廖健杉，折 哲，李鳳森，石克華*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200071； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院，上海 200137； 3.新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

慢性阻塞性肺疾病 （chronic obstructive pulmonary disease，COPD） 是以持續(xù)呼吸道癥狀與氣流受限為特征的肺部咳喘疾病，通常與遺傳因素及環(huán)境因素相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制主要包括氣道氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)及氣道重塑［1］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，COPD 患者發(fā)病率和患病率呈逐年上升趨勢，預(yù)計到2050 年，我國COPD 患病人數(shù)或?qū)⑦_(dá)到2.15億［2］。中醫(yī)藥通過補(bǔ)肺納腎健脾，祛邪利氣，從而達(dá)到治療COPD 的目的，具有治療效果顯著、不良反應(yīng)少、能有效降低復(fù)發(fā)率等優(yōu)勢［3］。復(fù)方佛耳草合劑是上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院使用三十余年的中藥制劑，具有清熱化痰、止咳平喘之效，臨床主要應(yīng)用于痰熱郁肺型疾病。本團(tuán)隊前期臨床研究發(fā)現(xiàn)該方可迅速緩解COPD 患者咳喘癥狀，不僅能減輕肺部炎癥反應(yīng)，而且對COPD 患者肺功能有保護(hù)作用［4-6］，但其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。因此，本實驗采用煙草煙霧暴露聯(lián)合脂多糖（lipopolysaccharide，LPS） 建立COPD 大鼠模型，并基于Toll 樣受體4 （toll-like receptor 4，TLR4） /髓樣分化因子88 （myeloiddifferentiationfactor88，MyD88） /核轉(zhuǎn)錄因子-κB （nuclear factor kappa-B，NF-κB） 信號通路探討復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠潛在作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動物 SPF 級Wistar 雄性大鼠60 只，6 周齡，體質(zhì)量（180±20） g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司［實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（滬） 2017-0005］，飼養(yǎng)于室溫（23±3）℃的環(huán)境，自由攝食和飲水。本實驗經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn) （ 倫理號dw2019015）。

1.2 藥物 復(fù)方佛耳草合劑由佛耳草、魚腥草、車前草、地龍、百部、陳皮、甘草等組成，由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供，批號20170923。醋酸地塞米松片購自上海上藥信誼藥廠有限公司，批號180313。

1.3 試劑 大前門香煙（上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號20190115）； 脂多糖（LPS）、DMSO （美國Sigma-Aldrich 公司，批號L2880、D5879）； 腫瘤壞死因子-α （tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β （interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD ）、丙 二 醛 （ malondialdehyde，MDA） 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA） 試劑盒、蘇木素伊紅（HE） 染色試劑盒、辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗、DAB 顯色試劑盒、RIPA 裂解液、BCA 蛋白濃度測定試劑盒、ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)股份有限公司，批號PT518、PI305、PI330、S0101S、S0131S、C0105、A0208、P0203、P0013B、P0010、P0018S）； TRIzol 試劑盒（美國英杰生命技術(shù)有限公司，批號14105）；TLR4 抗體、MyD88 抗體、NF-κB 抗體、TNF-α 抗體、β-肌動蛋白（recombinant human beta-actin，βactin） 抗體 （英國Abcam 公司，批號ab22048、ab133739、ab283716、ab183218、ab8226）。

1.4 儀器 染毒箱（自制，大小約80 cm×50 cm×40 cm，上方中央有可開啟的小口，周圍有12 個小的透氣孔）； AniRes2005 動物肺功能分析系統(tǒng)（北京貝蘭博科技有限公司）； 低溫高速離心機(jī)（美國Sigma-Aldrich 公司）； 酶標(biāo)儀（上海百基生物科技有限公司）； 實時熒光定量PCR 儀、電泳儀（美國Bio-Rad 公司）； 凝膠成像儀（上海天能生命科學(xué)有限公司）。

2 方法

2.2 一般情況觀察 每天觀察各組大鼠咳嗽、喘鳴、氣促等情況，毛發(fā)、攝食飲水量、口鼻分泌物、精神狀態(tài)及死亡情況。

2.3 肺功能檢測 實驗第36 周末 （給藥結(jié)束后），各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛（4 mL/kg）進(jìn)行麻醉，切開頸部皮膚，暴露氣管，將靠進(jìn)環(huán)狀軟骨的氣管以T 字形切開，插入軟管并用手術(shù)線固定，放入儀器體描箱內(nèi)，確保箱子密閉性，檢測0.2 秒用力呼氣容積（forced expiratory volume in 0.2 second，F(xiàn)EV0.2）、用力肺活量（forced vital capacity，F(xiàn)VC）、肺動態(tài)順應(yīng)性（dynamic compliance，Cydn）、肺總阻力（lung resistance，RL）、呼氣相氣道阻力（expiratory airway resistance，Re） 等參數(shù)，重復(fù)檢測操作3 次。

2.4 標(biāo)本采集 肺功能檢測結(jié)束后，腹主動脈采血5 mL，3 000 r/min 離心15 min，吸取上清，于-80 ℃保存； 脫頸處死大鼠，切開胸腔，立即取出肺組織，液氮保存?zhèn)溆谩?/p>

2.5 肺組織病理學(xué)檢查 右肺下葉置于4% 多聚甲醛中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片厚約4 μm，進(jìn)行常規(guī)HE 染色，樹脂封片，在光鏡下觀察支氣管與肺泡病理改變。參照文獻(xiàn)［11］ 報道方法，對肺組織病理進(jìn)行半定量評分。評分指標(biāo)（1） 氣道是否存在阻塞； （2） 氣道上皮是否糜爛壞死； （3） 氣道上皮杯狀細(xì)胞化生； （4） 氣道上皮鱗狀細(xì)胞化生； （5） 管壁炎性細(xì)胞浸潤； （6）管壁纖維結(jié)締組織增生； （7） 氣道管壁平滑肌增生，評分標(biāo)準(zhǔn)正常為0 分，輕度損傷為1 分，中度損傷為2 分，重度損傷為3 分。每項指標(biāo)分值合計，即得到病理學(xué)評分。

2.6 ELISA 法檢測血清炎癥因子水平 取各組大鼠血清，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，檢測血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平及SOD 活性。

2.7 RT-qPCR 法檢測肺組織TLR4、MyD88、NFκB、caspase-3 mRNA 表達(dá) 以TRIzol 一步法提取大鼠肺組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。由生工生物工程（上海） 股份有限公司設(shè)計并合成引物，引物序列見表1。PCR 反應(yīng)程序為94 ℃ 10 min，94 ℃30 s，72 ℃30 s，40 個循環(huán)擴(kuò)增； 最后72 ℃10 min 結(jié)束反應(yīng)。以β-actin為內(nèi)參，結(jié)果采用2-ΔΔCT法計算各目的基因的表達(dá)。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2.8 Western blot 法檢測肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白表達(dá) 稱取肺組織60 mg 加入RIPA 裂解液中，置于冰上裂解，提取組織中總蛋白，使用BCA 法測定蛋白濃度。電泳分離相關(guān)蛋白，在低溫環(huán)境下轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉溶液封閉1 h后，加入一抗稀釋液 （TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α、β-actin 分別按1 ∶500 稀釋），4 ℃孵育過夜，TBST 充分洗滌后，加入二抗（1 ∶1 000） 室溫孵育1 h，TBST 充分洗滌后，加入ECL 顯色并掃描，以β-actin 為內(nèi)參，采用Image J 軟件分析目的蛋白條帶光密度（OD） 值并計算目的蛋白表達(dá)量。

2.9 統(tǒng)計學(xué)分析 通過GraphPad Prism 7 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s） 表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般情況 空白組大鼠精神狀態(tài)良好，毛色潔白有光澤，體型適中，活潑好動，反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，未見咳嗽、咯痰、打噴嚏等癥狀；與空白組比較，模型組大鼠精神萎靡，毛色枯黃少光澤，咳嗽、噴嚏頻發(fā)，反應(yīng)緩慢，鼻分泌物增加，喉間痰鳴聲明顯，攝食減少，飲水量增加； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組大鼠氣喘、喉間痰鳴聲有不同程度減輕，精神狀態(tài)稍好轉(zhuǎn)，攝食量、飲水量均有所增加。實驗過程中無大鼠死亡情況發(fā)生。

伊拉克公司開發(fā)的米桑油田所在地是30多年前兩伊戰(zhàn)爭的主戰(zhàn)場，起初油田范圍內(nèi)隨處可見地雷和未爆炸的炮彈、子彈。身處這樣的環(huán)境，說不害怕是不可能的，尤其是頭幾個月，連睡覺都是一種奢求。但我們知道這片“灘涂”闖過去就是“坦途”。米桑油田群項目是中海油首次作為主合同方管理的海外整裝油田，也是公司首次從無到有，全方位、全流程構(gòu)建海外項目財務(wù)體系的一個絕佳時機(jī)。我們選擇在這片“荒蕪之地”暫時忘卻恐懼，只為建起一套海外項目的財務(wù)管理體系，能夠推廣適用于公司今后的海外項目。

3.2 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺功能的影響 與空白組比較，模型組大鼠FEV0.2/FVC 降低（P＜0.01），Cdyn、RL 及Re 升高（P＜0.01），提示模型組大鼠存在阻塞性通氣功能障礙； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組FEV0.2/FVC 升高 （P＜0.05，P＜0.01），Cdyn、RL 及Re 降低（P＜0.05，P＜0.01），表明復(fù)方佛耳草合劑能延緩FEV0.2/FVC 下降趨勢，減輕氣道阻力，以高劑量組效果較佳，見表2。

表2 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺功能的影響（±s，n＝6）Tab.2 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary function of COPD rats （±s，n＝6）

表2 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺功能的影響（±s，n＝6）Tab.2 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary function of COPD rats （±s，n＝6）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別（FEV0.2/FVC）/%Cdyn/（mL·cm H2O-1）RL/（H2O·s·mL-1）Re/（H2O·s·mL-1）空白組93.02±7.610.341±0.3510.357±0.0400.234±0.010模型組60.36±5.01＃＃0.817±0.073＃＃0.801±0.080＃＃0.414±0.030＃＃地塞米松組86.20±4.91**0.468±0.050**0.446±0.065**0.309±0.021**復(fù)方佛耳草合劑低劑量組73.52±9.79*0.665±0.020*0.615±0.070**0.341±0.015**復(fù)方佛耳草合劑中劑量組80.71±6.65**0.498±0.124**0.522±0.064**0.324±0.045**復(fù)方佛耳草合劑高劑量組85.59±2.44**0.445±0.068**0.465±0.055**0.313±0.017**

3.3 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織病理學(xué)的影響 空白組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，支氣管管壁與肺泡形態(tài)完整，細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)有序，未見炎癥細(xì)胞彌漫浸潤； 模型組大鼠肺泡壁增厚，肺間質(zhì)炎性分泌物大量增加，部分肺泡間隔斷裂融合形成較大含氣囊腔，部分黏膜上皮杯狀細(xì)胞變形、壞死； 地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組大鼠肺組織氣道管壁與肺泡壁增厚、黏膜上皮變形及壞死、炎癥細(xì)胞浸潤及管腔狹窄均得到不同程度改善，其中復(fù)方佛耳草合劑低劑量組變化程度居于空白組與模型組之間，地塞米松組及復(fù)方佛耳草合劑高劑量組變化程度相似，均優(yōu)于復(fù)方佛耳草合劑中劑量組，見圖1。與空白組比較，模型組大鼠肺組織病理評分升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組大鼠肺組織病理評分降低（P＜0.01），且復(fù)方佛耳草合劑的作用呈劑量依賴性，見表3。

圖1 各組大鼠肺組織病理圖（HE，×100）Fig.1 Pathology of rat lung tissue of each group （HE，×100）

表3 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織病理評分的影響（±s，n＝6）Tab.3 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pathological score of rat lung tissue （±s，n＝6）

表3 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織病理評分的影響（±s，n＝6）Tab.3 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pathological score of rat lung tissue （±s，n＝6）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，**P＜0.01。

組別評分/分空白組1.20±0.83模型組12.40±1.14＃＃地塞米松組6.20±0.83**復(fù)方佛耳草合劑低劑量組9.20±0.83**復(fù)方佛耳草合劑中劑量組8.00±0.70**復(fù)方佛耳草合劑高劑量組6.80±0.83**

3.4 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平及SOD 活性的影響 與空白組比較，模型組大鼠血清SOD 活性降低（P＜0.01），TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平降低（P＜0.05，P＜0.01），地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑中、高劑量組血清SOD 活性升高（P＜0.01），提示復(fù)方佛耳草合劑可以恢復(fù)機(jī)體SOD 活性，調(diào)節(jié)COPD 大鼠血清中炎癥因子水平，且高劑量組效果較佳，見表4。

表4 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平及SOD 活性的影響（±s，n＝6）Tab.4 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on serum TNF-α，IL-1β，IL-6 and MDA levels and SOD activity in COPD rats （±s，n＝6）

表4 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平及SOD 活性的影響（±s，n＝6）Tab.4 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on serum TNF-α，IL-1β，IL-6 and MDA levels and SOD activity in COPD rats （±s，n＝6）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別TNF-α/（ng·L-1）IL-1β/（ng·L-1）IL-6/（ng·L-1）SOD/（U·mg-1）MDA/（U·mg-1）空白組38.57±8.5431.67±9.5934.24±8.0870.73±6.6212.41±2.64模型組158.73±9.96＃＃155.73±15.54＃＃151.75±9.96＃＃33.07±5.01＃＃28.40±3.01＃＃地塞米松組97.76±12.88**106.30±12.60**118.81±14.04**63.70±8.67**15.20±2.19**復(fù)方佛耳草合劑低劑量組126.42±6.53**132.12±8.45**127.08±14.06*45.68±4.9422.90±2.72*復(fù)方佛耳草合劑中劑量組104.67±10.20**111.68±10.45**124.30±5.83**50.92±6.37**17.24±1.48**復(fù)方佛耳草合劑高劑量組92.86±9.55**98.37±12.24**107.29±10.40**59.57±9.00**14.73±2.08**

3.5 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA 表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA 表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA 表達(dá)降低（P＜0.05，P＜0.01），且高劑量組效果較佳，見表5。

表5 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA 表達(dá)的影響（±s，n＝6）Tab.5 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary mRNA expressions of TLR4，MyD88，NF-κB and caspase-3 of COPD rats （±s，n＝6）

表5 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA 表達(dá)的影響（±s，n＝6）Tab.5 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary mRNA expressions of TLR4，MyD88，NF-κB and caspase-3 of COPD rats （±s，n＝6）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別TLR4MyD88NF-κBcaspase-3空白組1.24±0.381.66±0.291.15±0.141.31±0.04模型組6.32±0.41＃＃4.33±0.21＃＃4.75±0.90＃＃4.62±0.39＃＃地塞米松組2.61±0.41**2.85±0.51**1.75±0.44**2.64±0.37**復(fù)方佛耳草合劑低劑量組4.05±0.83**3.64±0.12*2.15±0.47**3.10±1.10**復(fù)方佛耳草合劑中劑量組2.77±0.53**3.08±0.39**1.70±0.27**2.86±0.67**復(fù)方佛耳草合劑高劑量組1.70±0.50**2.38±0.43**1.58±0.51**2.23±0.66**

3.6 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，模型組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NFκB、TNF-α 蛋白表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和復(fù)方佛耳草合劑各劑量組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白表達(dá)降低（P＜0.01），且高劑量組效果較佳，見圖2、表6。

圖2 各組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白條帶圖Fig.2 Protein bands of TLR4，MyD88，NF-κB and TNF-α in rat lung tissue of each group

表6 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝6）Tab.6 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary protein expressions of TLR4，MyD88，NF-κB and TNF-α of COPD rats （±s，n＝6）

表6 復(fù)方佛耳草合劑對COPD 大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響（±s，n＝6）Tab.6 Effects of Compound Fo’ercao Mixture on pulmonary protein expressions of TLR4，MyD88，NF-κB and TNF-α of COPD rats （±s，n＝6）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，**P＜0.01。

組別TLR4MyD88NF-κBTNF-α空白組0.52±0.030.51±0.040.68±0.010.49±0.04模型組1.08±0.03＃＃1.31±0.04＃＃1.35±0.02＃＃1.07±0.02＃＃地塞米松組0.62±0.05**0.66±0.01**0.88±0.06**0.61±0.03**復(fù)方佛耳草合劑低劑量組0.84±0.03**0.75±0.05**0.93±0.02**0.88±0.01**復(fù)方佛耳草合劑中劑量組0.66±0.06**0.69±0.03**0.77±0.05**0.74±0.02**復(fù)方佛耳草合劑高劑量組0.55±0.05**0.62±0.02**0.67±0.02**0.62±0.01**

4 討論

COPD 在中醫(yī)學(xué)中屬于“喘證” “咳嗽” “肺脹” “痰飲” 等范疇，病機(jī)以肺脾腎氣俱虛為本，六淫實邪入侵為標(biāo)，治療上應(yīng)以清瀉肺熱、宣肺止咳、化痰平喘為治療法則［12］。復(fù)方佛耳草合劑組方中，重用佛耳草以清化肅肺而鎮(zhèn)咳平喘為君藥；魚腥草清熱消癰，清解肺中邪熱郁毒，車前草清熱祛痰，共為臣藥； 久病入絡(luò)，佐以地龍清熱、通絡(luò)、平喘，百部溫潤肺氣止咳，陳皮燥濕化痰兼理氣； 甘草止咳祛痰，調(diào)和眾藥為使。全方標(biāo)本同治，潤燥相濟(jì)，共奏清熱化痰，宣肺平喘之效。

本研究通過煙草煙霧暴露聯(lián)合氣道注射LPS建立COPD 大鼠模型，發(fā)現(xiàn)COPD 大鼠肺通氣功能下降，存在氣道阻力，肺組織存在大量炎性浸潤，支氣管管壁增厚及管腔不規(guī)則狹窄，提示COPD 模型構(gòu)建成功。給予復(fù)方佛耳草合劑干預(yù)后，大鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，有效延緩肺功能下降趨勢，改善氣道氣流受限癥狀，其中以高劑量組療效顯著，但其機(jī)制需進(jìn)一步驗證。

大量研究證實，吸煙是COPD 最核心致病因素之一，可誘發(fā)氣道炎癥反應(yīng)、激活氧化應(yīng)激，進(jìn)一步損傷氣道及肺部組織［13］。炎癥細(xì)胞活化將產(chǎn)生大量活性氧，引起肺部脂質(zhì)過氧化增加，誘導(dǎo)細(xì)胞脂質(zhì)受損［14-15］。當(dāng)機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡，將引起異常細(xì)胞凋亡反應(yīng)［16］。caspase 家族蛋白酶能夠直接導(dǎo)致凋亡細(xì)胞解體，其中caspase-3 被認(rèn)為是凋亡的關(guān)鍵蛋白酶［17］。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，復(fù)方佛耳草合劑各劑量組血清SOD活性增加，MDA 水平及炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 水平降低，caspase-3 mRNA 表達(dá)下調(diào)，提示復(fù)方佛耳草合劑能夠減輕細(xì)胞膜過氧化損傷，抑制炎性細(xì)胞募集，減少肺泡上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮對COPD 大鼠肺組織保護(hù)的作用。

Toll 樣受體（TLR） 作為非特異性免疫系統(tǒng)識別病原體相關(guān)蛋白的一類受體蛋白［18］，在炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。TLR4 被認(rèn)為是參與炎癥反應(yīng)的主要Toll 樣受體，能夠與病原體細(xì)胞壁上的脂多糖發(fā)生特異性結(jié)合，激活其下游MyD88 依賴性或非依賴性途徑［19］，進(jìn)一步誘導(dǎo)NF-κB 活化，刺激TNF-α、IL-6、IL-1β 及IL-18 等促炎因子表達(dá)［20］。研究表明，TLR4/MyD88/NF-κB 信號通路參與了COPD 的炎癥反應(yīng)和肺損傷過程［21］，控制COPD 炎癥反應(yīng)與抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白有關(guān)［22］。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠肺組織TLR4、MyD88、NF-κB 基因和蛋白表達(dá)均升高，復(fù)方佛耳草合劑干預(yù)后，肺組織TLR4、MyD88、NF-κB 基因和蛋白表達(dá)降低，且作用呈劑量依賴性，提示復(fù)方佛耳草合劑可能通過抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信號通路，進(jìn)一步阻止細(xì)胞凋亡發(fā)生，減輕組織炎癥反應(yīng)。

綜上所述，復(fù)方佛耳草合劑可改善COPD 大鼠的肺功能，對支氣管-肺組織損傷有保護(hù)作用，減少肺臟局部及全身性炎癥發(fā)生，糾正機(jī)體氧化/抗氧化失衡狀態(tài)，其作用機(jī)制可能與抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信號通路激活密切相關(guān)。然而，本研究僅進(jìn)行體內(nèi)實驗，后續(xù)需從細(xì)胞層面進(jìn)一步闡述復(fù)方佛耳草合劑對TLR4/MyD88/NF-κB 信號通路調(diào)控作用。