洪海龍 占啟川

自身免疫性肝?。╝utoimmune liver disease，AILD）是免疫性疾病，具有復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，具體機(jī)制尚不明確[1-3]。通常認(rèn)為，抗原激活是AILD 發(fā)病的主要影響因素，病毒感染等因素是AILD 的常見誘因[4-6]。麻疹、乙肝病毒等感染肝組織，激活肝細(xì)胞膜表層人白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），進(jìn)而加速自身B 細(xì)胞抗體釋放，導(dǎo)致肝臟組織受損和肝功能損傷，嚴(yán)重時誘發(fā)肝硬化甚至肝功能衰竭，對患者生命健康造成嚴(yán)重威脅。上述病原體均具有特異性自身抗體，滴度較高，基于此原理對AILD 患者進(jìn)行自身抗體譜檢測，以期準(zhǔn)確診斷、鑒別疾病[7]。本文選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泉港總醫(yī)院2020 年7 月—2023 年6 月接診的AILD 老年患者90 例，說明自身抗體譜檢測方法，分析檢測結(jié)果，總結(jié)AILD 臨床特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泉港總醫(yī)院2020 年7 月—2023 年6 月90 例老年AILD 患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《自身免疫性肝病基礎(chǔ)與臨床》[8]中AILD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）資料完整；（3）年齡≥60 歲；（4）溝通能力良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并酒精性肝硬化；（2）合并肝部腫瘤；（3）合并血液系統(tǒng)疾?。唬?）合并傳染病。根據(jù)病情分為A 組、B 組、C 組，各30 例。A 組為自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH），男15 例，女15 例；年齡65～83 歲，平均（76.23±5.29）歲。B 組為原發(fā)性膽汁性肝?。╬rimary biliary liver disease，PBC），男16 例，女14 例；年 齡65～82 歲，平均（76.21±5.32）歲。C 組為原發(fā)性硬化膽管病（primary sclerosing cholangitis，PSC），男14 例，女16 例；年齡66～84 歲，平均（76.19±5.30）歲。3組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究取得患者家屬同意，獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

（1）采集3 mL 晨間空腹靜脈血，真空采集管保存血液樣本。以3 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心處理血樣10 min，取血清，專業(yè)冰箱冷藏備用，冷藏溫度為-20 ℃。（2）間接免疫熒光法檢測：間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）、抗線粒體抗體（anti-mitochondrial antibody，AMA）、抗平滑肌抗體（anti-smooth muscle antibody，SMA）。（3）抗原檢測：采用人喉表皮樣癌細(xì)胞（HEp-2）基質(zhì)、大鼠胃基質(zhì)冰凍生物薄片進(jìn)行抗原檢測。1 ∶100 比例配比待檢血清，溫浴處理基質(zhì)30 min，洗滌基質(zhì)，置入有異硫氰酸熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG，等待30 min，然后洗片、封片。使用熒光顯微鏡觀察待檢樣本。ANA、AMA 陽性標(biāo)準(zhǔn)為組織、細(xì)胞可見特異性黃綠色熒光。（4）免疫印跡法檢測：采用免疫印跡法測定抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（soluble liver antigen/liver pancreas，SLA/LP）、抗肝腎微粒體（liver-kidney microsomal，LKM）抗體Ⅰ型。使用硝酸纖維薄膜層包被處理基因重組表達(dá)抗LKM 抗體Ⅰ型、SLM/LP 抗原，分別包被相對分子質(zhì)量不同的5 種AMA-M2 亞型抗原。1 ∶50 配比處理待檢血清，取30 μL 使用1.5 mL 稀釋液稀釋處理，然后觀察膜反應(yīng)變化。在常規(guī)溫度下振蕩孵育持續(xù)l h，洗膜后滴入抗人IgG（有酶標(biāo)記），常溫下振蕩孵育1 h。然后洗膜處理，滴入酶標(biāo)記抗人IgG，常溫水平幻蝶宮1 h，達(dá)到要求后，使用5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽（5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate，BCIP）/四唑硝基藍(lán)（nitrotetrazolium blue chloride，NBT）顯色處理10 min。利用蒸餾水終止反應(yīng)。對比標(biāo)準(zhǔn)對照條帶圖，判斷SLA/LP、抗LKM 抗體Ⅰ型陽性結(jié)果，特定區(qū)域條帶著色、顏色清晰視為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）AMA、ANA 陽性率：比較3 組AMA（≥1 ∶5為陽性）和ANA（≥1 ∶80 為陽性）陽性率。（2）SLA/LP 抗LKM 抗體Ⅰ型、SMA 滴度檢測：比較3 組SLA/LP 陽性率（采用免疫印跡法檢測時，對照條帶圖顯示清晰的紫色為陽性）、抗LKM 抗體Ⅰ型陽性率（采用免疫印跡法檢測時，對照條帶圖顯示清晰的紫色為陽性）、SMA 滴度陽性率（滴度≥1 ∶320）。（3）并發(fā)癥發(fā)生率：統(tǒng)計肝硬化、消化性潰瘍、膽囊結(jié)石伴慢性膽囊炎、高血壓、貧血、慢性乙型肝炎、干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等并發(fā)癥發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 3 組血清AMA、ANA 陽性率比較

B 組AMA 陽性率高于A 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組ANA 陽性率高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B 組與C 組ANA 陽性率、A 組與C組AMA 陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 A 組、B 組、C 組血清AMA、ANA 陽性率比較[例（%）]

2.2 3 組血清SLA/LP、抗LKM 抗體Ⅰ型、SMA 滴度陽性率比較

A 組SLA/LP 陽性率高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組抗LKM 抗體Ⅰ型陽性率高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組SMA 滴度陽性高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 A 組、B 組、C 組血清SLA/LP、抗LKM 抗體Ⅰ型、SMA 滴度陽性率比較[例（%）]

2.3 3 組并發(fā)癥發(fā)生率比較

肝硬化發(fā)生率B 組＞A 組＞C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組膽囊結(jié)石伴慢性膽囊發(fā)生率低于C組、B 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；3 組高血壓、消化性潰瘍、貧血、慢性乙型肝炎、干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 A 組、B 組、C 組并發(fā)癥發(fā)生率比較[例（%）]

3 討論

AILD 即肝臟組織受到免疫功能異常、免疫應(yīng)答等自身免疫系統(tǒng)攻擊影響發(fā)生病變，通常起病隱匿而且無典型癥狀。從組織病理學(xué)、免疫學(xué)角度分析，可將AILD 分為AIH、PBC、PSC 等疾病類型[9]。準(zhǔn)確檢測AILD，科學(xué)疾病分型，對于臨床精準(zhǔn)治療具有重要意義[10]。自身抗體譜檢測是現(xiàn)代比較先進(jìn)、可靠的檢測方法[11]。通過綜合檢測和免疫分析，可有效確診上述疾病，指導(dǎo)醫(yī)師科學(xué)治療[12]。

本研究體現(xiàn)了《自身免疫性肝病基礎(chǔ)與臨床》[8]的臨床參考或執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。本研究中，B 組AMA 陽性率高于A 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組ANA 陽性率高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；A 組SLA/LP、抗LKM 抗體Ⅰ型陽性率高于其他類型AILD 患者，此外，A 組SMA 滴度陽性率高于B 組、C 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

自身抗體譜檢測可用于早期診斷AILD[13]。血清AMA可特異性識別PBC，SLA/LP 在AIH 檢測中具有較高敏感度[14-15]。不同類型AILD 患者血清ANA 指標(biāo)存在一定差異，對AIH 具有顯著影響[16]。AIH 患者ANA 陽性率顯著升高[17]。PBC 患者、PSC 患者ANA 水平出現(xiàn)一定程度變化[18]。正常情況下，針對健康體檢者進(jìn)行血清ANA 檢測時，結(jié)果應(yīng)呈現(xiàn)為陰性[19]。自身抗體譜檢測中，ANA 具有高敏感性，是現(xiàn)代篩查AILD 的重要手段，被視為AILD 標(biāo)志物[20]。PBC患者常見AMA 激活。AMA 檢測常見AMA-M2 陽性，是PBC 血清特征性自身抗體。PBC 患者常見血清AMA 檢測陽性結(jié)果。在PBC 篩查中，血清AMA 可作為診斷敏感性指標(biāo)。PSC 為AILD 高發(fā)性病型，自身抗體譜檢測顯示，部分PSC患者出現(xiàn)ANA 陽性結(jié)果，而PSC 患者血清AMA 通常為陰性結(jié)果。SMA 滴度≥1 ∶320、SLA/LP、抗LKM 抗體Ⅰ型1 值、P1值為A 組、B 組比較，χ22 值、P2值為A 組、C 組比較，χ23 值、P3值為B 組、C 組比較。1 值、P1值為A 組、B 組比較，χ22 值、P2值為A 組、C 組比較，χ23 值、P3值為B 組、C 組比較。

注：χ21 值、P1值為A 組、B 組比較，χ22 值、P2值為A 組、C 組比較，χ23 值、P3值為B 組、C 組比較。檢測等顯示，PSC 患者通常為陰性結(jié)果。PSC 鑒別與診斷是AILD 診斷難點(diǎn)，應(yīng)結(jié)合既往肝病史，分析影像學(xué)檢查結(jié)果，實(shí)施綜合診斷以降低PSC 誤診風(fēng)險。并發(fā)癥方面，AILD 患者因?yàn)榇嬖诿庖呦到y(tǒng)疾病和肝損傷，常合并多種疾病，其中，B 組患者合并肝硬化風(fēng)險較高，C 組合并膽囊結(jié)石伴慢性膽囊發(fā)生率高。

綜上所述，采用自身抗體譜檢測法對于老年AILD 診斷具有積極意義。在臨床疾病診斷中，應(yīng)采用多種自身抗體檢測方法，實(shí)施自身抗體譜檢測，予以針對性治療干預(yù)。此外，應(yīng)加強(qiáng)對老年AILD 患者的并發(fā)癥防控，實(shí)施綜合治療，促進(jìn)患者預(yù)后。