范 超，張學(xué)開，張興志，唐黎明，李金龍，李瓊珍，王昭萍*

(1.中國海洋大學(xué)，海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266003；2.廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530021)

近年來，利用先進(jìn)生物技術(shù)和細(xì)胞遺傳技術(shù)改善生物品質(zhì)和養(yǎng)殖品種，是生物育種研究和養(yǎng)殖的熱點(diǎn)。其中，多倍體育種是通過增加染色體組的方法改變生物的遺傳基礎(chǔ)，從而培育出具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的優(yōu)良品種，是目前生物遺傳育種中具有較高應(yīng)用價(jià)值的領(lǐng)域之一。三倍體由于比二倍體多一套染色體組，一般生長速率較快、個(gè)體較大、糖原含量也更高。由于三倍體育性較差，因此在繁殖季節(jié)肥滿度較高，死亡率更低。

三倍體育種作為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)之一，在水產(chǎn)動物遺傳育種研究中也取得了較好的成績。從20 世紀(jì)70 年代開始，研究成功的海產(chǎn)魚類便已有十余種，如黃蓋鰈(Pseudopleuronectes yokohamae)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)、漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)、大西洋鮭(Salmo salar)、真鯛(Pagrus major)及黑棘鯛(Acanthopagrus schlegelii)等[1]。Stanley 等[2]于1981 年利用細(xì)胞松弛素B(Cytochalasin B，CB)首次成功誘導(dǎo)出的美洲牡蠣(Crassostrea virginica)三倍體。自此之后，研究人員對多種貝類進(jìn)行了三倍體研究，并成功誘導(dǎo)出三倍體。如利用CB、6-DMAP 等藥物通過化學(xué)方法誘導(dǎo)得到的三倍體貝類有長牡蠣(C.gigas)[3-5]、海灣扇貝(Argopecten irradians)[6]、蝦夷扇貝(Patinopecten yessoensis)[7]、櫛孔扇貝(Chlamys farreri)[8-9]、皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)[10]和縊蟶(Sinonova culaconstricta)[11]等；利用溫度、鹽度等物理方法誘導(dǎo)得到三倍體的貝類有櫛孔扇貝[12-13]、文蛤(Meretrix meretrix)[14]、長牡蠣[15]及蝦夷扇貝[16]等；此外，還有利用生物方法實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)的長牡蠣、美洲牡蠣等。

合浦珠母貝是我國最主要的海水珍珠貝類，我國海水珍珠幾乎全部由合浦珠母貝所產(chǎn)。但近年來，由于受城市建設(shè)和長期不當(dāng)養(yǎng)殖及近親繁殖的影響，合浦珠母貝野生資源遭到破壞。不注重科學(xué)育種及母貝的擇優(yōu)與復(fù)壯研究，使得我國合浦珠母貝所產(chǎn)珍珠顆粒變小、珠層薄，養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)量急劇滑坡。因此，利用三倍體的不育性和生長速率快等特點(diǎn)來降低繁殖期的死亡率和增大珍珠規(guī)格是改善這一現(xiàn)狀的方法之一。國內(nèi)外學(xué)者對此也進(jìn)行了諸多研究。其中涉及了靜水壓法誘導(dǎo)[17]、化學(xué)藥物誘導(dǎo)[18-19]等。

目前還沒有利用低滲對合浦珠母貝進(jìn)行三倍體誘導(dǎo)的相關(guān)報(bào)道。本研究通過不同鹽度對合浦珠母貝進(jìn)行三倍體誘導(dǎo)，為合浦珠母貝三倍體育種提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)；同時(shí)利用主成分分析方法對卵裂率、孵化率、存活率、殼長以及三倍體率進(jìn)行綜合評估，以期為合浦珠母貝三倍體育種規(guī)程的構(gòu)建提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親本來源

實(shí)驗(yàn)組和對照組所用親貝均為在北海鐵山港區(qū)火祿村小宇宙合作社的二齡養(yǎng)殖群體。親本于2019 年4 月從養(yǎng)殖場運(yùn)至廣西水產(chǎn)科學(xué)院國家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系廣西綜合試驗(yàn)站孵化場。去除死貝和殼型不規(guī)整的個(gè)體，清除貝殼上的附著物，裝入扇貝籠中吊養(yǎng)在水泥池中暫養(yǎng)1 周。暫養(yǎng)期間每天投餌兩次，每次投喂足量亞心形扁藻(Platymonas subcordiformis)，每天全量換水1 次。暫養(yǎng)水溫24～25 °C，鹽度30。本研究獲得了中國海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理和使用倫理委員會批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)過程中操作人員嚴(yán)格遵守中國海洋大學(xué)倫理規(guī)范，并按照中國海洋大學(xué)倫理委員會制定的規(guī)章制度執(zhí)行。

1.2 人工授精

實(shí)驗(yàn)采用解剖法進(jìn)行人工受精。用牡蠣刀將珍珠貝閉殼肌割斷后肉眼觀察性腺發(fā)育情況，保留性腺飽滿的個(gè)體。用牙簽蘸取少量性腺，在顯微鏡下(10×)鑒定性別。將雌雄個(gè)體分開，雄性置于陰涼處備用。將卵子擠入盛滿砂濾海水的20 L 桶中，用100 μm 篩絹濾去組織碎塊等大塊雜質(zhì)后，用25 μm 篩絹洗卵3 次。向卵液中滴入幾滴氨水(2～3 mmol/L)[20]對卵子進(jìn)行1 h 以上活化。用1 000 μL 移液槍從每個(gè)雄貝性腺中吸取1 mL 精液，放出盛有砂濾海水的5 L 小桶中。顯微鏡下觀察卵子成熟后，向精液中滴入幾滴氨水激活精子。在正式受精前檢查卵子以排除意外受精的發(fā)生。當(dāng)觀察到精子完全激活后，向卵液中注入適量精液開始受精，鏡下觀察每個(gè)卵周圍約5～8 個(gè)精子。受精后持續(xù)觀察受精卵發(fā)育狀態(tài)。

1.3 低滲誘導(dǎo)三倍體

誘導(dǎo)鹽度 當(dāng)40%～50 %合浦珠母貝受精卵釋放第一極體(PB Ⅰ)時(shí)，將受精卵液置于加入后鹽度分別為10、12、14、16、18、20、22 的砂濾海水中誘導(dǎo)15 min。以此確定最佳誘導(dǎo)鹽度。

誘導(dǎo)時(shí)機(jī) 當(dāng)顯微鏡下觀察合浦珠母貝受精卵排放出第一個(gè)PB Ⅰ，50 %排放出PB Ⅰ以及第一個(gè)第二極體(PB Ⅱ)時(shí)開始誘導(dǎo)。誘導(dǎo)鹽度為上述鹽度中確定的最佳鹽度，誘導(dǎo)時(shí)間為15 min。以此確定最佳誘導(dǎo)時(shí)機(jī)。

誘導(dǎo)時(shí)間 利用上述最佳誘導(dǎo)鹽度和誘導(dǎo)時(shí)機(jī)組合分別進(jìn)行10、15 和20 min 誘導(dǎo)。以此確定最佳誘導(dǎo)時(shí)間。

低滲誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)在5 L 小桶中進(jìn)行，每種組合設(shè)置3 個(gè)重復(fù)。同時(shí)設(shè)置一組對照組(C)，對照組未經(jīng)過低滲誘導(dǎo)。誘導(dǎo)結(jié)束后用25 μm 篩絹洗去受精卵液中的多余精子，隨后將受精卵液倒入盛滿砂濾海水的20 L 塑料桶中進(jìn)行孵化。

1.4 幼蟲培育

受精卵大約20 h 后發(fā)育至D 形幼蟲。用40 μm 篩絹收集幼蟲后繼續(xù)在原桶中培養(yǎng)。幼蟲生長到110～120 μm，幼蟲以球等鞭金藻(Isochrysis galbana)作為餌料，隨著幼蟲的生長，餌料中加入牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)和亞心形扁藻。餌料密度從每天3 000 個(gè)/mL 增加至每天8 000 個(gè)/mL。三種餌料的比例為1∶1∶1（數(shù)量比）。幼蟲培育期間每天全量換水1 次，水溫24～27 °C，鹽度30。

1.5 數(shù)據(jù)收集和計(jì)算

對各組的卵裂率(公式1)、孵化率(公式2)、3、6、9、12、15 日齡的存活率(公式3)和生長參數(shù)以及1、3、6、9、12、15 日齡的三倍體率(公式4)進(jìn)行收集和計(jì)算。收集、計(jì)算方式：

式中，CR 代表卵裂率(%)，NCe代表單位體積內(nèi)發(fā)生卵裂的受精卵數(shù)(個(gè)/mL)，NFe代表單位體積受精卵數(shù)(個(gè)/mL)。

式中，HR 代表孵化率(%)，ND代表1 日齡時(shí)單位體積內(nèi)的D 形幼蟲數(shù)(個(gè)/mL)。

表1 提取主成分的負(fù)荷及方差貢獻(xiàn)率Tab.1 Factor loading and variance contribution rate of the extracted principal components %

式中，SR 代表存活率(%)，Nt代表測量時(shí)單位體積內(nèi)存活幼蟲數(shù)量(個(gè)/mL)。

式中，TR 代表三倍體率(%)，ST代表測試群體經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測后的三倍體細(xì)胞數(shù)(個(gè))，SD代表測試群體經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測后的二倍體細(xì)胞數(shù)(個(gè))。

生長參數(shù) 分別在顯微鏡下(10×)測量各組在3、6、9、12、15 日齡時(shí)的殼長(μm)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用單因素方差分析、Duncan 氏多重比較方法分析不同組合間的孵化率、存活率、生長參數(shù)和倍化率的差異。根據(jù)李艷雙等[21]和李陽春等[22]的方法，對卵裂率、孵化率、15 日齡殼長、15 日齡存活率以及15 日齡三倍體率進(jìn)行主成分分析。以累積方差貢獻(xiàn)率≥85%作為主成分選取標(biāo)準(zhǔn)。綜合的得分計(jì)算方式：

所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 軟件(版本22.0)進(jìn)行，所有分析的顯著水平均設(shè)置為P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同條件下卵裂率、孵化率和三倍體率比較

不同條件下誘導(dǎo)合浦珠母貝三倍體時(shí)的卵裂率、孵化率及1 日齡D 型幼蟲三倍體率如圖1。結(jié)果顯示，隨著鹽度的升高，卵裂率和孵化率逐漸升高，D 型幼蟲三倍體率則先上升后降低；對照組的卵裂率和孵化率均與實(shí)驗(yàn)組差異顯著(P<0.05)；鹽度14 時(shí)，D 型幼蟲三倍體率最高(64.16%±6.92%)，但僅與鹽度22 時(shí)(36.48%±4.59%)的差異顯著(P<0.05)，與其他組的差異均不顯著(P>0.05，圖1-a)。隨著誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的延遲，合浦珠母貝的卵裂率和孵化率逐漸升高；在出現(xiàn)第一個(gè)PB Ⅰ和50% PBⅠ時(shí)的卵裂率和孵化率差異均不顯著(P>0.05)；50% PBⅠ時(shí)的D 形幼蟲三倍體率最高(65.87%±6.51%)，與其他2 個(gè)時(shí)機(jī)時(shí)的差異顯著(P<0.05，圖1-b)。隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長，合浦珠母貝的卵裂率和孵化率逐漸降低，各組之間的差異顯著(P<0.05)，且均顯著低于對照組(P<0.05)；誘導(dǎo)15 min 時(shí)，D 形幼蟲三倍體率最高，為65.14%±1.93%，但與誘導(dǎo)20 min 時(shí)的差異不顯著(圖1-c)。

圖1 不同誘導(dǎo)條件下合浦珠母貝卵裂率、孵化率和1 日齡D 形幼蟲三倍體率(a) 50%受精卵釋放PBⅠ在不同鹽度中持續(xù)誘導(dǎo)15 min；(b) 不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)時(shí)在鹽度14 中誘導(dǎo)15 min；(c) 50%受精卵出現(xiàn)PB Ⅰ在鹽度為14 中誘導(dǎo)10、15、20 min。1.卵裂率，2.孵化率，3.1 日齡幼蟲三倍體率；相同項(xiàng)目中，不同字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。Fig.1 Cleavage rate,hatching rate,and triploid rate of 1-day-old D-shaped larvae in different induction conditions.(a) 50% of the zygotes released PB Ⅰand were continuously induced at different salinity for 15 min;(b) at different initial induction times,induced at a salinity of 14 for 15 min;(c) 50% of the fertilized eggs released PB Ⅰ and were treated at a salinity of 14 for 10,15,20 min.1.cleavage rate,2.hatching rate,3.triploid rate of 1-day-old D-shaped larvae;in the same index,different letters indicate multiple comparisons significant differences between groups (P <0.05),the same below.

2.2 不同條件下存活率比較

隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，各誘導(dǎo)鹽度中的幼蟲存活率逐漸降低，誘導(dǎo)鹽度越低，下降速度越快；3 日齡時(shí)，只有鹽度16 中的幼蟲存活率與對照組差異顯著(P<0.05)，而到了15 日齡，所有實(shí)驗(yàn)組幼蟲的存活率均與對照組差異顯著(P<0.05)(圖2-a)。不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組幼蟲的存活率在3～15 日齡時(shí)的差異均不顯著(P>0.05)；6 日齡時(shí)，只有出現(xiàn)第一個(gè)PBⅡ時(shí)的存活率與對照組差異顯著(P<0.05)，而9～15 日齡時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的存活率均與對照組差異顯著(P<0.05)(圖2-b)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，誘導(dǎo)時(shí)間越長，存活率下降速度越快；3～12 日齡時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的存活率差異不顯著(P>0.05)，而15 日齡時(shí)，誘導(dǎo)20 min 組的存活率顯著低于誘導(dǎo)10 min 組(P<0.05)(圖2-c)。

圖2 不同誘導(dǎo)條件下合浦珠母貝在不同日齡的存活率Fig.2 Survival rate at different age in different induction conditions

2.3 不同條件下殼長生長比較

不同鹽度處理后，各實(shí)驗(yàn)組幼蟲的殼長差異不明顯，并未表現(xiàn)出三倍體生長優(yōu)勢；15 日齡時(shí)，鹽度10 中的幼蟲殼長僅次于對照組，且與對照組沒有顯著差異(P>0.05，圖3-a)。在不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和不同誘導(dǎo)時(shí)長實(shí)驗(yàn)中，50% PB Ⅰ和誘導(dǎo)15 min 2 個(gè)實(shí)驗(yàn)組的殼長均大于其他實(shí)驗(yàn)組，甚至出現(xiàn)了高于對照組的情況(圖3-a～b)。

圖3 不同誘導(dǎo)條件下合浦珠母貝在不同日齡的殼長Fig.3 Shell length at different age in different induction conditions

2.4 不同條件下三倍體率變化比較

不同條件下，各實(shí)驗(yàn)組幼蟲在3～15 日齡的三倍體率在培養(yǎng)期內(nèi)均有所下降。在不同鹽度誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，鹽度16～22 實(shí)驗(yàn)組中的幼蟲三倍體率降低幅度均超過了10%(圖4-a)；不同誘導(dǎo)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，誘導(dǎo)時(shí)間為10 min 時(shí)的幼蟲三倍體率降低幅度超過了10%(圖4-c)；其他實(shí)驗(yàn)組均較為穩(wěn)定；幼蟲的三倍體率變化多集中在殼頂期。

圖4 不同誘導(dǎo)條件下合浦珠母貝在不同日齡的三倍體率Fig.4 Triploid rate at different age in different induction conditions

2.5 主成分分析

本研究以累計(jì)方差貢獻(xiàn)率≥85%為標(biāo)準(zhǔn)，3種實(shí)驗(yàn)方法均選擇了前兩個(gè)主成分用于進(jìn)行主成分分析綜合評價(jià)得分計(jì)算。不同鹽度實(shí)驗(yàn)中，前兩個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率為94.78%；主成分1 主要反映了卵裂率、孵化率和存活率這三個(gè)原始變量；主成分2 則主要反映的原始變量為生長。在不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)實(shí)驗(yàn)中，前兩個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率為100%；主成分1 在卵裂率、孵化率、存活率和生長的特征向量分別為99.75%、98.93%、99.45%和87.03%；主成分2 在三倍體率上的特征向量為96.45%。與不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)實(shí)驗(yàn)類似，在不同誘導(dǎo)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，前兩個(gè)主成分同樣很好的反映了所有原始變量；主成分1 主要反映了卵裂率、孵化率、存活率和生長這4 個(gè)原始變量，而主成分2 則主要反映原始變量為三倍體率(表1)。在不同鹽度實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)誘導(dǎo)鹽度為20 時(shí)，其綜合評價(jià)得分最高(89.08)；誘導(dǎo)三倍體率最高的鹽度14 僅排名第6，其綜合評價(jià)得分為－44.04。不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和誘導(dǎo)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，三倍體率最高的兩個(gè)條件(50% PB Ⅰ和15 min)的綜合評價(jià)得分排名均為第1，二者的得分分別為75.75 和74.47(表2)。

表2 不同誘導(dǎo)條件下的綜合評價(jià)得分Tab.2 Comprehensive evaluation scores under different inducing conditions

3 討論

通過低滲抑制第二極體被認(rèn)為是誘導(dǎo)貝類三倍體的一種有效方式。此外，配子的成熟度也是提高誘導(dǎo)效率的關(guān)鍵因素之一，配子的成熟度決定了受精卵發(fā)育的同步性。獲得高質(zhì)量配子的方法主要包括種貝促熟、誘導(dǎo)產(chǎn)卵排精和解剖獲得精卵等[23]。其中，解剖獲得精卵的方式更容易控制，但對于合浦珠母貝來說，解剖獲得的精卵往往不具有受精能力，需要進(jìn)行激活。本實(shí)驗(yàn)所用的親本性腺發(fā)育良好，因此，向卵液中滴入幾滴氨水后浸泡約1 h 可有效提高合子發(fā)育的同步性。

本研究中，各實(shí)驗(yàn)組中的卵子經(jīng)過促熟后，發(fā)育水平較為一致，因此，受精卵的發(fā)育同步性也較高。利用不同鹽度在相同的誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和誘導(dǎo)時(shí)間下誘導(dǎo)三倍體，各鹽度中受精卵的卵裂率和孵化率均隨著鹽度的升高而升高，而D 形幼蟲三倍體率則隨著鹽度的升高先上升后降低。鹽度的改變會迫使受精卵滲透壓發(fā)生改變，嚴(yán)重者可能會使胚胎受損，造成畸形或者使三倍體胚胎無法發(fā)育至D 形幼蟲[24]。這可能是鹽度10 和12 中的幼蟲三倍體率低于鹽度14 的原因。類似的結(jié)果在長牡蠣、近江牡蠣(C.ariakensis)及熊本牡蠣(C.sikamea)中均有報(bào)道[15,25-26]。在不同誘導(dǎo)時(shí)機(jī)實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)50%受精卵排出PB I 時(shí)開始誘導(dǎo)，D 形幼蟲的三倍體率最高。本實(shí)驗(yàn)采用抑制PB Ⅱ的方式誘導(dǎo)三倍體，三倍體率的高低與受精卵發(fā)育的同步性有直接關(guān)系。當(dāng)顯微鏡下觀察到50%受精卵已經(jīng)釋放PB Ⅰ時(shí)，實(shí)際上絕大多數(shù)受精卵的PB Ⅰ已經(jīng)釋放完畢，準(zhǔn)備釋放PB Ⅱ。因此，在此時(shí)開始誘導(dǎo)可能具有較好的效果。目前已有的研究中，誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的選擇主要有兩種方式，一種是如本研究中所采用的以某一發(fā)育階段為起點(diǎn)開始誘導(dǎo)[16,27]，此方法的其實(shí)標(biāo)志清晰，容易觀察，但有時(shí)需等待較長時(shí)間；另外一種以時(shí)間為標(biāo)志[28-30]，即受精后的一定時(shí)間點(diǎn)時(shí)開始誘導(dǎo)，此方法雖然等待時(shí)間較短，但可能出現(xiàn)在此期間未達(dá)到目標(biāo)發(fā)育階段的情況。在不同誘導(dǎo)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，三個(gè)誘導(dǎo)時(shí)間中D 形幼蟲的三倍體率先上升后下降。在多次實(shí)踐過程中我們發(fā)現(xiàn)，合浦珠母貝受精卵從PB I 釋放完成到PB Ⅱ釋放完成，一般在15min 內(nèi)完成。這可能也是為什么在之前的報(bào)道中多選擇15 min 或15 min 誘導(dǎo)效果最好的原因[18,31]。而誘導(dǎo)時(shí)間低于或高于15 min 時(shí)D 形幼蟲三倍體率低的原因可能是未完全達(dá)到抑制PBⅡ釋放的效果或?qū)ε咛ギa(chǎn)生了不可逆的影響。

在本實(shí)驗(yàn)中，在鹽度10 和誘導(dǎo)20 min 時(shí)的兩組幼蟲的存活率均最低，存活率持續(xù)而快速降低。誘導(dǎo)鹽度的降低以及誘導(dǎo)時(shí)間的延長使胚胎處于不適環(huán)境中，使其受到潛在傷害，這種潛在傷害在D 形幼蟲中的表現(xiàn)為高死亡率[32]。同時(shí)，由于發(fā)育同步性的原因，高強(qiáng)度的誘導(dǎo)可能使一部分受精卵的PB Ⅰ排放受到抑制，進(jìn)而導(dǎo)致染色體多級分離產(chǎn)生非整倍體[33]，非整倍體的低存活能力也是存活率下降的原因。相比于對照組，各實(shí)驗(yàn)組從受精卵發(fā)育至D 形幼蟲的時(shí)間明顯延長。且在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，三倍體并未表現(xiàn)出明顯的生長優(yōu)勢。鹽度10 中誘導(dǎo)的幼蟲在15 日齡時(shí)的殼長僅次于對照組，但這可能并非是三倍體體現(xiàn)出的生長優(yōu)勢。這可能是由于低滲對胚胎造成持續(xù)性的損傷及染色體多級分離，孵化后體型較小的個(gè)體和非整倍體不斷死亡，僅留下體型較大的個(gè)體。這也是為什么在15 日齡時(shí)，鹽度10 中幼蟲殼長方差在所有實(shí)驗(yàn)組中最小的原因。同時(shí)，體型較小的個(gè)體和非整倍體不斷死亡可能也是幼蟲培養(yǎng)過程中三倍體率降低的原因。除此之外，三倍體率降低的另外一個(gè)原因可能是由于染色體丟失造成的[28]。

主成分分析是通過將多個(gè)變量進(jìn)行降維，盡可能多地保留原始變量信息，利用少數(shù)幾個(gè)主成分來解釋原始變量的分析方法[21]。本研究中的三個(gè)實(shí)驗(yàn)均保留了前兩個(gè)主成分，且保留的主成分累積方差貢獻(xiàn)率均超過了85%。說明所保留的主成分能夠很好的反應(yīng)所有原始變量，達(dá)到了減少變量的目的。從綜合評價(jià)得分的結(jié)果來看，我們選擇的三個(gè)最佳三倍體誘導(dǎo)條件并非都得到了最高的綜合評價(jià)得分。誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和誘導(dǎo)時(shí)間中，50% PB Ⅰ和誘導(dǎo)15 min 時(shí)在各自所屬的實(shí)驗(yàn)中均排名第1，而鹽度14 在不同鹽度實(shí)驗(yàn)組中僅排名第6。此結(jié)果與李陽春等[22]關(guān)于長牡蠣的研究結(jié)果不同，其原因可能與原始變量的數(shù)量有關(guān)。本研究中的原始變量不僅有卵裂率、孵化率和三倍體率，還增加了15 日齡時(shí)的存活率和殼長，低滲造成的生長減慢和存活率下降可能導(dǎo)致了此結(jié)果的產(chǎn)生。由此可見，利用低滲誘導(dǎo)合浦珠母貝三倍體雖然可誘導(dǎo)出一定比例的三倍體且成本較藥物誘導(dǎo)更低，但如何提高胚胎卵裂率、孵化率以及幼蟲存活率是日后需要解決的問題。

（作者聲明本文無實(shí)際或潛在的利益沖突）