劉義寧,李德敏,邢曉天,楊利芹（天津市安定醫(yī)院,天津 300000）

精神分裂癥是一種臨床常見(jiàn)的涉及情感、思維、感知覺(jué)、行為等障礙和精神活動(dòng)不協(xié)調(diào)的重型精神疾病，多發(fā)于青壯年時(shí)期[1]。精神分裂癥若不能及時(shí)緩解，患者可能會(huì)出現(xiàn)毀壞物品、攻擊他人、自殘、自殺等行為，還可能并發(fā)代謝綜合征、心血管疾病、糖尿病等，嚴(yán)重威脅患者及他人生命安全[2-3]。探尋精神分裂癥特異性生物標(biāo)志物，對(duì)臨床病情評(píng)估和治療方案確定有重要意義。Matias[4]等人的研究表明，乙酰膽堿酯酶活性與抑郁癥進(jìn)展中膽堿能神經(jīng)傳遞過(guò)程密切相關(guān)。有研究[5]表明，微小RNA-137（microRNA-137，miR-137）在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化、成熟過(guò)程中有重要作用，可能是人類(lèi)神經(jīng)、腫瘤疾病治療靶點(diǎn)。研究[6]顯示miR-137與精神分裂癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。但當(dāng)前鮮有針對(duì)乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)與精神分裂癥關(guān)系的探究，因此本研究通過(guò)檢測(cè)首發(fā)精神分裂癥患者治療前后血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平，分析與PANSS評(píng)分相關(guān)性，探究二者與首發(fā)精神分裂癥患者病情嚴(yán)重程度的關(guān)系及在疾病進(jìn)展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年6月-2019年6月天津市安定醫(yī)院收治的首發(fā)精神分裂癥患者120例作為首發(fā)精神分裂癥組，其中男性63例，女性57例，年齡18-47歲，平均（27.31±8.65）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)美國(guó)精神疾病診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第5版（DSM-V），確診為精神分裂癥急性期患者，且陽(yáng)性與陰性癥狀量表（Positive and negative syndrome scale，PANSS）總分≥60分[7]。②右利手。③首次發(fā)病，入組前3個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)抗抑郁或精神類(lèi)藥物。④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有腦部外傷及其他神經(jīng)系統(tǒng)類(lèi)疾病。②合并患有免疫系統(tǒng)疾病或心血管疾病。③妊娠期或哺乳期患者。④有聽(tīng)說(shuō)功能障礙患者。另選取同期在我院體檢顯示健康者120例作為健康對(duì)照組，其中男性66例，女性54例，年齡16-45歲，平均（26.47±8.26）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 主要儀器和試劑 實(shí)時(shí)熒光定量（Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）儀、qRT-PCR試劑盒、RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、乙酰膽堿酯酶檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集及臨床資料收集 健康對(duì)照組于體檢時(shí)清晨（7:00-9:00），首發(fā)精神分裂癥組患者于入組后次日清晨（7:00-9:00）及治療4周后次日清晨（7:00-9:00）采集空腹外周靜脈血5mL，以4℃、3000r/min離心15min，取上層清液分裝于無(wú)菌EP管中，于-80℃保存，用于檢測(cè)血清乙酰膽堿酯酶及miR-137表達(dá)水平。

于患者入組時(shí)收集患者性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（Body mass index，BMI）、吸煙史、家族史、受教育程度等臨床資料。

1.3.2 血清乙酰膽堿酯酶及miR-137表達(dá)水平檢測(cè) 采用化學(xué)比色法進(jìn)行血清乙酰膽堿酯酶檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。采用qRT-PCR法進(jìn)行血清miR-137表達(dá)水平檢測(cè)。使用試劑盒提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，用于qRT-PCR實(shí)驗(yàn)。qRT-PCR引物見(jiàn)表1。20μL反應(yīng)體系如下：上、下游引物各2μ L，cDNA 2μL，Mix 10μL，ROX 0.4μL，無(wú)酶水3.6μ L。反應(yīng)步驟如下：95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；95℃，14s；63℃，35s；72℃，16s；40個(gè)循環(huán)，一個(gè)樣品三次重復(fù)。采用2-ΔΔCT法計(jì)算miR-137表達(dá)水平。

表1 qRT-PCR引物

1.3.3 治療方法 所有入組患者均應(yīng)用非典型抗精神病藥物利培酮治療，初始劑量為2mg/d，根據(jù)病情進(jìn)展逐步調(diào)整藥物劑量，4周內(nèi)平均劑量為4.5mg/d，劑量范圍為2-6mg/d。在治療劑量下，患者很少發(fā)生錐體外系不良反應(yīng)，若發(fā)生椎體外系不良反應(yīng)，則用苯海索（2-8mg/d）對(duì)抗，同時(shí)不合并其他藥物治療。此外，根據(jù)患者情況采取電抽搐、心理等治療。

1.3.4 療效判定 治療4周后進(jìn)行PANSS評(píng)定，由經(jīng)過(guò)量表訓(xùn)練且具有5年臨床經(jīng)驗(yàn)的精神科醫(yī)師進(jìn)行操作，確保評(píng)分準(zhǔn)確性。記錄患者PANSS總分、陽(yáng)性癥狀評(píng)分、陰性癥狀評(píng)分及一般精神病理評(píng)分。根據(jù)PANSS評(píng)分?jǐn)M定療效判定標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)PANSS評(píng)分降低≥75%為臨床治愈，當(dāng)PANSS評(píng)分降低≥50%且＜75%為顯著進(jìn)步，當(dāng)PANSS評(píng)分降低≥25%且＜50%為進(jìn)步，反之為無(wú)效。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS20.0軟件對(duì)本文中數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0.05表示數(shù)據(jù)之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 首發(fā)精神分裂癥組和健康對(duì)照組一般資料比較 如表2所示，首發(fā)精神分裂癥組和健康對(duì)照組性別比例、年齡、BMI、受教育程度、吸煙比例、有無(wú)家族史比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 兩組一般資料比較[()/n(%)]

表2 兩組一般資料比較[()/n(%)]

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2.2 首發(fā)精神分裂癥組和健康對(duì)照組血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較 首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組（P＜0.05），miR-137表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 兩組血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較()

表3 兩組血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較()

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2.3 治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平及PANSS總分比較 治療4周后，首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶及PANSS總分明顯低于治療前（P＜0.05），miR-137表達(dá)水平明顯高于治療前（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平及PANSS總分比較()

表4 治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平及PANSS總分比較()

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2.4 治療后首發(fā)精神分裂癥組患者不同療效血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較 相對(duì)于臨床治愈，治療4周后顯著進(jìn)步、進(jìn)步及無(wú)效患者乙酰膽堿酯酶依次升高、miR-137表達(dá)水平依次降低（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表5 治療后首發(fā)精神分裂癥組患者不同療效血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較()

表5 治療后首發(fā)精神分裂癥組患者不同療效血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平比較()

注：與臨床治愈比較，aP＜0.05；與顯著進(jìn)步比較，bP＜0.05。

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2.5 治療后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平與PANSS評(píng)分相關(guān)性 如表6所示，治療4周后，首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶表達(dá)水平與PANSS總分、陰性癥狀評(píng)分、一般精神病理評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05），miR-137表達(dá)水平與PANSS總分、陰性癥狀評(píng)分、一般精神病理評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

表6 治療后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶、miR-137表達(dá)水平與PANSS評(píng)分相關(guān)性

2.6 治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶與miR-137表達(dá)水平相關(guān)性 治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶與miR-137表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)（治療前r=-0.490，P＜0.001；治療后r=-0.530，P＜0.001），見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 治療前患者血清乙酰膽堿酯酶與miR-137表達(dá)水平相關(guān)性

圖2 治療后患者血清乙酰膽堿酯酶與miR-137表達(dá)水平相關(guān)性

3 討論

首發(fā)精神分裂癥臨床表現(xiàn)為幻聽(tīng)、幻視、妄想、情感淡漠及情感反應(yīng)不協(xié)調(diào)、意志減退、缺乏應(yīng)有的積極性和主動(dòng)性、存在認(rèn)知功能缺陷等。目前研究認(rèn)為，精神分裂癥發(fā)病可能受多巴胺系統(tǒng)活性增強(qiáng)、神經(jīng)發(fā)育相關(guān)因子水平等因素影響[8]。

乙酰膽堿酯酶是生物體內(nèi)神經(jīng)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶，可通過(guò)降解乙酰膽堿抑制神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)突觸后膜的刺激作用，促進(jìn)神經(jīng)元受損發(fā)生[9]。黃邦鋒[10]等人的研究發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥患者血清膽堿酯酶水平較健康體檢者高，經(jīng)治療后血清膽堿酯酶水平明顯降低。郭明冬[11]等人的研究顯示，血管性癡呆患者經(jīng)治療后血清乙酰膽堿酯酶水平明顯降低。本研究結(jié)果顯示，首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶明顯高于健康對(duì)照組，與郭明冬等人的研究結(jié)論類(lèi)似，提示乙酰膽堿酯酶水平升高可能與精神分裂癥發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于臨床治愈，治療4周后顯著進(jìn)步、進(jìn)步及無(wú)效患者乙酰膽堿酯酶依次升高，提示血清乙酰膽堿酯酶水平降低可能與精神分裂癥患者癥狀改善有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，治療4周后，首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶與PANSS總分、陰性癥狀評(píng)分、一般精神病理評(píng)分呈正相關(guān)，提示血清乙酰膽堿酯酶水平可能反映精神分裂癥患者總體患病水平，尤其是陰性癥狀及一般精神病理癥狀嚴(yán)重程度，檢測(cè)其水平可能對(duì)療效的改善有積極作用。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一種在真核生物中廣泛存在的短鏈內(nèi)源非編碼RNA，可參與蛋白質(zhì)編碼基因調(diào)控。研究[12]表明，miRNA可參與神經(jīng)元細(xì)胞周期調(diào)控、大腦功能形成、突觸形成及神經(jīng)遞質(zhì)釋放等生物學(xué)過(guò)程。相關(guān)研究[13]報(bào)道，血漿miR-137水平與精神分裂癥患者的療效有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-137基因多態(tài)性可能通過(guò)改變大腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)，影響精神分裂癥發(fā)生發(fā)展。研究顯示外周血中miR-137表達(dá)可作為判斷精神分裂癥的生物標(biāo)志物。此外，廖東升[14]等人的研究報(bào)道，雙相障礙抑郁發(fā)作組與躁狂發(fā)作組患者血漿miR-137表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照組。本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，首發(fā)精神分裂癥組患者血清miR-137表達(dá)水平明顯降低，提示血清miR-137水平降低可能預(yù)示精神分裂癥發(fā)生發(fā)展。有研究報(bào)道，miR-137多態(tài)性與精神分裂癥患者的臨床特征密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于臨床治愈，治療4周后顯著進(jìn)步、進(jìn)步及無(wú)效患者miR-137表達(dá)水平依次降低，提示治療4周后血清miR-137水平升高可能與患者病情好轉(zhuǎn)存在一定關(guān)聯(lián)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，治療4周后，首發(fā)精神分裂癥組患者血清miR-137表達(dá)水平與PANSS總分、陰性癥狀評(píng)分、一般精神病理評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，提示治療后miR-137水平升高可用于評(píng)估精神分裂癥患者陰性癥狀、一般精神病理癥狀改善情況，檢測(cè)miR-137水平可能對(duì)治療方案的制定及提高精神分裂癥的治療效果有幫助。

有研究表明，炎癥因子水平與精神分裂癥進(jìn)展密切相關(guān)，未經(jīng)臨床治療的首發(fā)精神分裂癥患者CRP、IL-6等炎癥因子明顯上升。臨床顯示，術(shù)后譫妄患者多伴有乙酰膽堿酯酶水平降低，同時(shí)存在炎癥指標(biāo)升高，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并影響疾病嚴(yán)重程度。本研究結(jié)果顯示，治療前后首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶與miR-137表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)，提示乙酰膽堿酯酶與miR-137可能相互作用，影響精神分裂癥的發(fā)生發(fā)展，并反映精神分裂癥治療效果，但具體的調(diào)控作用需在今后補(bǔ)充相關(guān)內(nèi)容深入探討。此外，起病年齡、受教育年限及治療時(shí)間長(zhǎng)短等因素均對(duì)患者療效具有一定影響，但由于本研究樣本基數(shù)小，可能對(duì)結(jié)果造成一定偏倚，仍需進(jìn)一步擴(kuò)樣本對(duì)療效影響因素深入分析。

綜上所述，治療4周后，首發(fā)精神分裂癥組患者血清乙酰膽堿酯酶表達(dá)水平明顯降低，miR-137表達(dá)水平明顯升高，二者水平與PANSS總分、陰性癥狀評(píng)分、一般精神病理評(píng)分有關(guān)，可反映首發(fā)精神分裂癥患者治療效果，但其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探究。