楊亞楠 王蕊 張文婷 劉恒

心血管疾病的類型較多，其中冠心?。–oro?nary heart disease，CHD）最為常見(jiàn)，其在中老年群體的發(fā)病率、致殘率及死亡率較高［1］。臨床研究顯示，冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定程度與CHD 病情進(jìn)展密切相關(guān)［2］。穩(wěn)定斑塊具有聲影較強(qiáng)、回聲強(qiáng)等特點(diǎn)；不穩(wěn)定斑塊包括鈣化結(jié)節(jié)、糜爛斑塊及破裂斑塊等，易發(fā)生破裂從而引起管腔閉塞、血流中斷及血栓形成，嚴(yán)重者還會(huì)出現(xiàn)心源性休克［3］。因此，尋找簡(jiǎn)便易行、高效的生物標(biāo)志物在早期及時(shí)診斷CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度對(duì)制定治療方案、改善患者預(yù)后具有重要的價(jià)值。

近年來(lái)微小RNA（microRNA，miRNA）在心血管疾病中的作用逐漸受到臨床關(guān)注，有報(bào)道顯示CHD 患者血清miRNA 存在異常表達(dá)［4］。國(guó)內(nèi)外研究也發(fā)現(xiàn)，miRNA 與CHD 患者斑塊形成有關(guān)，部分miRNA在CHD中呈特異性表達(dá)［5］。miR?122?5p具有較強(qiáng)的組織特異性，與心臟疾病的發(fā)生有關(guān)，臨床研究發(fā)現(xiàn)抑制miR?122?5p表達(dá)可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞抗凋亡［6］。本研究擬分析CHD 患者血清miR?122?5p水平與斑塊穩(wěn)定程度、預(yù)后的關(guān)系，旨在為探尋評(píng)估CHD 患者預(yù)后的指標(biāo)提供新參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

取張家口市第五醫(yī)院2019 年8 月至2021 年8月186 例CHD 患者作為研究組。另取同期90 名健康體檢者作為對(duì)照組。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①滿足《心血管內(nèi)科疾病診療指南》［7］CHD 標(biāo)準(zhǔn)；②影像學(xué)檢查確診；③首次發(fā)??；④患者簽署知情同意書；⑤近1 個(gè)月未接受相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類型心臟疾病者；②精神疾病、凝血及認(rèn)知功能嚴(yán)重?fù)p傷者；③近期有手術(shù)史及創(chuàng)傷史者；④腎、腦、肝等重要臟器嚴(yán)重?fù)p傷者；⑤自身免疫性疾病、急慢性感染性疾病、惡性腫瘤；⑥臨床資料不全者；⑦缺乏隨訪資料。

1.3 方法

1.3.1 資料收集

通過(guò)詢問(wèn)患者、查詢電子病歷等途徑收集患者年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、舒張壓、收縮壓、糖尿病史、高血脂史、血脂相關(guān)指標(biāo)等臨床資料。

1.3.2 血清miR?122?5p水平檢測(cè)

研究組于入院當(dāng)日、對(duì)照組于體檢當(dāng)日清晨取肘靜脈血5 mL，室溫下離心處理（轉(zhuǎn)速3 000 r/min、離心半徑10 cm、時(shí)間10 min），取上清液待測(cè)。通過(guò)Trizol 試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司）提取血清總RNA，使用甲醛變性電泳檢測(cè)其完整性，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京諾為生物技術(shù)公司）合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄體積10 μL：5×PrimeScript RT Master Mix 2.0 μL、RNA 2.0 μL、RNase Free H2O 6.0 μL；反應(yīng)條件：37℃15 min、85℃5 s、4℃反應(yīng)至結(jié)束后保存于-20℃冰箱。血清miR?122?5p通 過(guò)qRT?PCR檢測(cè)，反應(yīng)體系 為：cDNA模板2 μL，上下游引物各1.5 μL，SYBR Green Master Mix 10 μL，ddH2O 8 μL。miR?122?5p上游引物序列：5′?ACACTCCAGCTGGGTGGAGTGTGACAA TGG?3′，下游引物序列：5′?TGGTGTCGTG?GAGTCG?3′，內(nèi)參選擇U6，U6上游引物序列：5′?GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT?3′；下游引物序列：5′?CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT?3′。反應(yīng)條件：95℃5 min，95℃15 s，60℃1 min，72℃30 s，共40 個(gè)循環(huán)。通過(guò)2?ΔΔCt計(jì)算miR?122?5p水平。

1.3.3 斑塊穩(wěn)定程度評(píng)估

采用iLab 血管內(nèi)超聲顯像儀進(jìn)行檢查，按照美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)與歐洲心臟病協(xié)會(huì)聯(lián)合制定的《冠脈血管內(nèi)超聲的檢測(cè)指南》［8］分析圖像，明確斑塊性質(zhì)，穩(wěn)定斑塊：病變血管狹窄程度小于70%，斑塊邊緣清晰、突入管腔內(nèi)、回聲均勻；不穩(wěn)定斑塊：斑塊表面潰瘍、破裂，斑塊內(nèi)脂質(zhì)、鈣化，回聲不均勻。186 例CHD 患者根據(jù)斑塊穩(wěn)定程度分為不穩(wěn)定斑塊組（n=58）及穩(wěn)定斑塊組（n=128）。

1.4 隨訪

CHD 患者出院后均接受1 年隨訪，隨訪方式包括微信、電話及復(fù)診，記錄1 年內(nèi)心血管不良事件發(fā)生情況，將心血管不良事件發(fā)生情況作為評(píng)估預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)［9］，分為預(yù)后不良組（n=50）及預(yù)后良好組（n=136）。心血管不良事件包括惡性心律失常、復(fù)發(fā)心絞痛、心源性再入院、心源性休克及心源性死亡等不良事件。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x ± s）表示，組間行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；采用ROC 曲線分析血清miR?122?5p水平對(duì)CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度的診斷價(jià)值；采用Logistic 回歸分析CHD 患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、舒張壓、收縮壓、糖尿病史及高血脂史等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of General Information between the two Groups［（），n（%）］

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of General Information between the two Groups［（），n（%）］

2.2 兩組血清miR?122?5p 水平比較

研究組血清miR?122?5p水平為（0.54±0.13），對(duì)照組血清miR?122?5p水平為（0.19±0.03），研究組血清miR?122?5p水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=25.197，P＜0.001）。

2.3 CHD 不同斑塊穩(wěn)定程度患者血清miR?122?5p水平比較

不穩(wěn)定斑塊組血清miR?122?5p水平為（0.69±0.13），穩(wěn)定斑塊組血清miR?122?5p水平為（0.47±0.11），不穩(wěn)定斑塊組血清miR?122?5p水平高于穩(wěn)定斑塊組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 血清miR?122?5p 水平對(duì)CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度的診斷價(jià)值

由ROC 曲線可知，血清miR?122?5p水平診斷CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度的AUC 為0.845，95% CI為0.785～0.905，截?cái)嘀禐?.54，特異度為0.805，敏感度為0.810（P＜0.05）。見(jiàn)圖1。

2.5 影響CHD 患者預(yù)后的單因素分析

隨訪1 年，186 例CHD 患者中，預(yù)后不良患者50 例，預(yù)后良好患者136 例。預(yù)后不良組血清miR?122?5p水平高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 影響CHD 患者預(yù)后的單因素分析［（），n（%）］Table 2 Univariate analysis of prognostic factors affecting CHD patients［（），n（%）］

表2 影響CHD 患者預(yù)后的單因素分析［（），n（%）］Table 2 Univariate analysis of prognostic factors affecting CHD patients［（），n（%）］

2.6 影響CHD 患者預(yù)后的多因素分析

CHD患者預(yù)后情況作為因變量（預(yù)后良好=0；預(yù)后不良=1），以血清miR?122?5p水平作為自變量（以所有患者平均值為界：≤平均值=0；＞平均值=1），Logistic分析顯示，血清miR?122?5p水平過(guò)高是CHD 患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 影響CHD 患者預(yù)后的多因素分析Table 3 Multivariate analysis of factors affecting the prognosis of CHD patients

3 討論

CHD 屬于慢性炎癥性疾病，發(fā)病基礎(chǔ)為動(dòng)脈粥樣硬化，但病理機(jī)制較為復(fù)雜，其發(fā)生發(fā)展與炎癥反應(yīng)、自身免疫、遺傳及代謝紊亂等因素有關(guān)。有報(bào)道顯示，CHD 患者的內(nèi)皮細(xì)胞能吸引白細(xì)胞至新生動(dòng)脈粥樣硬化位置，且隨動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，白細(xì)胞及其他血管壁細(xì)胞會(huì)釋放大量不同類型的促炎介質(zhì)，促進(jìn)冠狀動(dòng)脈斑塊損傷，從而增加斑塊破裂風(fēng)險(xiǎn)［10］。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，約3/4 的CHD 患者是不穩(wěn)定斑塊破裂而引起急性發(fā)?。?1］。不穩(wěn)定斑塊具有血栓形成傾向，其不穩(wěn)定性會(huì)引起斑塊破裂，增加不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)。及早識(shí)別不穩(wěn)定斑塊對(duì)評(píng)估CHD 病情進(jìn)展和指導(dǎo)治療具有重要的意義?，F(xiàn)階段臨床上主要通過(guò)冠狀動(dòng)脈造影對(duì)冠狀動(dòng)脈狹窄程度進(jìn)行評(píng)估，但該檢查手段無(wú)法有效判斷冠狀動(dòng)脈斑塊的組織結(jié)構(gòu)特性。因此，臨床亟需探尋其他有效手段診斷CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度。

miRNAs 是一類具有組織特異性的非編碼RNA，能調(diào)控細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、增殖及凋亡等生命活動(dòng)過(guò)程，其可配對(duì)靶基因mRNA，誘導(dǎo)沉默復(fù)合體，影響mRNA 過(guò)程。臨床研究發(fā)現(xiàn)，心血管疾病的發(fā)生發(fā)展與miRNAs 存在密切聯(lián)系，miRNAs 結(jié)合靶基因后通過(guò)復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)影響血小板活化及斑塊破裂等過(guò)程，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化后血管生成［12］。miR?122?5p屬于組織特異性較強(qiáng)的miRNA，在肝臟組織中呈特異性表達(dá)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，心血管疾病患者血清miR?122?5p水平隨著病情進(jìn)展而升高［13］。國(guó)外報(bào)道認(rèn)為，miR?122?5p與心臟疾病藥物治療效果有關(guān)，其過(guò)表達(dá)會(huì)降低藥物對(duì)心臟疾病的治療效果［14］。本研究結(jié)果顯示，研究組血清miR?122?5p水平均高于對(duì)照組，提示miR?122?5p在CHD 患者血清中呈高表達(dá)。這可能是因?yàn)椋篊HD 會(huì)引起血管內(nèi)壁炎癥反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致miR?122?5p水平升高。既往研究顯示，不穩(wěn)定斑塊是引起CHD 的重要因素，破裂的薄壁纖維粥樣斑塊、局部炎癥反應(yīng)是不穩(wěn)定斑塊的重要特征［15］。但現(xiàn)階段臨床關(guān)于血清學(xué)指標(biāo)診斷斑塊穩(wěn)定程度的研究較少。本研究對(duì)比不同斑塊穩(wěn)定程度CHD 患者血清miR?122?5p水平發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定斑塊組遠(yuǎn)高于穩(wěn)定斑塊組，表明miR?122?5p與CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度有關(guān)。進(jìn)一步的ROC 曲線分析顯示，血清miR?122?5p診斷CHD 患者斑塊穩(wěn)定程度的AUC為0.845，提示miR?122?5p可作為診斷斑塊穩(wěn)定程度的參考指標(biāo)。本研究還發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組血清miR?122?5p水平高于預(yù)后良好組，表明miR?122?5p與CHD 患者預(yù)后有關(guān)。進(jìn)一步的Logistic 回歸分析顯示，血清miR?122?5p水平過(guò)高是CHD 患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示臨床應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注CHD 患者血清miR?122?5p水平變化，并予以針對(duì)性干預(yù)，從而避免不良預(yù)后。

綜上所述，miR?122?5p在CHD 患者血清中呈高表達(dá)，對(duì)斑塊穩(wěn)定程度具有一定的診斷價(jià)值，其水平過(guò)高是CHD 患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。