張曉露 李 蕾 吳 瓊

1 廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院婦科 518100; 2 廣東省深圳市第二人民醫(yī)院婦科

子宮內(nèi)膜癌主要是指發(fā)生于女性子宮內(nèi)膜的一類上皮性惡性病變,多見于圍絕經(jīng)期以及絕經(jīng)后女性,是臨床上最為常見的特發(fā)于女性的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。手術(shù)聯(lián)合化療是當(dāng)前臨床上治療該病的常規(guī)方案,盡管患者接受早期診治,但生存率仍較低,用藥相對局限[2]。腫瘤免疫微環(huán)境的形成介導(dǎo)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程,故而針對腫瘤免疫微環(huán)境開展治療是當(dāng)前國內(nèi)外腫瘤研究的熱點(diǎn)[3]。隨著近年來有關(guān)研究的日益深入,越來越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)B7家族分子屬于免疫調(diào)控分子之一,于機(jī)體免疫微環(huán)境中起著至關(guān)重要的作用[4]。B7-H3和B7-H4是近年來新進(jìn)發(fā)現(xiàn)的B7家族重要成員,已有研究報(bào)道證實(shí)二者在乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌以及口腔癌等多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá),且和臨床預(yù)后轉(zhuǎn)歸息息相關(guān)[5-6]。鑒于此,本文通過研究負(fù)性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,以期為子宮內(nèi)膜癌的免疫微環(huán)境靶向治療提供新的思路,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2020年1月—2022年1月收治的60例子宮內(nèi)膜癌患者開展研究,作為A組。年齡:≤50歲34例,>50歲26例;病理分級:G1級22例,G2+G3級38例;臨床分期:Ⅰ～Ⅱ期40例,Ⅲ～Ⅳ期20例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。另取同期收治的50例不典型增生子宮內(nèi)膜患者作為B組。年齡≤50歲27例,>50歲23例。再取40例因子宮內(nèi)膜病變切取正常子宮內(nèi)膜組織患者作為C組。年齡≤50歲24例,>50歲16例。各組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可進(jìn)行后續(xù)比較。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有受試者入院前均未接受過任何治療;(2)均為成年女性;(3)均經(jīng)病理檢查確診;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤;(2)神志異常;(3)同期參與其他研究。入組人員均已簽同意書,本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 (1)組織芯片制作:設(shè)計(jì)樣本數(shù)量合適、間距大小合適的組織芯片陣列;根據(jù)設(shè)計(jì)好的組織陣列對組織蠟塊進(jìn)行編號。將相對應(yīng)的組織病理蠟塊置于4℃冰箱中預(yù)冷30min,以提升組織蠟塊硬度,方便抽提。制備空白受體蠟塊,于實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)冷,借助組織陣列儀(Minicore軟件)涉及組織陣列,并抽提出病理蠟塊組織芯柱,促使其根據(jù)預(yù)定陣列排列在空白受體蠟塊上。將載入病理芯柱的受體蠟塊置于65～70℃恒溫烤箱中反復(fù)加熱5～19min,冷卻5～10min,持續(xù)3～4h,確保組織芯與受體蠟塊緊密相連。之后以切片機(jī)對組織芯片蠟塊實(shí)施適當(dāng)?shù)男拚?進(jìn)刀速度以10μm/r為宜,保證大部分組織芯柱露出蠟塊平面。以切片機(jī)對組織芯片蠟塊切片,進(jìn)刀速度以4μm/r為宜,做連續(xù)切片,并遵循先后次序予以編號。(2)免疫組織化學(xué)法:具體操作按照說明書完成,其中B7-H3和B7-H4鼠單抗選用北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;白細(xì)胞介素-10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)鼠單抗選用福建邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。以PBS液替代一抗作為陰性對照,選用已知陽性切片作為陽性對照組。

1.3 結(jié)果判定 所有切片均于400倍視野下進(jìn)行觀察,對視野下陽性細(xì)胞數(shù)量與染色情況實(shí)施評估。陽性細(xì)胞數(shù)量評分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞占比<10%計(jì)為1分,陽性細(xì)胞占比10%～50%計(jì)為2分;陽性細(xì)胞占比>50%計(jì)為3分。染色情況評分:無著色計(jì)為0分;淡黃色計(jì)為1分;中度黃色計(jì)為2分;棕褐色計(jì)為3分。將陽性細(xì)胞數(shù)量評分和染色情況評分乘積作為最終結(jié)果,且將<3分視作陰性,≥3分視作陽性。

2 結(jié)果

2.1 三組B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)對比 A組B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1陽性率高于B組及C組(均P<0.05),見表1。

表1 三組B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)對比[n(%)]

2.2 B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn):B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(均P<0.05),見表2。

表2 B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)的相關(guān)性分析

2.3 B7-H3表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系分析 病理分級G2+G3、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者B7-H3陽性率高于病理分級G1、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(均P<0.05),見表3。

表3 B7-H3表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系分析[n(%)]

2.4 B7-H4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系分析 病理分級G2+G3、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者B7-H4陽性率高于病理分級G1、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(均P<0.05),見表4。

表4 B7-H4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系分析[n(%)]

3 討論

迄今為止,關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的具體發(fā)病機(jī)制尚未徹底闡明,目前普遍認(rèn)為可能和遺傳、生活方式及精神壓力等因素有關(guān)[7]。根治性手術(shù)切除聯(lián)合化療是治療子宮內(nèi)膜癌的有效方案,但患者仍有一定的復(fù)發(fā)率,且遠(yuǎn)期生存率亦不十分理想[8]。免疫治療是當(dāng)前國內(nèi)外廣泛關(guān)注的前沿抗腫瘤手段,已有不少免疫治療藥物被批準(zhǔn)用于肺癌、血液系統(tǒng)腫瘤等的治療中。另有研究表明[9-10],在機(jī)體出現(xiàn)免疫反應(yīng)之時(shí),T淋巴細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)異常的增殖及活化,上述過程不但需要T淋巴細(xì)胞受體識別抗原提呈細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的組織相容性復(fù)合體所提供的信號,還需共刺激分子提呈信號。B7-H3和B7-H4均是免疫調(diào)控分子,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著至關(guān)重要的作用,已成為近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)指標(biāo)。

本文結(jié)果顯示:A組B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1陽性率均高于B組以及C組。提示了B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1在子宮內(nèi)膜癌患者中存在異常高表達(dá)。推敲原因,B7-H3與B7-H4均屬于B7家族成員之一,二者均是跨膜蛋白,可在腫瘤細(xì)胞以及抗原提呈細(xì)胞上表達(dá),且兩者均可抑制T淋巴細(xì)胞的活動(dòng),進(jìn)而影響機(jī)體內(nèi)Th1、Th2以及Th17等多種免疫細(xì)胞的作用,促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。相關(guān)研究表明[11],B7-H3蛋白可在前列腺癌以及卵巢癌等多種腫瘤組織中呈異常高表達(dá),且和臨床不良預(yù)后密切相關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)[12]:B7-H4具有抑制T淋巴細(xì)胞增殖以及活化的作用,進(jìn)而影響白細(xì)胞介素-2(IL-2)以及白細(xì)胞介素-6(IL-6)等細(xì)胞因子的合成、分泌,發(fā)揮傳遞負(fù)性免疫信號作用。均為本研究結(jié)果提供了強(qiáng)有力佐證。IL-10則是由多種干細(xì)胞合成并分泌而來的一種多功能細(xì)胞因子,介導(dǎo)了細(xì)胞生長、分化的調(diào)控過程,并在炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)的發(fā)生過程中扮演著至關(guān)重要的角色,是目前國內(nèi)外所公認(rèn)的炎癥和免疫抑制因子。TGF-β1則是多肽類細(xì)胞因子之一,其在腫瘤發(fā)病早期可通過組織細(xì)胞生長周期進(jìn)而起到抑癌作用,然而,在腫瘤晚期階段,該信號通路中的有關(guān)分子會(huì)出現(xiàn)突變或功能障礙,進(jìn)而導(dǎo)致其對細(xì)胞的生長增殖調(diào)控作用喪失,促使腫瘤細(xì)胞反饋性增加TGF-β1的合成、分泌,刺激腫瘤新生血管的形成,同時(shí)抑制免疫細(xì)胞功能,為腫瘤細(xì)胞提供免疫抑制微環(huán)境,最終促進(jìn)了腫瘤的增殖、分化以及侵襲轉(zhuǎn)移。此外,經(jīng)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn):B7-H3、B7-H4與IL-10、TGF-β1表達(dá)均呈正相關(guān)。說明B7-H3和B7-H4在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制之一可能和調(diào)控IL-10、TGF-β1表達(dá)有關(guān)?？紤]原因,可能是B7-H3和B7-H4的過表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的JAK2-STAT3信號通路異常激活,進(jìn)而促使上述信號通路磷酸化程度增加,進(jìn)而激活多種經(jīng)典蛋白質(zhì)分子,導(dǎo)致IL-10以及TGF-β1的合成增多,最終促使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖加快、凋亡減少,且侵襲遷移能力增強(qiáng)。另外,病理分級G2+G3、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者B7-H3、B7-H4陽性率均高于病理分級G1、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。這充分證實(shí)了B7-H3和B7-H4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者病情嚴(yán)重程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。究其原因,可能和B7-H3、B7-H4通過激活JAK2-STAT3信號通路有關(guān),激活的JAK可直接調(diào)控PI3K/AKT信號通路,而激活的STAT3可直接調(diào)控Ras以及PI3K/AKT信號通路,進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及侵襲、轉(zhuǎn)移過程。

綜上所述,負(fù)性共刺激分子B7-H3和B7-H4在子宮內(nèi)膜癌中異常高表達(dá),且介導(dǎo)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移過程,其主要作用機(jī)制之一可能和調(diào)控IL-10、TGF-β1表達(dá)相關(guān)。