馮晴, 羅志剛, 方吉

四川省第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川成都 610072

中國(guó)乳腺癌發(fā)病率為女性惡性腫瘤首位,死亡率高于世界平均水平[1]。近年來,分子靶向治療被廣泛應(yīng)用于腫瘤,曲妥珠單抗以癌基因?yàn)榘悬c(diǎn),在乳腺癌治療中發(fā)揮重要作用[2],但臨床上靶向藥物如曲妥珠單抗常會(huì)導(dǎo)致主要心血管不良事件[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類具有調(diào)控基因表達(dá)作用的非編碼小分子RNA,在心臟發(fā)育和損傷中發(fā)揮一定作用,miRNAs對(duì)癌癥化療誘導(dǎo)的心臟毒性也具有預(yù)測(cè)價(jià)值[4-5]。miR-21在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、肝癌和胰腺癌等癌組織中常表現(xiàn)出高表達(dá)[6],同時(shí)miR-21表達(dá)水平與乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡和腫瘤生長(zhǎng)密切相關(guān)[7]。miR-30b在乳腺癌、膀胱癌、胃癌細(xì)胞中低表達(dá),miR-30b可以調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯[8]。但目前尚未有關(guān)于血清miR-21、miR-30b對(duì)乳腺癌術(shù)后曲妥珠單抗靶向治療心臟毒性預(yù)測(cè)價(jià)值的臨床報(bào)道,本文對(duì)此進(jìn)行了研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選取本院2019年1月—2022年1月收治的乳腺癌女性患者138例為觀察組,年齡(52.6±8.3)歲,體質(zhì)指數(shù)(22.3±2.0)kg/m2。根據(jù)是否發(fā)生化療相關(guān)心臟毒性事件,將觀察組分為非心臟毒性組(115例)和心臟毒性組(23例)2個(gè)亞組。納入標(biāo)準(zhǔn):①接受切除術(shù);②美國(guó)東部腫瘤協(xié)作組行為評(píng)分≤1分;③左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)≥55%;④預(yù)期壽命≥12個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn):①明顯心功能異常;②其他惡性腫瘤病史;③嚴(yán)重感染;④妊娠期或哺乳期女性。另選取同期體檢健康女性150例為健康組,年齡(53.02±7.22)歲,體質(zhì)指數(shù)(22.82±3.27)kg/m2。兩組上述資料比較差異無顯著性(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

乳腺癌患者接受乳腺癌改良根治術(shù)后,應(yīng)用EC-D+T方案進(jìn)行化療。前3個(gè)月給與表柔比星100 mg/m2+環(huán)磷酰胺600 mg/m2靜脈滴注(每周1次),治療4個(gè)周期,3周/期。第4～6個(gè)月在前面基礎(chǔ)上加多西他賽100 mg/m2靜脈滴注(每周1次),治療4個(gè)周期,3周/期;每個(gè)周期第1周滴注4 mg/kg曲妥珠單抗(武漢維斯?fàn)柭锕こ逃邢薰?,后2周滴注2 mg/kg曲妥珠單抗(每周1次)。第7～12個(gè)月每3周靜脈滴注6 mg/kg曲妥珠單抗1次。

1.3 qRT-PCR檢測(cè)miR-21、miR-30b水平

采集健康女性體檢當(dāng)天、乳腺癌患者首次化療當(dāng)天空腹靜脈血5 mL,4 000 r/min離心10 min,分離血清。根據(jù)GenBank序列設(shè)計(jì)引物,miR-21上游引物:5′-ACATCAGCTGGCTCTTCACATGT-3′,下游引物:5′-TGTCGTGGAGTCGCAATTC-3′。miR-30b上游引物:5′-CAGAGTGCACGGTTAAAGG-3′,下游引物:5′-GGTCCAGTTATTATTTTATGC-3′。內(nèi)參U6上游引物:5′-CTCGCTTCGGCACGACATATACTA-3′,下游引物:5′-ACGAATAAGCGTGTCATCGTTGC-3′。qRT-PCR反應(yīng)體系:95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,最后72 ℃ 30 s,循環(huán)40次。采用2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-21、miR-30b相對(duì)表達(dá)量。

1.4 化療后心臟毒性的評(píng)估

化療后,分別在第0、3、6、12個(gè)月監(jiān)測(cè)患者LVEF,并計(jì)算LVEF的絕對(duì)下降值(ΔLVEF)。觀察終點(diǎn)為治療后出現(xiàn)心臟毒性,如出現(xiàn)心力衰竭、ΔLVEF≥10%且LVEF<53%、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、致命性心律失常。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組miR-21、miR-30b表達(dá)水平的比較

觀察組血清miR-21高于健康組,而miR-30b低于健康組;心臟毒性組血清miR-21高于非心臟毒性組,而miR-30b低于非心臟毒性組(P<0.05;表1)。

表1 各組血清miR-21、miR-30b表達(dá)水平的比較

2.2 不同心臟毒性患者臨床資料的比較

心臟毒性組高血壓占比高于非心臟毒性組,LVEF低于非心臟毒性組(P<0.05;表2)。

表2 不同心臟毒性患者臨床資料的比較

2.3 乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的多因素Logistic回歸分析

以是否發(fā)生心臟毒性為因變量,以上述有差異指標(biāo)為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析顯示,LVEF、miR-21、miR-30b是乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的影響因素(P<0.05;表3)。

表3 乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的多因素Logistic回歸分析

2.4 miR-21、miR-30b對(duì)心臟毒性的預(yù)測(cè)價(jià)值

血清miR-21、miR-30b聯(lián)合預(yù)測(cè)乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的診斷效能高于miR-21、miR-30b單獨(dú)預(yù)測(cè)(P<0.05;表4和圖1)。

圖1 血清miR-21、miR-30b預(yù)測(cè)乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的ROC曲線

表4 血清miR-21、miR-30b對(duì)乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

蒽環(huán)類藥物具有高效的細(xì)胞毒性作用,目前被廣泛應(yīng)用于乳腺癌治療[9];曲妥珠單抗對(duì)乳腺癌細(xì)胞具有特異性[10],可顯著改善患者軀體功能及健康狀況,但接受蒽環(huán)類藥物聯(lián)合曲妥珠單抗治療的乳腺癌患者發(fā)生心臟毒性風(fēng)險(xiǎn)高,蒽環(huán)類藥物在代謝過程中,會(huì)產(chǎn)生大量的超氧自由基引起氧化應(yīng)激,并通過增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度促使心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死,進(jìn)而導(dǎo)致心肌損傷[11]。尋找可及早判斷該心臟毒性的特異性的生物標(biāo)志物在乳腺癌患者臨床精準(zhǔn)醫(yī)療中非常重要。

RNA生物標(biāo)志物較蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物更為敏感且更具有特異性,且其檢測(cè)成本也低于蛋白質(zhì)標(biāo)志物。miR-21可通過抑制人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及其他抑癌基因來促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展,miR-30b被證實(shí)在癌癥發(fā)病機(jī)制中起著重要作用[12],在乳腺癌細(xì)胞中,曲妥單抗能夠誘發(fā)miR-30b上調(diào)并抑制細(xì)胞生長(zhǎng)[13]。miR-21和miR-30b對(duì)乳腺癌患者術(shù)后曲妥珠單抗靶向治療心臟毒性預(yù)測(cè)價(jià)值的相關(guān)研究目前較少。

本研究發(fā)現(xiàn),觀察組血清miR-21高于健康組,而miR-30b低于健康組,提示血清miR-21水平在乳腺癌患者中表達(dá)上調(diào),miR-30b在乳腺癌患者中表達(dá)下調(diào)。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),心臟毒性組血清miR-21高于非心臟毒性組,而miR-30b低于非心臟毒性組,進(jìn)一步證實(shí)miR-21和miR-30b與患者發(fā)生化療相關(guān)心臟毒性有關(guān),這與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

本研究發(fā)現(xiàn),血清miR-21、miR-30b是乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的影響因素。血清miR-21是乳腺癌患者術(shù)后曲妥珠單抗靶向治療相關(guān)心臟毒性的危險(xiǎn)因素,血清miR-30b是乳腺癌患者術(shù)后曲妥珠單抗靶向治療心臟毒性的保護(hù)因素,提示檢測(cè)血清miR-21水平可協(xié)助評(píng)估宮頸癌患者發(fā)生化療相關(guān)心臟毒性事件的風(fēng)險(xiǎn),血清miR-30b可作為預(yù)測(cè)乳腺癌患者術(shù)后曲妥珠單抗靶向治療心臟毒性的輔助指標(biāo),且miR-30b表達(dá)可降低患者發(fā)生化療相關(guān)心臟毒性事件的風(fēng)險(xiǎn)。既往研究表明,miR-21可以通過增強(qiáng)心肌氧化應(yīng)激以增加蒽環(huán)類藥物誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞毒性。蒽環(huán)類藥物聯(lián)合曲妥珠單抗可促進(jìn)機(jī)體氧化應(yīng)激和心肌細(xì)胞凋亡,從而導(dǎo)致乳腺癌患者發(fā)生心臟毒性損傷[15-17]。本研究發(fā)現(xiàn),miR-21在發(fā)生心臟毒性和非心臟毒性的乳腺癌患者中表達(dá)均增加,且出現(xiàn)心臟毒性患者miR-21增加比非心臟毒性患者更為明顯,而miR-30b表達(dá)與之相反,推測(cè)可能是化療藥物誘導(dǎo)超氧陰離子和活性氧的產(chǎn)生增加,導(dǎo)致氧化損傷。血清miR-21、miR-30b聯(lián)合預(yù)測(cè)乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的診斷效能高于miR-21、miR-30b單獨(dú)預(yù)測(cè)。

總之,血清miR-21水平升高、miR-30b水平降低與乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性密切相關(guān),二者可作為評(píng)估乳腺癌術(shù)后化療心臟毒性的生物學(xué)指標(biāo),且兩者聯(lián)合預(yù)測(cè)的效能更高,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究佐證。