無(wú)法對(duì)EDTA、NTA進(jìn)行直接檢測(cè)。GB 5009.278—2016中使用的流動(dòng)相為四丁基溴化銨—乙酸鈉溶液(V四丁基溴化銨∶V乙酸鈉為85∶15),等度洗脫分離,適用EDTA一種物質(zhì)的分離。而NTA是生產(chǎn)EDTA過(guò)程中的雜質(zhì),二者性質(zhì)相似,更不易分離。故試驗(yàn)采用梯度程序進(jìn)行洗脫分離,由于高濃度四丁基溴化銨溶液會(huì)導(dǎo)致液相色譜系統(tǒng)污染幾率增加且不易清洗,因此,選擇四丁基溴化銨—磷酸緩沖溶液濃度為0.2 mmol/L,并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5,此條件下,兩種目標(biāo)物的分離度較好。

2.2.3 波長(zhǎng)的選擇 EDTA和NTA在波長(zhǎng)為210 nm以上的紫外吸收能力較弱,不能滿足低含量檢測(cè)的需要。由圖2可知,EDTA和NTA絡(luò)合物的最大吸收波長(zhǎng)分別為260,248 nm,綜合考慮選取λ=258 nm作為二者的檢測(cè)波長(zhǎng),此時(shí)均能得到理想的色譜圖。

圖2 EDTA和NTA光譜圖

2.2.4 EDTA和NTA含量

(1) 線性方程:試驗(yàn)表明,EDTA和NTA在0.1～2.0 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好,線性方程分別為Y=2.658 5X-0.057,Y=2.664X-0.183,相關(guān)系數(shù)分別為0.999 5,0.999 2,符合GB/T 27404—2008中對(duì)相關(guān)系數(shù)的要求。

(2) 回收率、重復(fù)性和精密度:由表1可知,水樣中NTA的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.63%～5.71%,平均回收率為97.5%～109.2%;EDTA的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.79%～7.39%,平均回收率為99.4%～111.4%,兩種物質(zhì)的平行測(cè)定絕對(duì)差值未超過(guò)平均值的10%,說(shuō)明試驗(yàn)方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度,可滿足GB/T 27404—2008中對(duì)化合物回收率、重復(fù)性及精密度試驗(yàn)的要求。

表1 EDTA和NTA的回收率及精密度

空白水樣和加標(biāo)水樣的液相色譜如圖3所示。該方法前處理加入衍生試劑,為避免試劑引入目標(biāo)物,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,同時(shí)檢測(cè)空白水樣?？瞻姿畼又械暮枯^低,定量后EDTA和NTA含量<0.001 mg/L,可忽略不計(jì)。當(dāng)添加水平為1.0 mg/L時(shí),EDTA和NTA依次出峰,峰形完整,分離效果較好,定量結(jié)果準(zhǔn)確。

圖3 空白水樣和加標(biāo)水樣的液相色譜圖

(3) 檢出限和定量限:通過(guò)不斷稀釋標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液,得到次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸的檢出限為0.05 mg/L,定量限為0.1 mg/L,信噪比均>10,滿足定量要求。

3 結(jié)論

研究建立了一種生活飲用水中乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸的高效液相色譜測(cè)定方法。結(jié)果表明,乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸在0.1～2.0 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)分別為0.999 5,0.999 2;兩者的檢出限為0.05 mg/L,定量限為0.1 mg/L,加標(biāo)回收率>90%。該方法具有操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、靈敏度高的特點(diǎn)。后續(xù)可以增加對(duì)生活廢水中乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸含量的檢測(cè);亦可嘗試使用質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行試驗(yàn)以進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度。