樊媛芳，熊開(kāi)鵬，務(wù)勇圣，顏冬蘭

（1.九芝堂股份有限公司，長(zhǎng)沙 410221；2.成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司，成都 610101）

牙周病特指只出現(xiàn)于牙周支持組織的各種病變，是造成牙齒松動(dòng)的重要原因，在老年人群中的發(fā)生率超過(guò)80%～90%，是口腔衛(wèi)生的頭號(hào)“殺手”[1]。牙周支持組織的損傷可致炎性浸潤(rùn)及炎癥因子的增多，而病菌及其產(chǎn)物、細(xì)胞內(nèi)毒素、肽基精氨酸脫亞胺酶等毒力因子可侵入體循環(huán)，誘發(fā)全身性疾病[2]。目前臨床上通常采用一般治療及抗生素等藥物輔助治療，雖具有消炎殺菌、使用方便、起效快的作用特點(diǎn)，但是長(zhǎng)時(shí)間、大劑量反復(fù)用藥易引起耐藥性，胃腸道及肝腎毒性等不良反應(yīng)大且病情反復(fù)，達(dá)不到提高宿主免疫防御功能的效果[3]。中醫(yī)更加注重整體的辨證論治，認(rèn)為腎臟為精氣之根本，腎主骨，齒為骨之余，精固則齒堅(jiān)，齒病則因在于腎[4]。因此中醫(yī)在治療牙周病時(shí)，多秉持著外散風(fēng)火、內(nèi)清積熱、滋陰補(bǔ)腎、清熱解毒、涼血活血和祛瘀止痛的原則。對(duì)腎虛血熱型牙周病的治療旨在助陽(yáng)補(bǔ)腎、滋陰清火，達(dá)到扶正祛邪、標(biāo)本兼治的目的[5]。

補(bǔ)腎固齒丸能顯著提高牙周炎患者的臨床有效率，炎癥反應(yīng)及牙周狀態(tài)均有明顯改善，體現(xiàn)為血清炎性因子超敏C 反應(yīng)蛋白（hsCRP）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平得到顯著抑制；菌斑指數(shù)評(píng)分（PLI）、探診出血（BOP）、探診深度（PD）、臨床附著喪失（CAL）等均有明顯降低，患者口腔功能恢復(fù)[6-8]。并通過(guò)調(diào)節(jié)血清骨鈣素（OCN）的表達(dá)水平改善慢性牙周炎模型大鼠牙槽骨吸收、促進(jìn)牙槽骨修復(fù)重建過(guò)程[9]。方中各藥配伍，共奏滋陰補(bǔ)腎、強(qiáng)筋健齒、活血消瘀、涼血解毒之功。因此該研究旨在通過(guò)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接的方法對(duì)補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方治療腎虛血熱型牙周病有效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制進(jìn)行探討，以期為該方在后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料 中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/index.php），本草組鑒（HERB，http：//drug.ac.cn/），中醫(yī)藥百科全書（ETCM，http：//www.tcmip.cn），中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)（TCMIP）v2.0（http：//www.tcmip.cn），有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)（PubChem，http：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/），蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（UniProt，http：//www.uniprot.org/），Swiss Target Prediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/，http：//www.swisstargetprediction.ch/），在線《人類孟德?tīng)栠z傳》（OMIM，https：//omim.org/），人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards）（https：//www.genecards.org/），蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)（STRING，http：//string-db.org/），富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）（http：//www.genome.jp/kegg/），Cytoscape 3.8.2 軟件，Metascape 基因富集分析平臺(tái)（https：//metascape.org/），世界蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（RCSB PDB，https：//www.pdbus.org/），分子操作環(huán)境（MOE）2019 軟件，補(bǔ)腎固齒丸（成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 補(bǔ)腎固齒丸化學(xué)成分靶標(biāo) 在TCMSP/HERB 等數(shù)據(jù)庫(kù)和平臺(tái)中檢索補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方中“熟地黃”“地黃”“雞血藤”“紫河車”“鹽骨碎補(bǔ)”“漏蘆”“酒丹參”“酒五味子”“山藥”“醋郁金”“炙黃芪”“牛膝”“野菊花”“茯苓”“枸杞子”“牡丹皮”“鹽澤瀉”“肉桂”共18 味藥材對(duì)應(yīng)的活性成分，按照相應(yīng)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)（ADME）參數(shù)，根據(jù)口服生物利用度（OB）和類藥性（DL），設(shè)定0B≥20%且DL≥0.1，及Lipinsk 五原則（Mw ≤500，miLogP ≤5，nOHNH≤5，nOH≤10）的條件進(jìn)行篩選。并在蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)查詢靶標(biāo)的基因名和Uniprot ID。

1.2.2 牙周病相關(guān)基因 在Genecards 及OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)查詢 “Kidney deficiency and blood heat periodontal disease”“Kidney blood heat type periodontal disease”所對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)作為疾病靶標(biāo)信息。

1.2.3 補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方治療牙周病相關(guān)靶標(biāo)預(yù)測(cè) 采用R 語(yǔ)言代碼對(duì)補(bǔ)腎固齒丸治療牙周病的共同靶標(biāo)統(tǒng)計(jì)，并對(duì)此進(jìn)行蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)分析，通過(guò)Cytoscape 3.8.2 軟件進(jìn)行可視化及模塊分析，篩選均大于介數(shù)中心性及度中心性平均值的成分，留作后續(xù)分析。在該軟件中篩選這些成分大于度中心性平均值的靶標(biāo)，作為后續(xù)分析的靶標(biāo)。

1.2.4 基因功能估計(jì)分析 將篩選的靶基因通過(guò)Metascape 平臺(tái)進(jìn)行GO 功能富集分析，P 值＜0.01，并以條形圖展示。

1.2.5 KEGG 富集分析 采用Metascape 平臺(tái)對(duì)篩選的靶基因進(jìn)行KEGG 通路富集，挑選與腎虛血熱型牙周病相關(guān)的信號(hào)通路，設(shè)定P 值＜0.01。

1.2.6 補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方核心成分與關(guān)鍵蛋白分子對(duì)接 下載核心成分2D 結(jié)構(gòu)的sdf 文件及PDB 格式的蛋白結(jié)構(gòu)。按照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行蛋白篩選，具體原則如下：來(lái)源于HUMAN，分辨率≤2.5 ?、并盡可能低，結(jié)構(gòu)中有共晶小分子配體且配體與待對(duì)接小分子相似度高（RMSD≤2 ?），蛋白結(jié)構(gòu)氨基酸序列較完整。利用MOE 2019 軟件對(duì)蛋白進(jìn)行準(zhǔn)備（去水、去小分子、能量最小化等），并利用分子空洞技術(shù)判斷活性位點(diǎn)（例如軟件中site Finder 模塊，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)規(guī)律，疏水殘基最多的空洞為活性位點(diǎn)）后進(jìn)行誘導(dǎo)性對(duì)接；通過(guò)結(jié)合能Score 值來(lái)判斷兩者結(jié)合能力的大小，Score 值越小，結(jié)合能力越強(qiáng)，表示小分子越容易與受體蛋白結(jié)合。

2 結(jié)果

2.1 固齒丸復(fù)方中活性成分及疾病及成分對(duì)應(yīng)靶標(biāo)預(yù)測(cè) 在TCMSP 及HERB、ETCM、TCMIP 數(shù)據(jù)庫(kù)及平臺(tái)中查詢到符合篩選條件的“補(bǔ)腎固齒丸”復(fù)方中活性成分共1 081 個(gè)。在Genecards 及OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)共收集到腎虛血熱型牙周病相關(guān)靶標(biāo)5 310 個(gè)，合并后去除重復(fù)數(shù)據(jù)，得到3 193 個(gè)疾病靶基因。將各個(gè)平臺(tái)及數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢篩選出的1 081 個(gè)化學(xué)成分對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)，通過(guò)Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)查詢蛋白的基因名，去除重復(fù)數(shù)據(jù)后共得到2 060 條靶基因。

2.2 補(bǔ)腎固齒丸有效活性成分治療牙周病相關(guān)靶標(biāo)的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 將補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方中篩選得到的藥物靶標(biāo)與得到的疾病靶標(biāo)利用R 語(yǔ)言代碼進(jìn)行韋恩圖及交集靶標(biāo)的分析，并按照≥介數(shù)中心性及度中心性均值的條件篩選得到12 個(gè)核心成分，見(jiàn)表1。其共同靶標(biāo)有296 個(gè)，大于度中心性均值的前25 位的靶標(biāo)分別為核受體輔激活因子2（NCOA2）、環(huán)加氧酶1 （PTGS1）、雌激素受體1（ESR1）、雄激素受體（AR）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPARG）、醛糖還原酶抗體（AKR1B1）、尿激酶（PLAU）、雌激素受體2（ESR2）、雌激素合成酶（CYP19A1），作為后續(xù)分析的靶標(biāo)。

表1 補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方12 位核心成分Tab.1 Twelve core components of Bushen Guchi Pill compound

運(yùn)用R 語(yǔ)言對(duì)296 個(gè)關(guān)鍵靶標(biāo)進(jìn)行可視化，并形成條形圖，見(jiàn)圖1。同時(shí)在String 平臺(tái)將上步中得到的25 個(gè)藥物靶基因進(jìn)行分析，結(jié)果顯示該網(wǎng)絡(luò)中共有節(jié)點(diǎn)25 個(gè)，邊96 條，見(jiàn)圖2。兩者交集的靶基因有3 個(gè)，分別為ESR1、EGFR、PIK3CA，說(shuō)明這3 個(gè)靶基因在疾病治療過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

圖1 296 個(gè)交集靶標(biāo)PPI 網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵蛋白樹形圖Fig.1 Bar graph of key proteins in the PPI network of 296 intersection targets

圖2 25 個(gè)關(guān)鍵靶標(biāo)PPI 網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖[中等置信度（0.400）]Fig.2 Bar graph of key proteins in the PPI network of 25 intersection targets[medium confidence(0.400)]

2.3 補(bǔ)腎固齒丸“活性成分-成分對(duì)應(yīng)靶標(biāo)-牙周病相關(guān)靶標(biāo)” 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 利用Cytoscape 3.8.2 軟件構(gòu)建補(bǔ)腎固齒丸“活性成分-成分對(duì)應(yīng)靶標(biāo)-牙周病相關(guān)靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò)。并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)分析，按照文獻(xiàn)[11]（以均≥介數(shù)中心性及度值均值）篩選條件篩選出關(guān)鍵靶標(biāo)126 個(gè)，含有PTGS1、AR、CYP19A1、ESR2、ESR1、11-β-羥基類固醇脫氫酶1（HSD11B1）、孕激素受體（PGR）、聚[ADP-核糖]聚合酶1（PARP1）、環(huán)加氧酶2（PTGS2）、人腺苷A2A 受體（ADORA2A）等關(guān)鍵靶標(biāo)。見(jiàn)圖3。

圖3 補(bǔ)腎固齒丸“活性成分-成分對(duì)應(yīng)靶標(biāo)-牙周病相關(guān)靶標(biāo)”相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.3 Interaction network of “active ingredient-component corresponding target-periodontitis related targets” in Bushen Guchi Pill

2.4 GO 功能分析結(jié)果 在Metascape 平臺(tái)對(duì)2.3步中篩選出來(lái)的25 個(gè)關(guān)鍵靶基因進(jìn)行GO 生物學(xué)功能富集分析，設(shè)定P＜0.01。發(fā)現(xiàn)這25 種關(guān)鍵蛋白主要參與的生物過(guò)程有程序性細(xì)胞死亡的正向調(diào)節(jié)、細(xì)胞對(duì)有機(jī)氮化合物的反應(yīng)、酶聯(lián)受體蛋白信號(hào)通路、miRNA 轉(zhuǎn)錄的調(diào)控、神經(jīng)元凋亡過(guò)程的調(diào)節(jié)、凋亡信號(hào)通路、平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)等。主要參與的分子功能為核受體活性、蛋白激酶活性、酶激活劑活性、生長(zhǎng)因子結(jié)合、血紅素結(jié)合、內(nèi)肽酶活性、蛋白質(zhì)同二聚活性。細(xì)胞組分主要富集在核膜、轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合體、染色體/端粒區(qū)及細(xì)胞前緣位置。詳見(jiàn)圖4、5、6。

圖4 補(bǔ)腎固齒丸治療腎虛血熱型牙周病相關(guān)潛在靶標(biāo)生物過(guò)程的GO 分析Fig.4 GO analysis of biological processes of potential targets related to kidney deficiency blood heat periodontal disease treated with Bushen Guchi Pill

圖5 補(bǔ)腎固齒丸治療腎虛血熱型牙周病相關(guān)潛在靶標(biāo)分子功能的GO 分析Fig.5 GO analysis of molecular functions of potential targets related to kidney deficiency blood heat periodontal disease treated with Bushen Guchi Pill

圖6 補(bǔ)腎固齒丸治療腎虛血熱型牙周病相關(guān)潛在靶標(biāo)細(xì)胞組分的GO 分析Fig.6 GO analysis of the cellular components of potential targets related to kidney deficiency blood heat periodontal disease treated with Bushen Guchi Pill

2.5 KEGG 通路富集分析 將25 個(gè)關(guān)鍵靶基因通過(guò)Metascape 平臺(tái)進(jìn)行通路富集。共得到10 條KEGG 通路，其中與牙周病相關(guān)的有2 條，分別為細(xì)胞腫瘤抗源（P53）信號(hào)通路及核因子-κB（NF-κB）通路。說(shuō)明這2 條信號(hào)通路在補(bǔ)腎固齒丸治療腎虛血熱型牙周病過(guò)程中起到重要作用。見(jiàn)圖7。

圖7 補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方治療腎虛血熱型牙周病的KEGG 信號(hào)通路分析Fig.7 KEGG signaling pathway analysis in kidney deficiency blood heat periodontal disease of treated with Bushen Guchi Pill

將2.3 中篩選出的19 個(gè)關(guān)鍵靶基因和2 條牙周病相關(guān)的信號(hào)通路導(dǎo)入Cytoseape 3.8.2 軟件構(gòu)建“化學(xué)成分-靶基因-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)。見(jiàn)圖8。

圖8 補(bǔ)腎固齒丸復(fù)方中化學(xué)成分所對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)與通路Fig.8 Targets and pathways corresponding to the chemical components in the Bushen Guchi Pill compound

2.6 核心成分與核心蛋白分子對(duì)接分析 將2.2結(jié)果中得到的12 種核心成分與3 種網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)（ESR1、EGFR、PIK3CA） 所對(duì)應(yīng)的蛋白復(fù)合晶體進(jìn)行對(duì)接。以結(jié)合能Score 得分及相互作用對(duì)的數(shù)目判斷其親和力的大小，S＜0（小分子配體與蛋白受體能自發(fā)結(jié)合），S≤-4.25 kcal/mol（配體與受體有一定的結(jié)合能），S≤-5 kcal/mol（配體與受體結(jié)合能力較高，形成的構(gòu)象能量低，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定），S≤-7 kcal/mol（配體與受體結(jié)合能力較強(qiáng)）。發(fā)現(xiàn)各小分子配體與受體蛋白均有一定的相互作用；其中Garcinone D、Calycosin、Crotepoxide、Cnidiadin 及L -Octanoylcarnitine 分子與ESR1，137704501、Garcinone D 分子與EGFR，137704501、Garcinone D 及Crotepoxide 分子PIK3CA 結(jié)合能力較強(qiáng)。見(jiàn)表2、圖9。

圖9 配體結(jié)合靶標(biāo)蛋白相互作用氨基酸位點(diǎn)示意圖（S≤-7.0 kcal/mol）Fig.9 Schematic diagram of amino acid sites of ligand-binding target protein interactions（S≤-7.0 kcal/mol）

3 總結(jié)

牙周病即為通常所說(shuō)的牙齦發(fā)炎、出血和牙齒松動(dòng)，是口腔最常見(jiàn)的疾病之一，也是成年人牙齒丟失的首位因素；具有病發(fā)率高、發(fā)病隱蔽、病程較長(zhǎng)、危害性高的特點(diǎn)。按照病程及危及組織的不同，牙周病可分為2 種類型，一種是牙齦?。╣ingival disease），另一種為牙周炎（periodontitis）；其中牙齦病僅累及牙齦組織，而牙周炎則損害牙周深層組織（牙周膜、牙槽骨、牙骨質(zhì)）。牙周病所致的炎癥反應(yīng)可隨著體循環(huán)，引起全身性疾?。ɡ珀P(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、心臟內(nèi)膜炎癥等），同時(shí)也是造成神經(jīng)系統(tǒng)疾病[12]、心腦血管/糖尿病[13]、呼吸系統(tǒng)/骨質(zhì)疏松癥、早產(chǎn)等疾病的發(fā)病因素[5，14]。西醫(yī)表明牙周病的病因主要在于牙菌斑（dental plaque）細(xì)菌及其產(chǎn)物在牙齒表面的黏附以及因營(yíng)養(yǎng)代謝障礙、內(nèi)分泌紊亂、自主神經(jīng)功能紊亂等導(dǎo)致細(xì)菌侵襲與宿主防御間動(dòng)態(tài)平衡的破壞有關(guān)。根據(jù)中醫(yī)理論，腎藏精，主骨，是人體生長(zhǎng)發(fā)育的主要器官，腎精具有促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)發(fā)育和修復(fù)的作用；齒為骨之余，與骨同源，賴于腎精充養(yǎng)而生長(zhǎng)發(fā)育，腎虛精虧血少，齒失濡養(yǎng)，引起骨質(zhì)瘺軟，兼以陰虛火旺，虛火上炎于齦肉，久則牙齒動(dòng)搖、根露；或因宿體虛弱，或因久病耗傷正氣，氣血不足，牙齦失于滋養(yǎng)而病邪乘虛而入，以致齦肉菱縮，血不循經(jīng)，齒齦出血，故成此病。因此，牙齒的生長(zhǎng)和脫落與腎氣的盛衰密切相關(guān)，有“腎虛齒豁”的觀點(diǎn)，所以在治療腎虛血熱型牙周病時(shí)，要注意補(bǔ)腎涼血，從而強(qiáng)固牙齒[15]。

補(bǔ)腎固齒丸由熟地黃、生地黃、紫河車等18 味藥材組成，其中，熟地黃填精益髓、補(bǔ)益肝腎，為君藥；紫河車、鹽骨碎補(bǔ)、生地黃、雞血藤、山藥、枸杞子、炙黃芪補(bǔ)肝腎、益精血，又能活血涼血、通經(jīng)活絡(luò)，共為臣藥；丹參、五味子、鹽澤瀉、牛膝、漏蘆、牡丹皮、野菊花能生津潤(rùn)肺、健脾利濕，又能祛瘀排膿、消腫止痛，共為佐藥；肉桂引火歸原，為使藥。本著“腎生骨生髓”“齒為骨之余”的中醫(yī)理論，既補(bǔ)腎益精、治其本，又能清熱解毒治其標(biāo)，具有補(bǔ)腎固齒，活血解毒的功效，故適用于治療腎虛火旺所致的牙齒酸軟、咀嚼無(wú)力、松動(dòng)移位、齦腫齒衄，而慢性牙周炎體現(xiàn)為上述癥狀。

研究證實(shí)，補(bǔ)腎固齒丸0.8 g/（kg·d） 給藥30 d即可顯著改善SD 大鼠牙周組織炎癥反應(yīng)、降低骨膠原酶13（MMP-13）的表達(dá)，延緩牙周組織破壞[16]。聯(lián)合消炎湯治療腎虛火旺型牙周炎的應(yīng)用中，患者總有效率為82.98%，可有效改善牙齦出血、牙齒松動(dòng)等癥狀，臨床療效顯著[17]，且牙槽骨密度增高、腎虛火旺主癥（牙齒酸軟、咀嚼無(wú)力、齦腫、齒衄及松動(dòng)移位）及次癥（耳鳴、腰膝酸軟、五心煩熱、潮熱盜汗、口咽干燥、發(fā)脫、神疲乏力及舌象）評(píng)分等級(jí)降低、安全性良好[18]。

這與現(xiàn)代藥理學(xué)研究的發(fā)現(xiàn)不謀而合[19]。牙齦卟啉單胞菌（P.g）是導(dǎo)致牙周病的最大因素之一，它是一種非酵解糖的革蘭氏陰性厭氧球桿菌，形成的牙菌斑生物膜積聚在牙齒和牙根表面，導(dǎo)致牙周結(jié)締組織和牙槽骨的破壞，是牙齒丟失最常見(jiàn)的原因之一[20]。中藥及其提取物對(duì)炎癥反應(yīng)、細(xì)胞生長(zhǎng)及組織修復(fù)等具有顯著效應(yīng)。

槲皮素作為廣譜抗菌活性的黃酮類物質(zhì)，具有較強(qiáng)的抑菌活性，尤其是革蘭陰性菌；通過(guò)抑制NF-κB/血管緊張素（NLRP3）炎癥通路，降低炎癥因子TNF-α 誘導(dǎo)下人牙周韌帶干細(xì)胞受損[21-22]，提高其抗氧化能力，增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化能力，逆轉(zhuǎn)脂多糖誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡，同時(shí)激活核因子NF-E2 相關(guān)因子（Nrf2）信號(hào)通路，降低牙周炎組織中活性氧（ROS）水平，緩解牙槽骨丟失，保護(hù)其成骨能力[23-25]。

大黃素可顯著抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞的增殖活性[26]，在抑制NF-κB 信號(hào)通路表達(dá)，降低炎性因子IL-1β、白細(xì)胞介素-4（IL-4）和IL-6 合成及分泌的同時(shí)，提高牙周組織過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PPAR）-γ 表達(dá)，從而減輕炎性因子對(duì)牙周組織的破壞、降低機(jī)體的炎癥反應(yīng)[27]；并通過(guò)調(diào)節(jié)酸性哺乳動(dòng)物幾丁質(zhì)酶（AMCase），一種參與骨重建的生物標(biāo)志物的表達(dá)，顯著降低破骨細(xì)胞分化因子（RANKL）誘導(dǎo)下破骨細(xì)胞生成，提高牙周組織中骨鈣素（BGP）水平，促進(jìn)牙周組織恢復(fù)、降低炎癥反應(yīng)及牙槽骨的丟失[28-29]；蛇床子素（Cnidiadin）亦然[30-31]。

異甘草素（Isoliquiritigenin）源于甘草，具有廣泛的生物和藥理活性，例如抗氧化、抗血小板聚集、抗腫瘤及雌激素活性等；已有研究證實(shí)其可通過(guò)下調(diào)自噬和NF-κB 信號(hào)通路的表達(dá)抑制體內(nèi)破骨細(xì)胞形成和炎性骨吸收來(lái)防治骨破壞、促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及分化；P53 是成骨/破骨細(xì)胞增殖分化中重要的調(diào)節(jié)因子，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和/或凋亡來(lái)保護(hù)細(xì)胞免于轉(zhuǎn)化，當(dāng)其表達(dá)被抑制后，其下游信號(hào)分子抑癌基因（P21）表達(dá)也相對(duì)減少，成骨細(xì)胞分化增加，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）誘導(dǎo)的血管生成分化增加；由此可見(jiàn)，P53 信號(hào)通路可能為異甘草素抑制發(fā)揮抗炎、促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化的新途徑[32-33]。

辛酸（Octanoic acid）為茯苓、牛膝及肉桂中的成分，有研究報(bào)道：作為食品添加劑，辛酸具有對(duì)P.g殺菌活性，抑制菌斑生物膜的形成[34]；雖然目前暫未有其他小分子及辛酸對(duì)牙周重建等的相關(guān)研究，但對(duì)疾病關(guān)鍵靶標(biāo)ESR1、EGFR、PIK3CA 均具有較好的結(jié)合能力，表明這些小分子將有可能是防治牙周病的新型治療物質(zhì)，具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，文章通過(guò)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對(duì)補(bǔ)腎固齒丸治療腎虛血熱型牙周病的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用靶標(biāo)及通路進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，建立了復(fù)方活性成分-疾病靶標(biāo)-作用通路相互作用網(wǎng)絡(luò)圖；并進(jìn)一步通過(guò)分子對(duì)接手段對(duì)起主要作用的12 個(gè)關(guān)鍵成分為槲皮素（Quercetin）、辛酸（Octanoic acid）及大黃素（Emodin） 等與3 種核心靶標(biāo)蛋白（ESR1、EGFR、PIK3CA）所對(duì)應(yīng)的蛋白復(fù)合晶體進(jìn)行對(duì)接，均具有較好的結(jié)合能力。說(shuō)明補(bǔ)腎固齒丸可通過(guò)多靶標(biāo)、多通路的干預(yù)，對(duì)牙周病相關(guān)牙菌斑生成、免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、減輕牙槽骨丟失等方面起到調(diào)節(jié)作用，以達(dá)到治療腎虛血熱型牙周病的作用。