張志揚(yáng) 劉芬 張雪鶴 房彬彬 張冀鑫 謝騫 楊毅寧 李曉梅

目的：探討糖脂毒性環(huán)境中抑制長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lnc RNA）人類肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（MALAT1）的表達(dá)水平對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能影響的分子機(jī)制。

方法：用葡萄糖和棕櫚酸處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，建立體外糖脂毒性內(nèi)皮細(xì)胞模型，并分為對(duì)照組、高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組以及小干擾RNA（si-RNA）干預(yù)的高糖高脂+si-MALAT1 組、高糖高脂+si-絲裂原活化蛋白激酶1（si-MAPK1）組。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)MALAT1、MAPK1 的mRNA 表達(dá)水平；蛋白免疫印跡法檢測(cè)自噬、線粒體融合分裂、凋亡、通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；免疫熒光共聚焦定位檢測(cè)自噬及溶酶體相關(guān)蛋白的熒光共定位情況；透射電鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞中自噬溶酶體的數(shù)目；線粒體探針染色檢測(cè)線粒體形態(tài)；免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生；流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡；細(xì)胞增殖及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞的增殖及遷移能力；血管形成試驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞中新生血管數(shù)量。

結(jié)果：與對(duì)照組相比，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組的MALAT1 mRNA、磷酸化的絲裂原活化蛋白激酶1（p-MAPK1）的表達(dá)水平增加，磷酸化的哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表達(dá)水平下降，P 均<0.05。與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組微管相關(guān)蛋白 1A/1B-輕鏈3（LC3）、螯合體1（p62）、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved caspase-3）、BCL-2 相關(guān)X 蛋白（BAX）、p-MAPK1 的表達(dá)水平均下降，線粒體融合蛋白視神經(jīng)萎縮蛋白1（OPA1）、BCL-2、p-mTOR 的表達(dá)水平均增加，P 均<0.05；LC3 和溶酶體相關(guān)膜蛋白2（LAMP2）蛋白的熒光共定位陽(yáng)性顆粒增加（P 均<0.01），溶酶體數(shù)目減少；細(xì)胞增殖、遷移、成管能力均增加（P均<0.01）。與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MAPK1 組內(nèi)皮細(xì)胞中p-MAPK1 的表達(dá)下降，p-mTOR 的表達(dá)上升（P均<0.01）。

結(jié)論：抑制MALAT1 表達(dá)，可降低糖脂毒性環(huán)境中線粒體的自噬水平，減少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡及改善內(nèi)皮細(xì)胞的功能，可能與調(diào)節(jié)MAPK1/mTOR 信號(hào)通路有關(guān)。

心血管疾?。–VD）是導(dǎo)致人群死亡和殘疾的主要原因[1]。高血糖、高血脂是動(dòng)脈粥樣硬化（AS）發(fā)生發(fā)展的重要驅(qū)動(dòng)因素[2]。高血糖會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和自噬[3]，抑制高血糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞自噬對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用[4]。血脂過(guò)高可引起低密度脂蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞下積聚，逐漸堆積成斑塊導(dǎo)致AS[5]?！疤侵拘浴钡母拍钭钤缡窃谝认佴?細(xì)胞損傷中提出[6]，目前研究發(fā)現(xiàn)，糖脂毒性可影響內(nèi)皮細(xì)胞功能，加速AS 的進(jìn)程[7-8]。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lnc RNA）是長(zhǎng)度至少為200 bp，具有高度保守序列的非蛋白質(zhì)編碼RNA，其可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能，影響AS 的進(jìn)展[8]。人類肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（MALAT1）是一種保守的lnc RNA，在內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)，與內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管生成等功能密切相關(guān)[9]。然而，糖脂毒性環(huán)境中MALAT1 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能影響的具體機(jī)制很少研究。鑒于此，本研究探究了糖脂毒性環(huán)境中MALAT1 對(duì)內(nèi)皮功能的影響及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）購(gòu)于深圳豪地華拓生物科技有限公司；澳洲胎牛血清、DMEM 培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)Gibco 公司；活性氧（ROS）試劑盒購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；CCK8 試劑盒購(gòu)于北京博奧森生物科技有限公司；E 偶聯(lián)膜聯(lián)蛋白V（Annexin-V）凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于美國(guó)BD 公司；BCA 蛋白定量試劑盒購(gòu)于美國(guó)Thermo 公司；微管相關(guān)蛋白 1A/1B-輕鏈3（LC3）、螯合體1（p62）、芐氯素1（Beclin1）一抗購(gòu)于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；BCL-2 相關(guān)X蛋白（BAX）、BCL-2 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）、線粒體融合蛋白視神經(jīng)萎縮蛋白1（OPA1）、動(dòng)力相關(guān)蛋白（Drp1）、絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、磷酸化MAPK1（p-MAPK1）、磷酸化哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）一抗購(gòu)于美國(guó)Cell Signaling Technology 公司。羊抗兔/羊抗鼠 IgG-HRP 二抗購(gòu)于北京博奧森生物科技有限公司。

1.2 方法

細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞模型制作及分組：HUVEC 培養(yǎng)在含有5%胎牛血清、1%抗生素的DMEM 完全培養(yǎng)基中，每隔2 天換液1 次，在細(xì)胞密度達(dá)95%左右時(shí)，按照1:2 的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代處理。在細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)加入終濃度為30 mmol/L 葡萄糖、500 μmol/L 棕櫚酸培養(yǎng)24 h，制備體外高糖高脂處理細(xì)胞模型；在細(xì)胞密度達(dá)70%左右時(shí)提前給予小干擾RNA（si-RNA）處理，6 h 后更換為含抗生素的完全培養(yǎng)基，24 h 后加入高糖高脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h制備高糖高脂si-RNA 干預(yù)細(xì)胞模型。將不同處理的HUVEC 分為對(duì)照組、高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組以及經(jīng)si-RNA 干預(yù)的高糖高脂+si-MALAT1 組、高糖高脂+si-MAPK1 組。

細(xì)胞內(nèi)MALAT1 表達(dá)及活性氧（ROS）的測(cè)定：用TRIzol 試劑法提取細(xì)胞總RNA，測(cè)定其濃度和純度；逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA；嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)配置逆轉(zhuǎn)錄聚合酶體系；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）擴(kuò)增體系相同[10]，每組3 個(gè)副孔。引物序列見(jiàn)表1。ROS 檢測(cè)[7]：在24 孔板中進(jìn)行爬片后，嚴(yán)格按ROS試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組ROS 含量并在熒光顯微鏡下觀察并拍照。

表1 引物序列

自噬蛋白LC3、溶酶體相關(guān)膜蛋白2（LAMP2）共聚焦定位[7]：在24 孔板中根據(jù)不同分組進(jìn)行細(xì)胞處理，每組3 個(gè)復(fù)孔。各組細(xì)胞干預(yù)結(jié)束后，多聚甲醛固定爬片；室溫封閉；孵育一抗（LC3、LAMP2）；孵育相應(yīng)種屬熒光標(biāo)記的熒光二抗，避光孵育，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核；封片后在熒光顯微鏡下觀察；隨后進(jìn)行激光共聚焦熒光檢測(cè)。透射電鏡觀察溶酶體數(shù)目[7]：收集細(xì)胞，固定保存。離心洗滌后加入1%瓊脂糖溶液，1%鋨酸避光室溫固定，脫水，包埋過(guò)夜，聚合，切片，染色過(guò)夜后在透射電子顯微鏡下觀察，采集圖像分析。

線粒體熒光探針?lè)z測(cè)線粒體動(dòng)力學(xué)功能：在24 孔板中進(jìn)行爬片計(jì)數(shù)，根據(jù)不同分組進(jìn)行細(xì)胞處理，每組3 個(gè)復(fù)孔。各組細(xì)胞干預(yù)結(jié)束后，多聚甲醛固定爬片，孵育，染核，封片，然后在熒光顯微鏡/共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像[11]。

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：收集處理后的各組細(xì)胞，嚴(yán)格按照E 偶聯(lián)Annexin-V 凋亡檢測(cè)試劑盒操作，在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞凋亡率[12]。

CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞存活率[12]：將細(xì)胞接種到96孔板中，按照上述方法分別處理各組細(xì)胞，每組3個(gè)復(fù)孔；干預(yù)結(jié)束后，分別于0、24、48、72 h 進(jìn)行轉(zhuǎn)染；每孔加入10 μl CCK-8 溶液，37℃孵箱孵育2 h，用紫外分光光度計(jì)測(cè)各組在540 nm 處的吸光度。

傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移能力[12]：細(xì)胞計(jì)數(shù)后6孔板鋪板，每組3 個(gè)復(fù)孔；24 h 后細(xì)胞劃痕，按照上述方法分別處理各組細(xì)胞放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。分別于0 、24、48 h 在高倍顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移情況。

血管化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)成管能力[12]：細(xì)胞計(jì)數(shù)后6 孔板鋪板，每組3 個(gè)復(fù)孔；處理各組細(xì)胞，在血管生成載玻片每個(gè)孔中加入10 μl 基質(zhì)膠后放入培養(yǎng)箱中使膠凝固；每孔加入50 μl 細(xì)胞懸液；培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h 后開(kāi)始觀察，并在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)拍照記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

蛋白免疫印跡法檢測(cè)自噬、線粒體融合分裂、凋亡、通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平：各組細(xì)胞干預(yù)結(jié)束后，使用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。配制蛋白上樣體系；配制10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠，蛋白上樣20 μg，電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，Tris 緩沖鹽溶液+0.1% Tween 20（pH7.4，TBST）溶液洗膜3 遍，5%脫脂牛奶封閉2 h，再次洗膜3遍后，裁剪PVDF膜，分別放置在相應(yīng)稀釋好的一抗中，4℃孵育過(guò)夜，洗膜3 遍后，二抗孵育1 h，漂洗3 遍后，進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光法（ECL）顯影。利用Image J 軟件進(jìn)行灰度分析，以GAPDH 作為內(nèi)參照計(jì)算各組蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用方差分析，多組間兩兩比較采用SNK 法。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抑制MALAT1 表達(dá)后糖脂毒性環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞中的線粒體自噬情況（圖1）

圖1 抑制MALAT1 表達(dá)后糖脂毒性環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞中的線粒體自噬情況（x±s,n=3）

RT-qPCR 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組MALAT1 mRNA 表達(dá)水平升高（P均<0.001）；與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組MALAT1 mRNA 的表達(dá)水平明顯降低（P<0.001），見(jiàn)圖1A。蛋白免疫印跡法結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組自噬激活的特異性標(biāo)志物L(fēng)C3、p62 表達(dá)增加（P均<0.05），Beclin1 表達(dá)下降（P均<0.01），見(jiàn)圖1B。熒光共定位情況結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組中LC3 和LAMP2 蛋白的熒光共定位陽(yáng)性顆粒增加（P均<0.01）；與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組中LC3、LAMP2 陽(yáng)性顆粒減少（P均<0.01），見(jiàn)圖1C。透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞中溶酶體數(shù)目增加；與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組中溶酶體數(shù)目減少，見(jiàn)圖1D。

2.2 抑制MALAT1 表達(dá)對(duì)糖脂毒性引起的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激與線粒體動(dòng)力學(xué)功能障礙的影響（圖2）

ROS 熒光探針檢測(cè)與蛋白免疫印跡法結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組ROS、線粒體分裂蛋白Drp1 的表達(dá)水平均增加（P均<0.05），細(xì)胞內(nèi)線粒體裂變?cè)龆啵憩F(xiàn)為線粒體碎片化，抑制MALAT1 表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)的線粒體裂變減少，融合增多。與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組細(xì)胞ROS 表達(dá)下降，線粒體融合蛋白OPA1 表達(dá)水平增高（P均<0.05）。

2.3 抑制MALAT1對(duì)糖脂毒性導(dǎo)致的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平的影響（圖3）

與對(duì)照組相比，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組中細(xì)胞凋亡率，剪切后活化的caspase-3、BAX 表達(dá)均增加，BCL-2 表達(dá)減少（P均<0.01）；與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組凋亡率，剪切后活化的caspase-3、BAX 表達(dá)均下降，BCL-2表達(dá)增加（P均<0.05），見(jiàn)圖3A、3B。

2.4 抑制MALAT1 表達(dá)對(duì)糖脂毒性導(dǎo)致的人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞增殖、遷移、成管功能障礙的影響（圖4）

圖4 抑制MALAT1 表達(dá)對(duì)糖脂毒性導(dǎo)致的人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞增殖、遷移、成管功能障礙的影響（x±s,n=3）

與對(duì)照組相比，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、成管能力均下降（P均<0.01）；與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組細(xì)胞增殖、遷移、成管功能均上升（P均<0.01），見(jiàn)圖4A～C。

2.5 糖脂毒性條件下MALAT1 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞中MAPK1/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白的mRNA 及蛋白表達(dá)水平的影響（圖5）

圖5 糖脂毒性條件下MALAT1 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞中MAPK1/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白的mRNA 及蛋白表達(dá)水平的影響（x±s,n=3）

RT-qPCR 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖高脂組、高糖高脂對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞中MAPK1 mRNA 表達(dá)水平升高（P<0.001），見(jiàn)圖5A；蛋白免疫印跡法顯示，與高糖高脂對(duì)照組相比，高糖高脂+si-MALAT1 組p-MAPK1 表達(dá)水平降低（P<0.05），p-mTOR 表達(dá)水平上升（P<0.01），見(jiàn)圖5B；高糖高脂+si-MAPK1 組p-MAPK1 表達(dá)水平降低（P<0.01），p-mTOR 的表達(dá)水平升高（P<0.01），見(jiàn)圖5C。

3 討論

AS 是一種慢性炎癥疾病，其主要特征是斑塊的形成。斑塊表面由內(nèi)皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞等組成的“纖維帽”成分覆蓋，內(nèi)部含有脂質(zhì)和（或）壞死核心[13]。內(nèi)皮細(xì)胞的自噬、凋亡和損傷均會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮屏障減弱、脂質(zhì)積累和粘附蛋白積累，這些都是AS的早期事件。因此，內(nèi)皮細(xì)胞功能受損在AS 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用[14]。

自噬可利用溶酶體自我消化降解那些功能受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)[15]，為細(xì)胞生存提供能量代謝前體并維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，因此自噬的啟動(dòng)與溶酶體活性的變化密切相關(guān)[16]。細(xì)胞氧化應(yīng)激時(shí)會(huì)積累受損或有毒的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，從而激活自噬以維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)[17]。然而，細(xì)胞內(nèi)自噬的過(guò)度激活會(huì)導(dǎo)致自噬流受損，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[18]和功能受損。

線粒體自噬（mitophagy）是細(xì)胞內(nèi)一種重要的選擇性自噬，在細(xì)胞受到有害因子刺激后可維持細(xì)胞正常的功能狀態(tài)，減少內(nèi)皮細(xì)胞中ROS 的產(chǎn)生，從而緩解AS 的進(jìn)展[19]。據(jù)報(bào)道，線粒體自噬的活化是在ROS 生成增加的條件下被激活的[20]，這說(shuō)明ROS 的增加不僅能誘導(dǎo)線粒體自噬的活化，且線粒體自噬活性被上調(diào)的程度與ROS 含量呈正相關(guān)[21]。且有研究表明，線粒體動(dòng)力學(xué)可調(diào)節(jié)線粒體自噬[22]。本研究結(jié)果顯示，在高糖高脂環(huán)境下，內(nèi)皮細(xì)胞中ROS 含量增加，線粒體動(dòng)力學(xué)功能障礙，自噬相關(guān)蛋白Beclin1、p62、LC3 表達(dá)結(jié)果，免疫熒光線粒體自噬特異性蛋白LC3、LAMP2 共聚焦結(jié)果、透射電鏡采集內(nèi)皮細(xì)胞中溶酶體數(shù)目結(jié)果均顯示內(nèi)皮細(xì)胞自噬被激活。其中作為自噬的底物，p62 被運(yùn)送到溶酶體進(jìn)行降解，而暴露于糖脂毒性后p62 的表達(dá)增加可能與自噬體的不連續(xù)更新有關(guān)[23]。所有這些證據(jù)表明，干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞自噬是治療冠心病的一種有前途的新策略。

研究發(fā)現(xiàn)，MALAT1 在冠心病血液樣品中的表達(dá)顯著上調(diào)[24]。這表明，MALAT1 可能作為AS 的潛在生物標(biāo)志物，加速了冠心病進(jìn)展[25]。MAPK1也稱為ERK2、p42MAPK，在細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和發(fā)育中起著至關(guān)重要的作用[26]。據(jù)報(bào)道，MAPK1 與MALAT1 的表達(dá)正相關(guān)[27]，MALATI 可以激活MAPK1 信號(hào)通路[28]。本研究RT-qPCR 的結(jié)果顯示，MALAT1 和MAPK1 在高糖高脂環(huán)境下的內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào)，在給予si-MALAT1 后MAPK1 的表達(dá)下降，與上述研究結(jié)果相符。

mTOR 作為在自噬中發(fā)揮作用的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，被抑制后可激活自噬[29]。研究顯示，在冠心病中mTOR 信號(hào)通路被激活[24]，其調(diào)節(jié)自噬的過(guò)程中受MAPK 的調(diào)節(jié)[30]。因此，研究MAPK1/mTOR 信號(hào)通路調(diào)控自噬對(duì)AS 治療具有重要意義。本研究蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，內(nèi)皮細(xì)胞中MAPK1 表達(dá)顯著增高，mTOR 表達(dá)顯著下降，與上述研究結(jié)果相符。

為了確定MALAT1 是否可以激活mTOR 信號(hào)，首先通過(guò)RT-qPCR 在不同分組中檢測(cè)MALAT1 和MAPK1 的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)MALAT1 和MAPK1 的表達(dá)在高糖高脂環(huán)境下的內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)且呈正相關(guān)，再通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡在不同條件下檢測(cè)上游調(diào)節(jié)劑MAPK1（ERK1/2），發(fā)現(xiàn)MALAT1/MAPK1影響mTOR 信號(hào)傳導(dǎo)以介導(dǎo)細(xì)胞自噬，并進(jìn)一步影響冠心病進(jìn)展。結(jié)果表明，MALAT1 通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK1 觸發(fā)mTOR 信號(hào)通路。

本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)高糖高脂刺激HUVEC 時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞中MALAT1表達(dá)升高激活內(nèi)皮細(xì)胞線粒體自噬，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與細(xì)胞功能障礙，加速AS 進(jìn)程。在給予si-MALAT1 干擾后，MAPK1 表達(dá)下降及mTOR 表達(dá)上升，內(nèi)皮細(xì)胞功能得到改善。

綜上所述，本研究認(rèn)為糖脂毒性環(huán)境下lncRNA MALAT1 誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞線粒體自噬，內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與功能障礙，可能與調(diào)節(jié)MAPK1/mTOR 信號(hào)通路有關(guān)。抑制MALAT1 表達(dá)后，可改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，為臨床上進(jìn)一步治療AS 提供了新思路。然而，本研究有局限性，未設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突