高峰 李軍 張翔 楊雨

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院普通外科,安徽 宿州 234000)

胃癌約占所有新發(fā)惡性腫瘤的9%,僅低于肺癌、乳腺癌、腸癌〔1〕。手術(shù)是胃癌治療的主要手段,能夠有效延長(zhǎng)患者生存時(shí)間,但術(shù)后并發(fā)癥、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高,特別是身體功能下降的老年患者〔2〕。相關(guān)研究顯示,TNM分期是評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要因素,但敏感度和特異度不夠理想〔3〕。探索評(píng)估胃癌患者手術(shù)預(yù)后的分子標(biāo)志物對(duì)合理制定治療方案十分重要。乳酸脫氫酶(LDH)參與糖酵解的發(fā)展過(guò)程,催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸〔4〕。胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)-1能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化,與胰島素結(jié)構(gòu)很相近,參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)過(guò)程〔5〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)C在血管生成和淋巴管生成過(guò)程中起重要調(diào)節(jié)作用,主要通過(guò)與其受體VEGFR-3結(jié)合,激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成。其在胚胎期起到建立和塑造血管系統(tǒng)的作用,隨后在成人組織中也參與調(diào)節(jié)血管再生和淋巴管再生、惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程〔6〕。血清應(yīng)答因子(SRF)是人體重要核轉(zhuǎn)錄因子,在結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、肝癌等組織中高表達(dá)〔7〕。本研究旨在探討老年胃癌患者LDH、IGF-1、VEGFC、SRF水平變化及意義。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取2020年3月至2021年5月在安徽醫(yī)科大學(xué)附屬宿州醫(yī)院收治的老年胃癌患者75例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為胃癌;②年齡≥60歲,有手術(shù)適應(yīng)證并行手術(shù)治療;③配合完成隨訪研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①接受新輔助化療的胃癌患者;②有胃切除手術(shù)史者。患者平均年齡(68.91±4.53)歲;另收集健康志愿者50例為健康對(duì)照組,男30例,女20例;年齡60～76歲,平均(68.15±4.70)歲。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò),受試者均自愿參與本研究。

1.2血清LDH濃度檢測(cè) 手術(shù)前48 h采集老年胃癌患者空腹外周靜脈血3 ml,老年健康志愿者體檢時(shí)采集空腹外周靜脈血3 ml,2 h內(nèi)離心收集血清,4 ℃ 3 000 r/min離心10 min,全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清LDH濃度,參考范圍100～245 IU/ml。

1.3胃癌組織和癌旁正常組織中IGF-1、VEGFC、SRF表達(dá)水平檢測(cè) 首先從患者手術(shù)切除標(biāo)本中獲取胃癌組織和癌旁正常組織,放入緩沖甲醛中進(jìn)行固定,石蠟包埋后通過(guò)切片機(jī)切成5 μm切片,放在玻璃貼片上。熱處理進(jìn)行抗原修復(fù),在切片中加入牛血清蛋白、阻斷非特異結(jié)合。根據(jù)本研究目的加入一抗：鼠抗人IGF-1、VEGFC、SRF單克隆抗體,稀釋倍數(shù)分別為1∶700、1∶500、1∶500,4 ℃過(guò)夜,次日將切片在洗滌緩沖液中洗滌,以去除未結(jié)合的抗體,根據(jù)一抗體的動(dòng)物來(lái)源選擇并加入二抗,再次進(jìn)行洗滌,以去除未結(jié)合的二抗體。加入染色劑對(duì)組織中的抗原-抗體結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行可視化,脫水、封片。通過(guò)顯微鏡觀察和分析切片中的染色結(jié)果,棕褐色、棕色為陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性細(xì)胞比例<10%為陰性,≥10%為陽(yáng)性。

1.4資料收集與隨訪 收集患者人口學(xué)特征,腫瘤直徑、腫瘤部位、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、侵襲情況。以老年胃癌患者出院時(shí)日期為隨訪起點(diǎn),進(jìn)行1年隨訪,術(shù)后3個(gè)月每周門診隨訪1次,術(shù)后4～6個(gè)月每2 w門診隨訪1次,術(shù)后7個(gè)月至1年每月門診隨訪1次。當(dāng)高度懷疑腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)則通過(guò)病理檢查確診,將復(fù)發(fā)的患者納入預(yù)后不良組。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)及受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清LDH濃度比較 胃癌組血清LDH濃度〔(352.00±31.22)IU/ml〕明顯高于健康對(duì)照組〔(184.61±25.95)IU/ml;t=35.825,P=0.000〕。

2.2不同臨床病理特征老年胃癌患者血清LDH濃度比較 TNM分期Ⅲ～Ⅳ、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化程度、侵及漿膜者血清LDH濃度明顯高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化程度、未侵及漿膜者(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 不同臨床病理特征的老年胃癌患者血清LDH濃度及手術(shù)切除組織中IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性表達(dá)比較〔n(%)〕

2.3不同臨床病理特征老年胃癌患者手術(shù)切除組織中IGF-1、VEGFC、SRF表達(dá)情況比較 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、侵及漿膜者手術(shù)切除組織中IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化、未侵及漿膜者(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.4老年胃癌患者手術(shù)切除組織中IGF-1、VEGFC、SRF表達(dá)情況比較 老年胃癌患者胃癌組織中IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 老年胃癌患者手術(shù)切除組織中IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性表達(dá)比較〔n(%),n=75〕

2.5不同預(yù)后水平患者LDH、IGF-1、VEGFC、SRF水平比較 預(yù)后不良組血清LDH濃度明顯高于預(yù)后良好組(P<0.01);IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性率明顯高于預(yù)后良好組(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 不同預(yù)后水平的老年胃癌患者LDH水平及IGF-1、VEGFC、SRF陽(yáng)性表達(dá)比較〔n(%)〕

2.6LDH、IGF-1、VEGFC、SRF對(duì)老年胃癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 LDH、IGF-1、VEGFC、SRF對(duì)老年胃癌患者預(yù)后均具有較高的評(píng)估價(jià)值(P<0.01);其中各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值最高〔曲線下面積(AUC)=0.950〕。見(jiàn)圖1、表4。

圖1 LDH、IGF-1、VEGFC、SRF對(duì)老年胃癌患者預(yù)后評(píng)估價(jià)值的ROC曲線

表4 LDH、IGF-1、VEGFC、SRF對(duì)老年胃癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

3 討 論

隨著年齡增長(zhǎng)胃癌患者術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率、病情復(fù)發(fā)率均明顯提升〔8〕。相關(guān)研究顯示,老年胃癌患者與中青年胃癌患者相比存在較多特殊的臨床病理特征,共患病數(shù)量也明顯增加,對(duì)手術(shù)治療預(yù)后的評(píng)估可為治療方案的制定提供重要參考依據(jù)〔9〕。LDH是一種廣泛存在于人體組織中的糖酵解、糖異生酶,在腎臟中含量最高,其次為心肌、骨骼肌等組織,當(dāng)細(xì)胞受損或破壞時(shí),LDH會(huì)釋放到細(xì)胞外液中,導(dǎo)致血液中LDH水平升高。由于LDH的釋放與細(xì)胞損傷密切相關(guān),血液中LDH水平可用作一種指標(biāo)來(lái)評(píng)估細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)程度。特別是在某些疾病中,如心肌梗死、淋巴瘤等,血液中LDH水平常常升高。因此,測(cè)量血清LDH水平常被用作臨床診斷和疾病監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)之一〔10〕。LDH還可以作為一種標(biāo)記酶,用于檢測(cè)和研究細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖、細(xì)胞死亡等生物過(guò)程。IGF-1是IGF信號(hào)通路的關(guān)鍵傳導(dǎo)因子,在細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用,參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展〔11〕。IGF-1是一個(gè)源于肝臟的重要細(xì)胞因子,具有高度保守性,能夠進(jìn)入其他組織臟器中發(fā)揮生物學(xué)作用,幾乎參與介導(dǎo)人體各器官的生長(zhǎng)發(fā)育,能夠促進(jìn)有絲分裂,進(jìn)而加速細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡〔12〕。非小細(xì)胞肺癌患者IGF-1高表達(dá),且與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部浸潤(rùn)、臨床分期密切相關(guān)〔13〕。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要途徑,同時(shí)也是判斷胃癌分期和選擇治療方案的重要依據(jù)之一,與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和治療預(yù)后明顯相關(guān)〔14〕。早期發(fā)現(xiàn)和干預(yù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的存在對(duì)于改善患者預(yù)后至關(guān)重要。VEGFC是具有促淋巴血管系統(tǒng)生成活性的生長(zhǎng)因子,主要通過(guò)與其受體VEGFR-3結(jié)合,激活相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成;其在胚胎期起到建立和塑造血管系統(tǒng)的作用,隨后在成人組織中也參與調(diào)節(jié)血管再生和淋巴管再生〔15〕。目前關(guān)于VEGFC的研究多為體外實(shí)驗(yàn),VEGFC能夠促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂〔16〕;VEGFC可誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)淋巴管增生和淋巴血管生成〔17〕。SRF是MADS盒基因家族成員,含有一個(gè)血清應(yīng)答原件,在300個(gè)人類基因中表達(dá),約占全部基因組的1%〔18〕,能夠調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、血管生成、凋亡等相關(guān)基因表達(dá)〔19〕。研究顯示,肝轉(zhuǎn)移癌患者SRF高表達(dá),可通過(guò)下調(diào)鈣黏附蛋白E表達(dá),上調(diào)β-catenin表達(dá),提高細(xì)胞侵襲力〔20〕。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)在肝癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)SRF能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移、侵襲能力〔21〕;通過(guò)RNAi實(shí)驗(yàn)基因沉默肝癌細(xì)胞中SRF表達(dá)后能夠下調(diào)處于S期的細(xì)胞比例和活力〔22〕。

相關(guān)研究顯示,LDH濃度變化能夠反映惡性腫瘤的進(jìn)展情況,提示缺氧、無(wú)氧酵解與惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)系〔23〕。結(jié)合本研究結(jié)果可知,老年胃癌患者血清LDH濃度明顯升高,且與病理特征密切相關(guān),能夠反映患者病情嚴(yán)重程度。本研究結(jié)果提示老年胃癌患者腫瘤組織中IGF-1、VEGFC、SRF表達(dá)上調(diào),且與病理特征密切相關(guān)。進(jìn)一步分析顯示,LDH、IGF-1、VEGFC、SRF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)老年胃癌患者預(yù)后具有較高的評(píng)估價(jià)值,可用于手術(shù)預(yù)后評(píng)估,為術(shù)后綜合治療方案的制定提供參考依據(jù)。