許文靜 高冬梅 李慧心 王莉 佟勝全

摘要：目的 探究類風濕關節(jié)炎（RA）患者血清脂肪因子趨化素水平與疾病活動度和輔助性T細胞17/調(diào)節(jié)性T細胞（Th17/Treg）比值的相關性。方法 納入RA患者180例為觀察組，根據(jù)DAS28評分將觀察組分為高活動組、中活動組和低活動組，每組60例；另選取同期體檢的健康者180例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清趨化素、白細胞介素（IL）-9、IL-10、IL-17水平；流式細胞術檢測Th17/Treg比例；分析RA患者血清趨化素水平與DAS28評分，Th17、Treg細胞百分比及Th17/Treg比值的相關性。結(jié)果 觀察組血清趨化素水平高于對照組（P＜0.05）。RA患者血清趨化素水平與DAS28評分呈正相關；高、中、低活動組血清趨化素水平和DAS28評分依次降低；觀察組Th17細胞百分比、Th17/Treg比值、IL-17、IL-9水平高于對照組，Treg細胞百分比、IL-10水平低于對照組（P＜0.05）。RA患者血清趨化素水平與Th17細胞百分比、Th17/Treg比值呈正相關，與Treg細胞百分比呈負相關（P＜0.05）。結(jié)論 RA患者的血清趨化素水平升高，與疾病活動度和Th17/Treg比值具有密切關系。

關鍵詞：關節(jié)炎，類風濕；趨化因子類；Th17細胞；T淋巴細胞，調(diào)節(jié)性；白細胞介素類；疾病活動度

中圖分類號：R593.22文獻標志碼：ADOI：10.11958/20230505

Correlation analysis of serum Chemerin with disease activity and Th17/Treg in?patients with rheumatoid arthritis

Abstract： Objective To explore the correlation of serum Chemerin level with disease activity and the ratio of T helper 17/regulatory T cells （Th17/Treg） in patients with rheumatoid arthritis （RA）. Methods A total of 180 patients with RA who were admitted to our hospital were regarded as the observation group. According to the DAS28 score， the observation group was divided into the high activity group （60 cases）， the moderate activity group （60 cases） and the low activity group （60 cases）. Another 180 healthy people who underwent physical examination in our hospital during the same period were regarded as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect serum levels of Chemerin， interleukin-9 （IL-9）， interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17）. Flow cytometry was used to detect the Th17/Treg ratio. Spearman correlation analysis was applied to analyze the correlation between serum Chemerin level and DAS28 score. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between serum Chemerin level and Th17， Treg cell percentage and Th17/Treg ratio. Results The results of this study showed that the serum level of Chemerin was higher in the observation group than that in the control group （P＜0.05）. The serum Chemerin level was positively correlated with DAS28 score （P＜0.05）. Serum Chemerin levels and DAS28 scores decreased in turn in the high， moderate and low activity groups （P＜0.05）. The percentage of Th17 cells and the ratio of Th17/Treg were higher in the observation group than those in the control group， and the percentage of Treg cells was lower in the observation group than that in the control group （P＜0.05）. The level of IL-10 was lower in the observation group than that in the control group， while levels of IL-17 and IL-9 were higher in the observation group than those in the control group （P＜0.05）. The results of Pearson correlation analysis showed that serum Chemerin level was positively correlated with the percentage of Th17 cells and the ratio of Th17/Treg， and negatively correlated with the percentage of Treg cells （P＜0.05）. Conclusion Serum Chemerin level is elevated in patients with RA， which is closely related to disease activity and Th17/Treg ratio.

Key words： arthritis， rheumatoid; chemotactic factors; Th17 cells; T-lymphocytes， regulatory; interleukins; disease activity

類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一類常見的自身免疫類疾病，發(fā)病率、致殘率高［1］。RA主要表現(xiàn)為慢性關節(jié)炎癥，病情持續(xù)、反復，可導致關節(jié)破壞、功能喪失，并伴有并發(fā)癥，嚴重影響患者生活和健康［2-3］。趨化素（Chemerin）是一種脂肪細胞因子，參與人體內(nèi)多種反應的調(diào)節(jié)，如調(diào)節(jié)脂肪、血管生成，糖脂、能量代謝，炎癥、免疫反應等［4］。有研究表明，趨化素在RA患者外周血、炎癥關節(jié)滑液中水平明顯升高，刺激炎癥及組織損傷，參與關節(jié)及骨破壞等［5］。輔助性T細胞17/調(diào)節(jié)性T細胞（Th17/Treg）平衡失調(diào)與RA的發(fā)生發(fā)展密切相關。Th17具有促炎作用，而Treg具有調(diào)節(jié)免疫、抑制炎癥發(fā)生的功能，二者共同維持免疫平衡［6］。白細胞介素（IL）-9、IL-10及IL-17等炎性因子通過調(diào)節(jié)炎癥反應，參與RA的進程［7］。目前關于血清趨化素水平對RA患者的疾病活動度和Th17/Treg比值影響的研究較少。本研究通過檢測RA患者血清趨化素水平，探究其與患者疾病活動度和Th17/Treg比值的相關性，為RA的治療提供新的研究方向。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019年5月—2021年5月唐山市工人醫(yī)院收治的RA患者180例為觀察組，男96例，女84例，年齡47～70歲，平均（59.20±7.14）歲；根據(jù)28處關節(jié)疾病活動評分（DAS28），將觀察組分為高活動組（DAS28＞5.1分）、中活動組（3.2分＜DAS28≤5.1分）、低活動組（2.6分＜DAS28≤3.2分），每組60例。納入標準：（1）符合RA診斷標準［8］。（2）18歲≤年齡≤75歲。排除標準：（1）妊娠期、哺乳期婦女。（2）合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他自身免疫性疾病。（3）患有腫瘤、感染性疾病、高血壓、高膽固醇血癥。（4）患有精神障礙等精神疾病。另選取同期在本院體檢的健康者180例作為對照組，男89例，女91例，年齡49～70歲，平均（60.25±6.85）歲。觀察組和對照組性別（χ2=0.545）、年齡（t=1.424）比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）?；颊邔Ρ狙芯恐橥馇液炇鹬橥鈺?，本研究通過本院倫理委員會批準（倫理號：GRYY-LL-KJ2022-110）。

1.2 主要試劑和儀器 趨化素酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒購自上?；钌锟萍加邢薰?，IL-17、IL-9、IL-10 ELISA試劑盒均購自北京雅安達生物技術有限公司，Space流式細胞儀購自廣州吉源生物科技有限公司，RPMI-1640培養(yǎng)基購自上海谷研實業(yè)有限公司，佛波酯（PMA）購自北京孚博生物科技有限公司，布雷非德菌素（BFA）購自上海莼試生物科技有限公司，鼠抗人CD4購自南通表源生物技術有限公司，鼠抗人CD25購自蘇州亞科科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 臨床資料收集 收集患者入院時臨床資料，包括C反應蛋白（CRP）、紅細胞沉降率（ESR）、類風濕因子、抗環(huán)瓜氨酸肽（抗-CCP）抗體，以及補體C3、C4等。

1.3.2 血液樣本采集 分別抽取觀察組檢查日清晨和對照組體檢當天的空腹靜脈血5 mL，靜置30 min，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取血清樣本，置于-80 ℃保存待測。

1.3.3 ELISA法檢測趨化素、IL-17、IL-9、IL-10水平 采用ELISA法檢測血清趨化素、IL-17、IL-9、IL-10水平，操作步驟嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行。

1.3.4 流式細胞術測定Th17細胞、Treg細胞百分比 使用密度梯度離心法分離外周血單核細胞，加入RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋，然后加入PMA、BFA，置于CO2培養(yǎng)箱孵育。分別孵育抗人CD4、CD25抗體后檢測Th17細胞和Treg細胞百分比；使用磷酸鹽緩沖液（PBS）反復洗滌后放入流式細胞儀進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 25.0進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以[x] ±s表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用SNK-q檢驗；非正態(tài)資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗；計數(shù)資料用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；RA患者血清趨化素與DAS28評分的相關性采用Spearman相關，血清趨化素與Th17、Treg細胞百分比、Th17/Treg比值的相關性分析采用Pearson相關。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 2組受試者補體C3、C4水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；觀察組CRP、ESR、類風濕因子、抗-CCP抗體、趨化素水平高于對照組（P＜0.01），見表1。

2.2 RA患者各活動組間趨化素水平比較及與DAS28的相關性分析 高、中、低活動組血清趨化素水平和DAS28評分依次降低（P＜0.05），見表2。相關性分析顯示，RA患者血清趨化素與DAS28評分呈正相關（rs=0.623，P＜0.01）。

2.3 2組Th17、Treg、Th17/Treg及相關細胞因子水平比較 觀察組的Th17細胞百分比，Th17/Treg比值，IL-17、IL-9水平高于對照組；Treg細胞百分比、IL-10水平低于對照組（P＜0.05），見表3。

2.4 RA患者血清趨化素水平與Th17、Treg細胞百分比以及Th17/Treg比值相關性 RA患者血清趨化素水平與Th17細胞百分比呈正相關，與Treg細胞百分比呈負相關，與Th17/Treg比值呈正相關（r分別為0.638、-0.435、0.552，P＜0.01）。

3 討論

3.1 RA研究現(xiàn)狀 RA是一種慢性自身免疫性疾病，其臨床特征主要為關節(jié)軟骨或骨破壞、滑膜增生、關節(jié)滑膜炎等，有可能導致關節(jié)畸形甚至殘疾，影響患者生活質(zhì)量［9］。RA發(fā)病率、致殘率高，隨著診治條件、技術等日趨完善，其致死率逐步降低，但RA的致死率仍顯著高于自然人群［10］。目前，RA發(fā)病機制尚不十分明確，有研究顯示RA與遺傳、環(huán)境、感染等因素有關，有可能因感染病毒等發(fā)病，也可能由精神刺激、吸煙、過度疲勞等因素刺激而發(fā)?。?1］。RA患者疾病活動度可根據(jù)DAS28評分判斷，隨著疾病活動度的發(fā)展，患者通常伴隨類風濕因子、ESR等與炎癥相關的指標升高，但具體何種因素導致疾病活動度的變化仍不清楚［12］。

3.2 趨化素在RA中的變化趨勢 脂肪因子由脂肪組織分泌，參與RA的發(fā)生發(fā)展，具有調(diào)節(jié)滑膜、軟骨、骨和各種免疫細胞的功能［13］。有研究顯示，脂肪因子的過表達會破壞軟骨，對RA的發(fā)生發(fā)展具有促進作用［14］。趨化素是一種促炎脂肪因子，其在慢性炎癥疾病患者血清中表達水平升高，與炎癥標志物呈正相關［15］。李奇等［16］研究表明，趨化素促進了上皮性卵巢癌細胞的增殖、遷移。劉梅娟等［4］研究表明，RA患者血清中趨化素表達升高，促進RA炎癥反應并參與RA的發(fā)生發(fā)展過程。

3.3 DAS28與趨化素水平及Th17細胞的相關性 DAS28被廣泛應用于RA患者疾病活動度的綜合評價，包括關節(jié)觸痛、腫脹計數(shù)、ESR等［17］。DAS28包括五大類，分別為血沉或C反應蛋白的水平、腫脹關節(jié)數(shù)、壓痛的關節(jié)數(shù)以及患者對病情的總體評估，疾病活動度隨著分值升高而升高［12］。Th17與Treg屬于CD4+ T細胞亞群，二者相互拮抗，共同維持機體正常免疫功能，Th17/Treg失衡介導了包括RA等多種疾病的發(fā)生［18］。有研究表明，在RA患者中Th17細胞數(shù)量增加，Treg細胞數(shù)量減少，即Th17/Treg失衡與RA的發(fā)生發(fā)展密切相關［19］。劉潔等［19］研究表明，Th17/Treg失衡參與急性腦梗死的發(fā)展過程。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清趨化素水平高于對照組，提示趨化素參與了RA的發(fā)生發(fā)展過程?；颊哐遐吇厮脚cDAS28評分呈正相關；隨著患者疾病活動度增強，血清趨化素水平與DAS28評分增大，提示血清趨化素水平與RA患者疾病活動度密切相關，血清趨化素水平可作為監(jiān)測患者疾病活動度的潛在指標。觀察組患者Th17細胞百分比、Th17/Treg比值及IL-17、IL-9水平高于對照組，而Treg細胞百分比、IL-10水平低于對照組，提示Th17/Treg與RA的發(fā)生發(fā)展密切相關。相關性分析提示RA中血清趨化素與Th17/Treg密切相關。

綜上所述，RA患者血清趨化素水平升高，與患者疾病活動度、Th17/Treg密切相關，臨床可通過血清趨化素水平了解患者疾病活動度和Th17/Treg。但本研究樣本量較小，且未深入研究血清趨化素影響患者疾病活動度、Th17/Treg的機制，后續(xù)需深入研究其相互作用的機制。

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