任佳慧，鄭啟萬，孟曉偉，龐 妍，陳蘭英，劉榮華*

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西 南昌 330004； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心，江西 南昌 330006）

交趾黃檀為豆科黃檀屬植物，主要分布在泰國、柬埔寨、越南、老撾等東南亞地區(qū)，民間常用于治療血瘀、癌癥［1］。交趾黃檀中主要含有黃酮、新黃酮、苯并呋喃類、萜類等成分，其中新黃酮類化合物為黃檀屬植物的特征性成分，主要分為4 種亞結(jié)構(gòu)類型（黃檀酚類、苯酰苯類、黃檀內(nèi)酯類、黃檀醌類）［2］，并且具有一定的抗骨質(zhì)疏松、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等活性［3-8］，開發(fā)前景廣闊。據(jù)報道，黃檀酚類化合物闊葉黃檀酚對H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧所致?lián)p傷具有較好的保護(hù)作用［9-10］，因此本研究以交趾黃檀心材為研究對象，采用色譜分離及波譜技術(shù)對其二氯甲烷部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離及鑒定，并對得到的12 個新黃酮類化合物進(jìn)行抗H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷活性研究。

1 材料

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）； Avance III HD 600 MHz 型核磁共振波譜儀（瑞士Bruker 公司）； Sephadex LH-20 （美國GE Healthcare 公司）； LC3000 型制備高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）； Chromcore 5 μm C18制備液相色譜柱（蘇州納譜分析技術(shù)有限公司）。薄層層析、柱層析硅膠（青島海洋化工有限公司）。石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇（分析純，廣東西隴化工股份有限公司）。

大鼠H9c2 心肌細(xì)胞株（中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫）。胎牛血清（美國Gibco 公司）； 高糖DMEM培養(yǎng)基、PBS 緩沖液、胰蛋白酶（北京索萊寶科技有限公司）； 無糖DMEM 培養(yǎng)基（南京維森特生物技術(shù)有限公司）； CCK-8 （北京蘭杰柯科技有限公司）。葛根素 （成都普思生物科技股份有限公司）。

交趾黃檀購自廣西防城港，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)付小梅教授鑒定為豆科黃檀屬植物交趾黃檀DalbergiacochinchinensisPierre ex Laness 心材，憑證標(biāo)本（編號201306）保存于江西中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本室。

2 提取與分離

取交趾黃檀心材18.35 kg，粉碎后用10 倍量70%乙醇加熱回流提取3 次，前2 次為每次3 h，后1 次為2 h，合并提取液，減壓濃縮得到總浸膏4.97 kg。取浸膏4.9 kg，加水混懸后依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取部位（15.1 g）、二氯甲烷萃取部位（1 206.8 g）、乙酸乙酯萃取部位（1 670.0 g）、正丁醇萃取部位（560.0 g）。

二氯甲烷部位經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯（10 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脫，得到Fr.1 ～Fr.4。Fr.2 （376.3 g） 經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯（50 ∶ 1 ～0 ∶ 1） 梯度洗脫，得到Fr.2.1 ～Fr.2.6。Fr.2.4 經(jīng)Sephadex LH-20 分離，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶1） 洗脫，得到Fr.2.4.1 ～Fr.2.4.6。Fr.2.4.2 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（75 ∶25） 洗脫，得到化合物2 （2.1 mg，tR＝20.4 min）； Fr.2.4.3 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（70 ∶30） 洗脫，得到化合物4 （3.4 mg，tR＝35.2 min）； Fr.2.4.5 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（78 ∶22） 洗脫，得到化合物5 （2.7 mg，tR＝22.5 min）。Fr.2.5 （80.2 g） 經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-丙酮（100 ∶1 ～1 ∶1） 梯度洗脫，得到Fr.2.5.1～Fr.2.5.4。Fr.2.5.1 經(jīng)反相制備HPLC純化，以乙腈-水 （45 ∶55） 洗脫得到化合物3（2.3 mg，tR＝56.2 min）； Fr.2.5.3 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以乙腈-水（45 ∶55～100 ∶0） 梯度洗脫，得到化合物8 （2.3 mg，tR＝26.4 min）、10（1.9 mg，tR＝42.5 min）。

Fr.3 （46.7 g） 經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-丙酮（80 ∶ 1 ～1 ∶ 1） 梯度洗脫，得到Fr.3.1 ～Fr.3.4。Fr.3.1 經(jīng)Sephadex LH-20 純化，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶1） 洗脫，得到化合物1 （7.1 g）；Fr.3.2 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（63 ∶37） 洗脫，得到化合物6 （1.6 mg，tR＝46.8 min）。

Fr.4 （728.4 g） 經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯（20 ∶1 ～0 ∶1） 梯度洗脫，得到Fr.4.1 ～Fr.4.8。Fr.4.2 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（75 ∶25） 洗脫，得到化合物7 （2.4 mg，tR＝21.4 min）、9 （2.2 mg，tR＝39.6 min）； Fr.4.4 經(jīng)反相制備HPLC 純化，以甲醇-水（78 ∶22） 洗脫，得到化合物11 （2.3 mg，tR＝35.2 min）； Fr.4.6經(jīng)反相制備HPLC 純化，以乙腈-水（72 ∶28） 洗脫，得到化合物12 （3.1 mg，tR＝51.3 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色結(jié)晶，易溶于甲醇，分子式C17H18O4，ESI-MSm/z： 285.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 7.19 （1H，dd，J＝7.7，1.5 Hz，H-6′），7.13 （1H，td，J＝7.9，1.6 Hz，H-4′），6.90 （1H，td，J＝7.5，1.1 Hz，H-5′），6.85 （1H，dd，J＝8.0，1.1 Hz，H-3′），6.78（1H，s，H-6），6.54 （1H，s，H-3），6.34 （1H，ddd，J＝17.1，10.3，5.9 Hz，H-2″），6.01 （1H，s，2′-OH），5.29 （1H，dt，J＝10.3，1.5 Hz，＝CH2cis），5.22 （1H，s，5-OH），5.21 （1H，d，J＝5.8 Hz，H-1″），5.07 （1H，dt，J＝17.2，1.6 Hz，＝CH2trans），3.90 （3H，s，4-OCH3），3.87（3H，s，2-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 122.5 （C-1），149.4 （C-2），97.0 （C-3），145.5 （ C-4），140.1 （ C-5），115.2 （ C-6），129.4 （ C-1′），153.7 （ C-2′），116.3 （ C-3′），128.4 （ C-4′），120.6 （ C-5′），127.7 （ C-6′），40.0 （ C-1″），139.0 （ C-2″），116.8 （ C-3″），57.2 （2-OCH3），56.2 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］ 報道基本一致，故鑒定為闊葉黃檀酚。

化合物2： 黃色粉末，易溶于甲醇，分子式C18H20O4，ESI-MSm/z： 299.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CH3OD）δ： 7.03 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-4′），7.00 （1H，d，J＝6.9 Hz，H-6′），6.75 （2H，m，H-3′，5′），6.71 （1H，s，H-6），6.60 （ 1H，s，H-3），6.22 （ 1H，m，H-2″），5.42 （1H，d，J＝5.7 Hz，＝CH2cis），5.12 （1H，d，J＝10.2 Hz，H-1″），4.77 （1H，d，J＝17.1 Hz，＝CH2trans），3.78 （3H，s，4-OCH3），3.68（3H，s，5-OCH3），3.67 （3H，s，2-OCH3）；13CNMR （ 150 MHz，CH3OD）δ： 123.4 （ C-1），151.9 （C-2），98.6 （C-3），148.3 （C-4），142.6（C-5），114.2 （C-6），114.7 （C-1′），154.6 （C-2′），118.8 （C-3′），129.0 （C-4′），126.8 （C-5′），129.4 （ C-6′），40.4 （ C-1″），140.3 （ C-2″），114.8 （C-3″），56.2 （5-OCH3），55.8 （2-OCH3），55.4 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報道基本一致，故鑒定為5-O-methyllatifolin。

化合物3： 棕色固體，易溶于丙酮，分子式C17H18O3，ESI-MSm/z： 269.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，acetone-d6）δ： 7.28 ～7.16 （5H，m，H-2′～6′），6.75 （1H，s，H-6），6.55 （1H，s，H-3），6.38 （1H，ddd，J＝17.1，10.2，7.0 Hz，H-2″），5.17 （1H，d，J＝10.2 Hz，＝CH2cis），5.11 （1H，d，J＝7.1 Hz，＝CH2trans），4.97（1H，d，J＝17.1 Hz，H-1″），3.74 （3H，s，2-OCH3），3.69 （3H，s，5-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，acetone-d6）δ： 120.7 （C-1），149.0 （C-2），101.3 （C-3），148.7 （C-4），143.7 （C-5），114.9 （C-6），142.7 （C-1′），128.0 （C-2′，6′），128.4 （C-3′，5′），125.8 （C-4′），47.4 （C-1″），140.9 （C-2″），114.9 （C-3″），56.5 （5-OCH3），55.2 （2-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］ 報道基本一致，故鑒定為mimosifoliol。

化合物4： 黃色粉末，易溶于甲醇，分子式C18H20O3，ESI-MSm/z： 283.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CH3OD）δ： 7.15 ～7.27 （5H，m，H-2′～6′），6.73 （1H，s，H-6），6.68 （1H，s，H-3），6.30 （1H，ddd，J＝17.0，10.2，6.7 Hz，H-2″），5.18 （1H，m，＝CH2cis），5.06 （1H，brd，J＝ 6.0 Hz，H-1″），4.90 （ 1H，m，＝CH2trans），3.86 （3H，s，4-OCH3），3.73 （6H，s，2，5-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CH3OD）δ：124.9 （C-1），153.1 （C-2），99.8 （C-3），150.0（C-4），144.2 （C-5），115.8 （C-6），144.8 （C-1′），129.1 （ C-2′，6′），129.5 （ C-3′，5′），127.0 （ C-4′），48.7 （ C-1″），142.0 （ C-2″），116.2 （ C-3″），56.8 （ 2-OCH3），56.9 （ 4-OCH3），57.6 （5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報道基本一致，故鑒定為5-O-methydalbergiphenol。

化合物5： 黃色粉末，易溶于氯仿，分子式C17H18O3，ESI-MSm/z： 269.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 7.18 ～7.26 （5H，m，H-2′～6′），6.75 （1H，s，H-6），6.52 （1H，s，H-3），6.27 （1H，ddd，J＝16.9，10.1，6.7 Hz，H-2″），5.20 （1H，d，J＝7.8 Hz，＝CH2cis），5.09 （1H，d，J＝6.6 Hz，H-1″），4.93 （1H，d，J＝17.1 Hz，＝CH2trans），3.90 （3H，s，4-OCH3），3.73 （3H，s，2-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 125.0 （C-1），150.9 （C-2），97.8（C-3），145.5 （C-4），139.7 （C-5），115.7 （C-6），143.7 （ C-1′），128.5 （ C-2′，6′），128.9（C-3′，5′），126.3 （C-4′），47.4 （C-1″），140.8（C-2″），116.3 （C-3″），56.5 （2-OCH3），57.4（4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 報道基本一致，故鑒定為dalbergiphenol。

化合物6： 黃色粉末，易溶于甲醇，分子式C14H12O4，ESI-MSm/z： 245.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 12.49 （1H，s，2-OH），7.66～7.51 （5H，m，H-2′～6′），7.13 （1H，s，H-3），5.21 （1H，s，H-6），4.00 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 111.8（C-1），160.1 （C-2），99.9 （C-3），153.8 （C-4），137.7 （C-5），116.7 （C-6），200.0 （C-7），138.2 （C-1′），128.8 （C-2′，6′），128.3 （C-3′，5′），131.5 （C-4′），56.3 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］ 報道基本一致，故鑒定為cearoin。

化合物7： 黃色粉末，易溶于甲醇，分子式C14H12O4，ESI-MSm/z： 243.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，acetone-d6）δ： 12.43 （1H，s，2-OH），7.69 ～7.58 （5H，m，H-2′ ～6′），7.01（1H，s，H-6），6.62 （1H，s，H-3），3.98 （3H，s，5-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，acetone-d6）δ：112.1 （ C-1），160.9 （ C-2），101.0 （ C-3），139.4 （ C-4），156.6 （ C-5），117.8 （ C-6），200.6 （C-7），139.8 （C-1′），129.2 （C-2′，6′），129.4 （ C-3′，5′），132.2 （ C-4′），56.6 （ 5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［15］ 報道基本一致，故鑒定為2，4-dihydroxy-5-methoxy-benzophenone。

化合物8： 黃色粉末，易溶于氯仿，分子式C15H14O4，ESI-MSm/z： 257.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 12.68 （1H，s，2-OH），7.75～7.59 （5H，m，H-2′～6′），7.08 （1H，s，H-6），6.65 （1H，s，H-3），4.04 （3H，s，4-OCH3），3.80 （3H，s，5-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 110.9 （C-1），161.3 （C-2），100.7 （ C-3），156.9 （ C-4），141.7 （ C-5），114.4 （ C-6），199.6 （ C-7），138.4 （ C-1′），128.4 （ C-2′，6′），128.7 （ C-3′，5′），131.5（C-4′），56.5 （4-OCH3），56.3 （5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］ 報道基本一致，故鑒定為2-hydroxy-4，5-dimethoxybenzophenone。

化合物9： 黃色結(jié)晶，易溶于丙酮，分子式C14H12O5，ESI-MSm/z： 259.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，acetone-d6）δ： 12.43 （1H，s，2-OH），7.64 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，H-6′），7.11 （1H，s，H-3），7.01 （1H，d，J＝8.6 Hz，H-3′，5′），6.59 （1H，s，H-6），3.97 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，acetone-d6）δ：112.2 （ C-1），160.4 （ C-2），101.0 （ C-3），155.9 （ C-4），139.6 （ C-5），115.9 （ C-6），199.3 （C-7），130.7 （C-1′），132.4 （C-2′，6′），117.8 （ C-3′，5′），161.8 （ C-4′），56.5 （ 4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［17］ 報道基本一致，故鑒定為melannoin。

化合物10： 黃色粉末，易溶于甲醇，分子式C14H12O5，ESI-MSm/z： 259.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，acetone-d6）δ： 8.24 （1H，dd，J＝7.9，1.5 Hz，H-6′），7.80 （1H，ddd，J＝8.6，7.2，1.6 Hz，H-4′），7.59 （1H，s，H-6），7.56（1H，d，J＝8.4 Hz，H-3′），7.44 （1H，dd，J＝11.1，3.9 Hz，H-5′），7.13 （ 1H，s，H-3），4.07 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，acetone-d6）δ： 116.0 （ C-1），152.3 （ C-2），100.6 （ C-3），155.6 （ C-4），145.4 （ C-5），109.4 （ C-6），175.9 （ C-7），122.2 （ C-1′），157.0 （ C-2′），118.6 （ C-3′），135.0 （ C-4′），124.5 （C-5′），126.8 （C-6′），56.9 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］ 報道基本一致，故鑒定為2，2′，5-trihydroxy-4-methoxybenzophenone。

化合物11： 白色粉末，易溶于甲醇，分子式C16H12O4，ESI-MSm/z： 267.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，acetone-d6）δ： 7.60 ～7.52 （5H，m，H-2′～6′），7.03 （1H，s，H-8），6.86 （1H，s，H-5），6.14 （1H，s，H-3），4.00 （3H，s，7-OCH3）；13C-NMR （ 150 MHz，acetone-d6）δ：161.1 （ C-2），112.5 （ C-3），156.2 （ C-4），111.5 （ C-5），144.3 （ C-6），152.5 （ C-7），101.0 （ C-8），150.1 （ C-9），112.8 （ C-10），136.8 （C-1′），129.2 （C-2′，6′），129.7 （C-3′，5′），130.3 （C-4′），56.8 （7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］報道基本一致，故鑒定為黃檀素。

化合物12： 黃色結(jié)晶，易溶于氯仿，分子式C16H14O3，ESI-MSm/z： 253.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 7.27 ～7.35 （5H，m，H-2′～6′），6.51 （1H，s，H-3），6.12 （1H，m，H-2″），5.94 （1H，s，H-6），5.30 （1H，d，J＝10.1 Hz，＝CH2cis），5.02 （1H，d，J＝17.1 Hz，＝CH2trans），4.96 （1H，d，J＝5.7 Hz，H-1″），3.83 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ： 151.0 （C-1），186.3 （C-2），107.9（C-3），158.5 （C-4），182.4 （C-5），131.6 （C-6），139.3 （ C-1′），128.6 （ C-2′，6′），128.8（C-3′，5′），127.2 （C-4′），47.0 （C-1″），137.2（C-2″），118.2 （C-3″），56.3 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］ 報道基本一致，故鑒定為4-甲氧基黃檀醌。

4 抗H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷活性研究

4.1 H9c2 細(xì)胞存活率 取對數(shù)生長期H9c2 心肌細(xì)胞，以1.0×104/cm2的密度接種于96 孔板上，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄去上清液，加入含1 000、100、10、1、0.1 μmol/L 化合物1～12 細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔100 μL，另設(shè)正常細(xì)胞對照組，每組6 個復(fù)孔，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄去上清液，加入10% CCK-8，在450 nm 波長處測定光密度 （OD） 值，計算IC50值。

由表1 可知，化合物6～7、12 對H9c2 細(xì)胞有一定的細(xì)胞毒性，其余化合物作用后H9c2 細(xì)胞存活率高，毒性較小，表明新黃酮中苯酰苯類化合物毒性較強，對H9c2 細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性，可能與其羰基未成環(huán)有關(guān)。

表1 各化合物對H9c2 細(xì)胞的IC50值（μmol/L，±s，n＝6）Tab.1 IC50 values of various compounds on H9c2 cells（μmol/L，±s，n＝6）

表1 各化合物對H9c2 細(xì)胞的IC50值（μmol/L，±s，n＝6）Tab.1 IC50 values of various compounds on H9c2 cells（μmol/L，±s，n＝6）

化合物IC50值化合物IC50值1＞100 774.44±0.44 2＞1008＞100 3＞1009＞100 4＞10010＞100 5＞10011＞100 6 13.14±0.901266.40±0.19

4.2 H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷保護(hù)作用 取對數(shù)生長期H9c2 細(xì)胞，以1.0×104/cm2的密度接種于96 孔板上，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，正常組與模型組棄去原培養(yǎng)液，加入10%FBS，給藥組加入含不同濃度化合物1 ～12 及50 μmol/L 葛根素（陽性對照） 的10%FBS，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，正常組棄去上清液，加入10%FBS； 模型組棄去上清液，加入無糖DMEM 缺氧液； 給藥組棄去上清液，加入含不同濃度化合物1～12 及50 μmol/L 葛根素的無糖DMEM 缺氧液，將模型組與給藥組放入缺氧小室缺氧20 h，正常組與模型組棄去上清液，加入10%FBS； 給藥組棄去上清液，加入含不同濃度化合物1～12 及50 μmol/L葛根素的10%FBS，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h。

細(xì)胞缺氧復(fù)氧完成后，采用CCK-8 法檢測細(xì)胞活力，將復(fù)氧后的細(xì)胞上清液加入10%CCK-8，在450 nm 波長處測定OD 值，計算細(xì)胞活力。

由圖1 可知，化合物1 的細(xì)胞活力較弱，最小有效濃度為5 μmol/L； 化合物2、8、11 最小有效濃度均為1.25 μmol/L，其中化合物8 活性較強；化合物5、7、9、12 最小有效濃度均為0.625 μmol/L，其中化合物5 活性較強； 化合物4、10 最小有效濃度均為0.312 5 μmol/L； 化合物3、6 最小濃度均為0.156 25 μmol/L，其中化合物3 活性最強。

圖1 各化合物對H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用Fig.1 Protective effects of various compounds on hypoxia/reoxygenation injury in H9c2 cells

4.3 新黃酮類成分抗H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷構(gòu)效關(guān)系分析 黃檀酚類化合物（1～5） 結(jié)構(gòu)差異主要為B 環(huán)是否存在羥基及A 環(huán)4、5 位羥基及甲氧基的取代位置不同，根據(jù)化合物1～2、4～5 化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞實驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)B 環(huán)2′位存在羥基，可能會降低其H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧保護(hù)活性； 分析化合物3 ～5 化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞實驗結(jié)果，推測黃檀酚類化合物A 環(huán)4 位存在羥基或者5 位存在甲氧基，均會增強其對H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的保護(hù)活性。

苯酰苯類化合物（6 ～10） 結(jié)構(gòu)差異主要為B環(huán)是否存在羥基，以及A 環(huán)4、5 位羥基及甲氧基的取代位置不同，根據(jù)化合物6、9 ～10 化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞實驗結(jié)果，發(fā)現(xiàn)B 環(huán)存在羥基，可能會降低其H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧保護(hù)活性； 分析化合物6～8 化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞實驗結(jié)果，推測苯酰苯類化合物A 環(huán)羥基數(shù)目增多其抗心肌缺氧/復(fù)氧活性增強。

對黃檀酚及苯酰苯類化合物（11～12） 進(jìn)行構(gòu)效分析，發(fā)現(xiàn)兩者B 環(huán)存在羥基均會降低其活性，推測羥基取代可能會影響其電子分布及共軛情況，從而影響其極性，降低其對H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的保護(hù)作用。黃檀內(nèi)酯及黃檀醌類化合物因缺少同類型化合物，故難以比較其抗H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷構(gòu)效關(guān)系，但羰基數(shù)目增多、羰基是否成環(huán)對細(xì)胞毒性有較大影響。

4 結(jié)論

本研究從交趾黃檀二氯甲烷部位中分離得到12 個新黃酮類化合物，并對其進(jìn)行抗H9c2 心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷活性研究。結(jié)果，化合物1 ～5 為黃檀酚類，6～10 為苯酰苯類化合物，11 為黃檀內(nèi)酯類，12 為黃檀醌類，其中黃檀酚類化合物具有更好的開發(fā)價值及藥用療效，其IC50值與最低藥物有效濃度間差異大于其余3 類化合物，并且細(xì)胞毒性最低，具有更好的用藥安全性及更大的藥物有效濃度選擇范圍，有一定的開發(fā)價值。分析12 個化合物構(gòu)效關(guān)系得知，黃檀酚類化合物其抗H9c2 細(xì)胞缺氧/復(fù)氧活性與其骨架中羥基、甲氧基的數(shù)目及位置具有密切的關(guān)系，B 環(huán)中存在羥基可能會降低其活性，A 環(huán)中C-4 位存在羥基或C-5 位存在甲氧基都會增強其活性； 苯酰苯類化合物毒性較強，其B 環(huán)存在羥基會降低其藥物活性，A 環(huán)中羥基數(shù)目增多反而會增強其活性； 黃檀內(nèi)酯類化合物11及黃檀醌類化合物12 也表現(xiàn)出較好的抗缺氧/復(fù)氧損傷活性。同時，構(gòu)效關(guān)系的研究也可以用于指導(dǎo)系列化合物進(jìn)行后續(xù)合成，對抗心肌缺氧/復(fù)氧損傷研究具有一定的意義［20-21］。