王 穎 高惠英 張 琪 尚莉麗 范春雪 羅 靜 王彩虹

痛風(fēng)是一種由尿酸鈉晶體沉積在組織和關(guān)節(jié)中引起的慢性炎癥性疾病。痛風(fēng)在普通人群中的患病率為2%～4%,以男性多見,隨著近年來患病率的增加,其對公共健康的危害越來越嚴(yán)重[1]。痛風(fēng)臨床上分為無癥狀高尿酸血癥、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、臨界期和慢性痛風(fēng)。高尿酸血癥(hyperuricemia,HUA)被認(rèn)為是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的必要先決條件,然而,約74%的HUA患者從未發(fā)生急性痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎,許多尿酸鈉晶體沉積的患者也沒有急性痛風(fēng)癥狀,這說明除了尿酸鈉結(jié)晶外,還有其他一些重要因素也參與了痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生[2]。研究發(fā)現(xiàn),某些T細(xì)胞亞群與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生密切相關(guān)[1]。

脂聯(lián)素是一種由ADIPOQ基因編碼的30kDa蛋白,由脂肪組織產(chǎn)生[3]。脂聯(lián)素在結(jié)構(gòu)上與補體Clq及腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)相似。脂聯(lián)素主要與其受體AdipoR1/R2結(jié)合后,通過過氧化物酶體增殖物活化受體-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPAR-α)和腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK) 兩條主要信號通路產(chǎn)生抗炎、抗纖維化、脂肪酸氧化及葡萄糖攝取等生物學(xué)效應(yīng)[4]。研究顯示,脂聯(lián)素在代謝綜合征、心血管疾病中有抗炎特性,相反,脂聯(lián)素在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等免疫性疾病中有促炎作用[5]。但是痛風(fēng)患者外周血脂聯(lián)素水平表達(dá)如何、其與炎癥活動及CD4+T細(xì)胞亞群是否有相關(guān)性尚不明確。本研究旨在通過對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血脂聯(lián)素的研究,明確其是否與炎性指標(biāo)、CD4+T細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子有關(guān),為痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制及臨床預(yù)防和治療提供新的思路與方向。

資料與方法

1.一般資料:收集 2020年9月～2022年7月于山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診及住院的確診急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的90例患者納入急性痛風(fēng)組,所有患者均為急性發(fā)作期男性,且均符合2015年美國風(fēng)濕病學(xué)會和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟制定的痛風(fēng)分類標(biāo)準(zhǔn),并除外心腦血管、肝臟、腎臟等重要臟器疾病,血液及內(nèi)分泌系統(tǒng)受累,其他風(fēng)濕性疾病,代謝性疾病及其他慢性病,惡性腫瘤,處于急慢性感染期的患者及繼發(fā)性痛風(fēng)患者等。選取同期山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院72例年齡、性別相匹配的健康男性體檢者納入健康對照組,兩組受試者性別、年齡、空腹血糖比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),有可比性,詳見表1。本研究經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)[倫理學(xué)審批號:(2023)YX第(100)號],且受試者已知情同意。

表1 急性痛風(fēng)組與健康對照組一般資料比較

2.檢測方法:脂聯(lián)素試劑盒購自江蘇酶免實業(yè)有限公司,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清脂聯(lián)素水平。外周血CD4+T細(xì)胞亞群及部分細(xì)胞因子采用流式細(xì)胞學(xué)方法由山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科實驗室完成。

3.觀察指標(biāo):血清脂聯(lián)素、活動性指標(biāo)(中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞沉降率、C反應(yīng)蛋白)、血尿酸、CD4+T細(xì)胞亞群(Th1、Th2、Th17、Treg、Th1/Th2、Th17/Treg)、細(xì)胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α)等數(shù)值。

結(jié) 果

1.急性痛風(fēng)組與健康對照組外周血脂聯(lián)素水平比較:與健康對照組比較,急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素明顯降低[1922.92(1480.98, 2543.55)pg/ml vs 2451.95(2108.67, 2845.77)pg/ml],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(z=-4.242,P<0.01),詳見圖1。

圖1 急性痛風(fēng)組和健康對照組外周血脂聯(lián)素水平比較

2.急性痛風(fēng)組與健康對照組外周血CD4+T細(xì)胞亞群比較:與健康對照組比較,急性痛風(fēng)組外周血Th2、Th17、Th17/Treg均升高(P<0.05),Treg、Th1/Th2均降低(P<0.05),Th1差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),詳見表2。

表2 急性痛風(fēng)組與健康對照組外周血CD4+T細(xì)胞亞群指標(biāo)比較[M(Q1,Q3)]

3.急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與一般臨床資料及疾病活動度相關(guān)性分析:將急性痛風(fēng)組90例患者測定的脂聯(lián)素與一般臨床資料及疾病活動度進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),脂聯(lián)素與中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞沉降率和C反應(yīng)蛋白呈負(fù)相關(guān)(r=-0.244,P<0.05;r=-0.311,P<0.05;r=-0.506,P<0.001),而與血尿酸無相關(guān)性,詳見表3。

表3 急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與一般臨床資料及疾病活動度的相關(guān)性[M(Q1,Q3),n=90]

4.急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與CD4+T細(xì)胞亞群相關(guān)性分析:將急性痛風(fēng)組90例患者測定的脂聯(lián)素與CD4+T細(xì)胞亞群進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),急性痛風(fēng)組脂聯(lián)素與Th1、Th1/Th2均呈正相關(guān)(r=0.252,P<0.05;r=0.218,P<0.05),而與Th2、Th17、Treg及Th17/Treg均無相關(guān)性,詳見表4、圖2。

圖2 急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與CD4+T細(xì)胞亞群的相關(guān)性

表4 急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與CD4+T細(xì)胞亞群的相關(guān)性[M(Q1,Q3),n=90]

5.急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與細(xì)胞因子相關(guān)性分析:急性痛風(fēng)組90例中有62例患者檢測了細(xì)胞因子,從表5可以看出,急性痛風(fēng)組IL-6和TNF-α中位數(shù)均高于正常值,而IL-2、IL-4和IL-10的中位數(shù)均在正常范圍。將62例患者脂聯(lián)素與部分細(xì)胞因子進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),急性痛風(fēng)組脂聯(lián)素與IL-2、IL-4及IL-10均呈正相關(guān)(r=0.323,P<0.05;r=0.377,P<0.05;r=0.359,P<0.05);而與IL-6、TNF-α均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.265,P<0.05;r=-0.299,P<0.05),詳見表5。

表5 急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與細(xì)胞因子的相關(guān)性(n=62)

6.急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與疾病活動度、Th1及部分細(xì)胞因子多元線性回歸分析:急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與紅細(xì)胞沉降率、C反應(yīng)蛋白、IL-6和TNF-α均呈負(fù)相關(guān)(BESR=-12.541,P=0.003;BCRP=-8.256,P=0.024;BIL-6=-15.907,P=0.037;BTNF-α=-79.770,P=0.040),而與Th1及IL-10均呈正相關(guān)(BTh1=2.959,P=0.006;BIL-10=92.702,P=0.044),詳見表6。

表6 急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素與疾病活動度、Th1及部分細(xì)胞因子多元線性回歸分析

討 論

痛風(fēng)是關(guān)節(jié)內(nèi)尿酸鈉晶體沉積所致的炎性關(guān)節(jié)炎。尿酸鈉晶體激活單核-吞噬細(xì)胞中的NLRP3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3)炎性小體,促進(jìn)pro-IL-1β向IL-1β成熟,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞聚集到晶體沉積位點,從而釋放大量促炎性細(xì)胞因子、趨化因子,如IL-6、TNF-α和IL-1β及前列腺素E2,產(chǎn)生炎癥級聯(lián)反應(yīng),最終導(dǎo)致痛風(fēng)急性發(fā)作[6,7]。

本研究發(fā)現(xiàn),與健康對照組比較,急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素水平明顯降低(z=-4.242,P<0.05),這與既往研究報道一致,表明脂聯(lián)素與痛風(fēng)發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),脂聯(lián)素是痛風(fēng)發(fā)作的負(fù)性調(diào)節(jié)因子[8,9]。同時,本研究發(fā)現(xiàn),急性痛風(fēng)組患者外周血脂聯(lián)素與中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞沉降率和C反應(yīng)蛋白均呈顯著負(fù)相關(guān),多元線性回歸分析也進(jìn)一步證實,脂聯(lián)素與紅細(xì)胞沉降率及C反應(yīng)蛋白呈顯著負(fù)相關(guān),這提示脂聯(lián)素的降低可能與痛風(fēng)疾病活動或急性發(fā)作有關(guān)。還有研究報道,免疫紊亂也是痛風(fēng)發(fā)病的重要因素,如Th1、Th17介導(dǎo)的免疫應(yīng)答增強可能在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)展過程中引起促炎作用,而Treg和Th2可能抑制痛風(fēng)性炎癥的進(jìn)展,從而實現(xiàn)抗炎反應(yīng)[1]。

本研究結(jié)果顯示,急性痛風(fēng)組患者外周血Th17升高,而Treg降低,其比值Th17/Treg升高;Th2細(xì)胞明顯升高,而Th1細(xì)胞有降低趨勢,其比值Th1/Th2顯著降低,提示了Th17/Treg和Th1/Th2失衡均參與了急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病,進(jìn)一步證實免疫紊亂在急性痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制中的作用。Th17增強免疫應(yīng)答及Treg功能受損已被證明參與了許多免疫介導(dǎo)疾病的發(fā)病機(jī)制。Dai等[10]研究發(fā)現(xiàn),尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠脾臟中Th17及Th17/Treg水平增加,表明Th17/Treg失衡在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中發(fā)揮重要作用。Th2細(xì)胞主要發(fā)揮抗炎作用,在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作時明顯增高,這也可能是機(jī)體自我保護(hù)的一種調(diào)節(jié)作用。

脂聯(lián)素作為免疫系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因子,其在代謝性疾病及自身免疫性疾病中均發(fā)揮重要作用。如脂聯(lián)素下調(diào)促炎性細(xì)胞因子(如TNF-α、IL-6),增加抗炎性細(xì)胞因子(如IL-10)的表達(dá),從而有免疫抑制作用。然而,也有報道,脂聯(lián)素可以促進(jìn)Th1分化,進(jìn)而產(chǎn)生促炎反應(yīng)[11]。本研究進(jìn)一步將脂聯(lián)素與CD4+T細(xì)胞亞群進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn),脂聯(lián)素與Th1細(xì)胞及Th1/Th2呈正相關(guān),而與Th2、Th17及Treg細(xì)胞無相關(guān)性,進(jìn)一步多元線性回歸分析也證實,脂聯(lián)素與Th1呈顯著正相關(guān),故脂聯(lián)素可能通過打破Th1/Th2動態(tài)平衡來調(diào)節(jié)急性痛風(fēng)炎癥。同時,本研究又進(jìn)一步分析脂聯(lián)素與T細(xì)胞亞群分泌相關(guān)細(xì)胞因子還發(fā)現(xiàn),急性痛風(fēng)組患者脂聯(lián)素與IL-2、IL-4和IL-10均呈正相關(guān),多元線性回歸分析也提示,脂聯(lián)素與IL-10呈正相關(guān),但未發(fā)現(xiàn)與IL-2及IL-4的相關(guān)性,這可能受多種因素影響,后期可行動物實驗進(jìn)一步研究。已知IL-2由Th1分泌,主要發(fā)揮促炎作用,而IL-4由Th2分泌,發(fā)揮重要的抗炎作用。因此,在急性痛風(fēng)期,低水平的脂聯(lián)素可能改變了外周血的免疫微環(huán)境,從而使促炎性細(xì)胞因子IL-2和抗炎性細(xì)胞因子IL-4處于動態(tài)變化和消長,尚需進(jìn)一步分時段研究。

急性痛風(fēng)組外周血脂聯(lián)素水平明顯降低,Treg也顯著降低。IL-10主要由Treg細(xì)胞分泌,目前被認(rèn)為是炎癥和免疫的抑制因子[12]。脂聯(lián)素/脂聯(lián)素受體1軸通過Treg促進(jìn)IL-10釋放進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用[13]。Chen等[14]研究發(fā)現(xiàn),IL-10可以通過抑制巨噬細(xì)胞中IL-33的表達(dá),選擇性地破壞NF-κB信號通路,從而改善自身免疫性關(guān)節(jié)炎。在本研究中,痛風(fēng)患者IL-2、IL-4和IL-10的數(shù)值雖均在正常范圍內(nèi),但I(xiàn)L-6和TNF-α均明顯高于正常值,也有研究報道,痛風(fēng)患者外周血IL-6升高,說明在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作時細(xì)胞因子IL-6和TNF-α起主導(dǎo)作用[15]。

本研究還發(fā)現(xiàn),急性痛風(fēng)組患者低脂聯(lián)素水平與IL-6和TNF-α呈負(fù)相關(guān),多元線性分析也證實,脂聯(lián)素與IL-6和TNF-α呈顯著負(fù)相關(guān)。在巨噬細(xì)胞中,脂聯(lián)素可通過下調(diào)促炎性細(xì)胞因子抑制M1巨噬細(xì)胞活化,同時促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞增殖和活化,導(dǎo)致抗炎性細(xì)胞因子的表達(dá),從而發(fā)揮抑制炎癥和抑制免疫的作用,故急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者脂聯(lián)素的降低可使IL-6和TNF-α上調(diào),進(jìn)一步說明脂聯(lián)素降低與免疫炎癥相關(guān),并參與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作[16]。另外,Yokose等[17]研究表明,尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的TNF-α可以顯著增加IL-1β的釋放和炎性小體的激活,從而誘發(fā)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。目前,TNF-α拮抗劑在治療難治性痛風(fēng)上已取得了良好的效果。

綜上所述,急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血脂聯(lián)素呈低表達(dá),且脂聯(lián)素降低與痛風(fēng)急性發(fā)作密切相關(guān)。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血Th2和Th17明顯升高,而Treg明顯減低,提示Th17/Treg和Th1/Th2失衡均參與了急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病,并且脂聯(lián)素降低與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者免疫紊亂及免疫炎癥相關(guān)。因此,靶向干預(yù)脂聯(lián)素和免疫調(diào)節(jié)治療為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療提供了潛在的新靶點和新方向。本研究尚存在一些不足,如有研究報道急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者外周血脂聯(lián)素與血尿酸水平相關(guān),但在本實驗中無明顯相關(guān)性,這可能與脂聯(lián)素不同分子亞型及其濃度分布相關(guān),后期將通過擴(kuò)大樣本量,進(jìn)一步研究脂聯(lián)素亞型與血尿酸的相關(guān)性。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。