徐凱倫, 鄒芳, 孫雪婷, 馬方旭, 張志華, 王布

1.河北北方學院附屬第一醫(yī)院,河北張家口075000;2.河北省胸科醫(yī)院,河北石家莊050041

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者醫(yī)院確診時多處于中晚期,此時多以化療為主要治療手段,但治療效果不理想,預后較差[1]。有研究顯示,長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可通過與miRNA(miR)結合參與細胞增殖、分化、凋亡等許多重要的調控過程[2-3]。既往有研究報道,miR-210在NSCLC組織和NSCLC患者血清中表達上調,推測血清miR-210水平變化可作為診斷早期NSCLC的參考指標[4]。但lncRNA-miR210HG作為miR-210的轉錄前體,鮮少有研究報道其與NSCLC之間的關系。既往有研究顯示,SH3BGRL3在多種腫瘤組織中高表達[5-6],關于SH3BGRL3在NSCLC中發(fā)揮作用的機制鮮有報道。因此,本研究分析NSCLC患者癌組織lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平及其臨床意義,為尋找NSCLC潛在的有效生物標志物提供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2018年9月—2019年9月病理確診的76例NSCLC患者,其中男性50例,女性26例,年齡(53.41±5.48)歲。納入標準:符合NSCLC診斷標準[4];首次確診;均行腹腔鏡根治術;均獲得患者及家屬知情同意。排除標準:存在心、肺、腎等器官功能障礙;合并其他惡性腫瘤;其他腫瘤發(fā)生肺轉移;既往接受治療;復發(fā)性NSCLC。剔除標準:中途失訪者;臨床資料不完整者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準。搜集患者臨床資料,包括年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移、分化程度等。

1.2 實時熒光定量PCR檢測lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表達水平

所有患者術中取癌組織及距癌組織邊緣至少2 cm癌旁正常組織,勻漿,采用TRIzol法提取組織總RNA,反轉錄獲得cDNA,進行熒光定量PCR擴增。設置反應條件:95 ℃ 5 min;95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,共40個循環(huán)。引物序列l(wèi)ncRNA-miR210HG上游:5′-CTGCTGTGGAACTGGATGTTTTC-3′,下游:5′-GTGGCCAGAGTGCTTCAGATC-3′;SH3BGRL3上游:5′-CTATGCTGTTGGCACGACA-3′,下游:5′-TCCTGAGGTGACTGTGAACC-3′;β-actin上游:5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′,下游:5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′。采用2-ΔΔCT法計算lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表達水平。

參考文獻[7]對患者進行分組,將SH3BGRL3 mRNA表達水平≥0.72者納入陽性組,<0.72者納入陰性組;lncRNA-miR210HG mRNA表達水平≥1.61者納入陽性組,<1.61者納入陰性組。

1.3 隨訪

通過門診復查、電話、電子郵件等多種形式對術后患者進行3年隨訪,入組患者均獲得有效隨訪。隨訪起始時間為手術日,隨訪終點為患者死亡或隨訪結束,每3個月進行1次隨訪。隨訪截止時間為2022年9月。比較各組患者生存情況。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結 果

2.1 癌組織和癌旁組織中l(wèi)ncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表達水平的比較

NSCLC癌組織中l(wèi)ncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平均高于癌旁組織(P<0.05;表1)。

表1 癌組織和癌旁組織中l(wèi)ncRNA-miR210HG和SH3BGRL3表達水平的比較

2.2 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達患者臨床病理特征的比較

lncRNA-miR210HG陽性表達者Ⅲ期占比、淋巴結轉移占比高于陰性表達者;SH3BGRL3陽性表達者Ⅲ期占比、淋巴結轉移占比、低中分化占比高于陰性表達者(P<0.05;表2)。

表2 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達患者臨床病理特征的比較 例(%)

2.3 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平患者生存情況的比較

lncRNA-miR210HG陽性組總生存率低于陰性組(52.38%比73.53%;P<0.05),SH3BGRL3陽性組總生存率低于陰性組(45.83%比71.43%,P<0.05;圖1)。

圖1 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平患者生存情況的比較a為P<0.05,與lncRNA-miR210HG陰性組比較;b為P<0.05,與SH3BGRL3陰性組比較。

3 討 論

非小細胞肺癌包括鱗癌、腺癌、大細胞癌,屬于肺癌亞型,其占比在肺癌中最高,且預后較差,手術切除是治療早期NSCLC的金標準,但仍有部分患者出現(xiàn)術后復發(fā)。因此,探尋潛在的生物指標有利于臨床早期診斷NSCLC和制定有效治療方案。

近年來越來越多研究顯示,lncRNA可在轉錄后調節(jié)基因表達,在腫瘤發(fā)生中起到重要作用,進而影響惡性腫瘤的發(fā)展進程[8-9]。miR210HG可以通過lncRNA-miRNA-mRNA調控網(wǎng)絡調節(jié)機體多種生理過程,參與腫瘤的發(fā)展進程。有研究顯示,lncRNA-miR210HG的3′-UTR區(qū)可與miRNA210靶向結合,參與NSCLC發(fā)生發(fā)展過程[10]。目前癌癥中SH3BGRL3基因分析的研究并不多,有研究顯示,MNX1-AS1可能通過miR-744-5p/SH3BGRL3軸促進喉癌發(fā)展進程[11];SH3BGRL1基因可促進宮頸癌細胞增殖和遷移,參與腫瘤的發(fā)展過程[12]。本研究發(fā)現(xiàn),NSCLC癌組織中l(wèi)ncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平均高于癌旁組織;有研究顯示,miR210HG在NSCLC組織和細胞中過表達[13],與本研究結果基本類似。因此推測,lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3可能參與NSCLC惡性發(fā)展過程。

本研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-miR210HG陽性表達者III期占比、淋巴結轉移占比高于陰性表達者;SH3BGRL3陽性表達者III期占比、淋巴結轉移占比、低中分化占比高于陰性表達者。有研究顯示,NSCLC癌組織中SH3BGRL3表達上調,且其差異表達與臨床病理特征密切有關,同時也是NSCLC患者預后的危險因素[14],這與本研究結果部分類似。但本研究中尚未發(fā)現(xiàn)SH3BGRL3差異表達與腫瘤大小以及浸潤深度存在關聯(lián),可能與本文納入樣本量有關,需要擴大樣本量進一步分析驗證。本研究結果顯示,不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表達水平NSCLC患者TNM分期、淋巴結轉移和分化程度不同,分析其原因可能是lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3異常高表達與NSCLC腫瘤細胞的惡性生物學行為有關。

此外,本研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-miR210HG陽性組總生存率和SH3BGRL3陽性組總生存率均低于陰性組,提示lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3差異表達可能預測NSCLC患者預后,有待進一步進行研究。

綜上所述,lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3在NSCLC癌組織中高表達,不同表達水平NSCLC患者TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、預后不良不同,lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3有希望成為NSCLC的潛在標志物。本文納入樣本量較少,且患者來源單一,可能存在一定偏移,需進一步擴大樣本量和來源,分析lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3與NSCLC患者臨床特征和預后的關系。