王曉燕,李玉杰,宗德琪,趙而玉,于海蓮,王蘭英

(同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院膠州醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東 青島 266300)

慢性乙型肝炎(乙肝)中大概有25%～40%會(huì)演變成肝硬化。目前肝硬化病情評(píng)估方法主要有影像學(xué)檢查(CT、B超),無創(chuàng)方便,但肝硬化早期漏診率高;肝穿刺活檢有創(chuàng)侵入,患者依從性差;Child-Pugh評(píng)分操作步驟繁瑣,費(fèi)時(shí)費(fèi)力[1]。因此,發(fā)現(xiàn)一種與疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物十分重要。同型半胱氨酸(Hcy)可能與還原型谷胱甘肽的合成與功能密切相關(guān),李洪宇等[2]認(rèn)為血清Hcy與肝纖維化具有相關(guān)性。血清鐵蛋白(SF)對(duì)體內(nèi)鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)、貯存以及鐵代謝調(diào)節(jié)有著重要的作用[3],肝臟作為儲(chǔ)存鐵的主要器官而成為鐵過多所致?lián)p的主要靶器官。B7-H3蛋白通過免疫介導(dǎo)反應(yīng)造成肝細(xì)胞的損傷過程[4-6]。白細(xì)胞介素-18(IL-18)是機(jī)體內(nèi)一種非常重要的前炎性細(xì)胞因子,能增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用,誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖、分化和成熟,促進(jìn)肝細(xì)胞的免疫損傷反應(yīng)[7]。本研究比較慢性乙型肝炎及不同Child-Pugh分級(jí)的肝硬化患者,Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平之間的差異,探討其聯(lián)合檢測(cè)與疾病進(jìn)展之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2018年7月～2019年6月同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院膠州醫(yī)院診治的乙肝肝硬化患者164例為試驗(yàn)組,男91例,女73例;年齡30～71歲,平均(52.26±16.57)歲,本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。分組:根據(jù)Child-Pugh評(píng)分[8]分為A、B、C三組:評(píng)分在5～6分患者為A組(肝硬化代償期,55例);評(píng)分在7～9分患者為B組(肝硬化失代償期,63例);評(píng)分在10～15分患者為C組(嚴(yán)重肝硬化,46例)。納入標(biāo)準(zhǔn):按照2015版《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷的患者[9]。排除標(biāo)準(zhǔn):①腫瘤病史;② 3個(gè)月內(nèi)有輸血史;③ 6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)劑治療;④合并糖尿病、高血壓、心腦血管等疾病;⑤合并其他肝炎病毒及EB病毒、HIV病毒感染者;⑥妊娠或哺乳期婦女。抽取乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的健康人群60例為對(duì)照組,年齡和性別與試驗(yàn)組相似,男34例,女26例;年齡33～74歲,平均(54.36±15.08)歲。

1.2實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法:采集受試者晨起外周靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min,分離血清,檢測(cè)Hcy、SF、B7-H3、IL-18指標(biāo)。Hcy、SF檢測(cè)儀器為:全自動(dòng)生化分析儀 AU5800(北京萬泰),檢測(cè)方法分別為速率法(下降)與終點(diǎn)法(上升);B7-H3、IL-18檢測(cè)儀器為:全自動(dòng)酶標(biāo)儀 CLIA400(上海晶美),檢測(cè)方法均為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS25.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間對(duì)比采用方差分析,相關(guān)性采用 Spearman 法進(jìn)行相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1兩組血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平比較:研究結(jié)果顯示兩組血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平不完全相同,試驗(yàn)組(A組、B組、C組)與對(duì)照組相比,血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與A組相比,B組和C組顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),C組較B組顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示隨著肝硬化Child-Pugh A、B、C分級(jí)的升高,血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平逐漸升高。見表1。

表1 兩組血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平比較

2.2肝硬化患者血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平與Child-Pugh評(píng)分相關(guān)性分析:結(jié)果顯示血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平與Child-Pugh評(píng)分存在直線相關(guān)關(guān)系,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平與Child-Pugh評(píng)分的呈正相關(guān)。見表2。

表2 肝硬化患者血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平聯(lián)合檢測(cè)與Child-Pugh評(píng)分相關(guān)性分析

3 討論

由乙型肝炎造成肝臟損傷,由此發(fā)展造成的肝纖維化、肝硬化、肝癌是目前肝癌發(fā)展的較為認(rèn)可一種病理生理過程,肝硬化是肝纖維化的晚期和極端嚴(yán)重化的狀態(tài)[9]。肝硬化患者體內(nèi)血清Hcy和SF水平較高,這可能與肝臟纖維化引起的肝功能損傷有關(guān),隨著肝臟儲(chǔ)備功能越差,對(duì)血清Hcy的調(diào)節(jié)代謝能力就越差[10]。

研究表明SF可以作為炎性反應(yīng)的一種協(xié)同因子,主要儲(chǔ)存在肝臟之中,當(dāng)由于炎性反應(yīng)導(dǎo)致的肝細(xì)胞壞死時(shí),從而引發(fā)SF的合成量增加。隨著慢性乙型肝炎的進(jìn)一步加重,可以發(fā)展為肝硬化,肝臟細(xì)胞的壞死和損傷也進(jìn)一步加劇,一方面加速了SF的釋放,另一方面由于肝功能受到破壞對(duì)于SF的代謝清除能力減弱,兩方面相互作用可能是導(dǎo)致SF水平升高的原因[11]。與李雪梅等[12-13]研究報(bào)道相一致。血清Hcy和SF診斷肝硬化的靈敏度較好,但缺乏特異性。

有研究表明,乙型肝炎病毒本身并不直接引起肝細(xì)胞病變,主要是人體的免疫系統(tǒng)反應(yīng)而造成肝細(xì)胞的破壞[4]。B7 屬于是一種協(xié)同刺激分析的免疫球蛋白超家族,B7-H3是B7家族的一個(gè)重要組成成員,在病毒感染、腫瘤及免疫性疾病中發(fā)揮免疫負(fù)性調(diào)節(jié)作用。可以對(duì)CD8+T起到增殖刺激作用[15-17],促進(jìn)腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-8 以及干擾素-γ的分泌。近年來研究發(fā)現(xiàn),B7-H3 在肝癌、食管癌、腸癌等多種腫瘤呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),其表達(dá)水平與疾病的發(fā)展和預(yù)后存在相關(guān)性[4,18-21]。肝硬化患者中B7-H3的表達(dá)水平與患者的預(yù)后和發(fā)展是否存在相關(guān)性,通過研究發(fā)現(xiàn)隨著肝硬化Child-Pugh A、B、C分級(jí)的升高 B7-H3 的水平逐漸增高,一定程度上反映水平的升高與肝硬化的進(jìn)展及預(yù)后存在一定的相關(guān)性。

IL-18是作為一種新型促炎細(xì)胞因子,可以介導(dǎo)先天性和獲得性免疫,刺激T細(xì)胞增殖,增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的毒性[22-23]。有研究表明Th1與Th2細(xì)胞的數(shù)量關(guān)系失調(diào)是乙型肝炎病毒感染慢性化的機(jī)制之一,而IL-18誘導(dǎo) Th1 類細(xì)胞產(chǎn)生誘生人干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子,造成Th1表達(dá)升高,打破了原有Th1/Th2細(xì)胞平衡[4,24]。此外在慢性乙型肝炎中,AIM2通過Caspase-1途徑激活,促進(jìn)了IL-1β、IL-18炎性因子的釋放,其可能解釋IL-18表達(dá)水平的上升[25-28]。

本研究提示,血清Hcy、SF、B7-H3和IL-18水平從一定程度上可以反映患者肝硬化程度,結(jié)合以往研究提示臨床工作中可以將其作為判斷乙肝肝硬化患者病情和監(jiān)測(cè)預(yù)后的參考指標(biāo)。但因本研究僅對(duì)臨床檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)做了檢測(cè),沒有對(duì)影像及病理學(xué)全面檢測(cè),此外本次檢測(cè)的血清學(xué)指標(biāo)在疾病發(fā)展過程中的作用機(jī)制尚不完全明確,還需要更多研究去進(jìn)一步驗(yàn)證。