饒 慧,蔣盛芝,樊諭蓓,周雨晴,張麗華 （湖南師范大學附屬第一醫(yī)院風濕免疫科，湖南 長沙 410001）

類風濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）是以關(guān)節(jié)滑囊組織增生及炎癥細胞浸潤為特征的自身免疫性疾病，常累及肩關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)等，可破壞關(guān)節(jié)滑膜、軟骨、關(guān)節(jié)囊甚至骨質(zhì)，早期以關(guān)節(jié)腫脹、疼痛為主要臨床表現(xiàn)[1]，病情進展后期可出現(xiàn)嚴重骨量流失及骨質(zhì)破壞等，從而引起關(guān)節(jié)畸形及功能性障礙，若不及時治療可影響關(guān)節(jié)功能甚至致殘，對患者身心健康造成嚴重影響[2]。近年來，研究顯示，miRNAs 在RA 患者機體內(nèi)關(guān)節(jié)滑液、組織滑膜細胞及外周血中表達異常，并通過靶向不同細胞調(diào)節(jié)多個生物過程參與RA 的發(fā)生發(fā)展，可作為RA 的一種新的、有前景的生物標志物[3-4]。有學者提出，miR-410-3p 間接參與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展，有效調(diào)控間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化[5]，但是miR-410-3p 與RA 患者膝關(guān)節(jié)軟組織病變的關(guān)系還需進一步分析。鑒于此，本研究檢測RA 患者中miR-410-3p 的表達水平并分析其與膝關(guān)節(jié)軟組織病變的關(guān)系，以期為RA 患者的臨床治療和預后改善提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018 年1 月至2021 年10 月我院收治的RA患者89 例為RA 組，依據(jù)28 個關(guān)節(jié)疾病活動度評分[6]（disease activity score in 28 joints,DAS28）將其分為活動組（42 例）和緩解組（47 例）?；顒咏M男18 例、女24 例，平均年齡（52.13±4.15）歲，平均BMI（23.21±2.33）kg/m2；緩解組男25 例、女22 例，平均年齡（52.57±4.38）歲，平均BMI（22.98±2.46）kg/m2。另選取同期體檢健康志愿者52 例為健康組，其中男29 例、女23 例，平均年齡（51.97±3.78）歲，平均BMI（23.64±2.41）kg/m2。納入標準：RA 組患者均符合《2018 中國類風濕關(guān)節(jié)炎診療指南》[7]中RA 的診斷標準；健康組均為體檢健康志愿者。排除標準：合并惡性腫瘤；伴有全身組織感染疾?。惶幱谌焉锲诨虿溉槠?；伴心、肝、腎功能嚴重障礙；高脂血癥、高血壓、糖尿病、血液系統(tǒng)疾病、銀屑病及其他代謝異常。各組患者性別、年齡和BMI 比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準（201712-004），所有受試者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-410-3p 表達檢測 采集RA 組患者門診或入院24 h 內(nèi)、健康組志愿者體檢當日空腹靜脈血5 mL，以3 500 r/min離心15 min，分離血清并轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，-80 ℃冷凍保存?zhèn)溆?。采用RT-PCR法檢測miR-410-3p表達水平。

1.2.2 膝關(guān)節(jié)軟組織病變超聲檢查 采用IS33 型彩色多普勒超聲顯像儀（探頭頻率為7.5～10.0 MHz），受試者平躺，暴露下肢，探頭置于髕上正中橫切面，屈膝90°～135°，觀察患者關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)、厚度及軟骨下骨質(zhì)變化；在患者屈膝至135°時，觀察股骨髁軟骨厚度及回聲改變；在屈膝30°～45°時，觀察骨膜的厚度、形態(tài)及髕上囊積液情況，若存在積液，探頭加壓推開積液后，測量髕上囊滑膜厚度[8]。所有操作均由同1位影像科專業(yè)醫(yī)生完成。

1.3 觀察指標

比較各組患者血清miR-410-3p 水平、髕上囊液體深度、滑膜厚度、股骨內(nèi)側(cè)踝軟骨厚度、股骨外側(cè)踝軟骨厚度。分析RA 患者血清miR-410-3p 水平與膝關(guān)節(jié)軟組織病變的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件進行分析。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（）表示，采用t檢驗；計數(shù)數(shù)據(jù)以率（%）表示，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗，采用Pearson法進行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miR-410-3p水平及超聲檢測結(jié)果對比

各組患者血清miR-410-3p 表達水平差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），活動組和緩解組患者血清miR-410-3p 表達水平均低于健康組（P＜0.05），活動組患者血清miR-410-3p 表達水平低于緩解組（P＜0.05）。各組患者髕上囊液體深度、滑膜厚度、股骨內(nèi)側(cè)踝軟骨厚度和股骨外側(cè)踝軟骨厚度比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；活動組、緩解組患者髕上囊液體深度和滑膜厚度均大于健康組（P＜0.05），且活動組患者上述指標大于緩解組（P＜0.05）；活動組、緩解組患者股骨內(nèi)、外側(cè)踝軟骨厚度均小于健康組（P＜0.05），且活動組患者上述指標小于緩解組（P＜0.05），見表1。

表1 血清miR-410-3p水平及超聲檢測結(jié)果比較（）

表1 血清miR-410-3p水平及超聲檢測結(jié)果比較（）

*：與健康組相比，P＜0.05；#：與緩解組相比，P＜0.05

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2.2 RA 患者血清miR-410-3p 表達水平與膝關(guān)節(jié)軟組織病變的相關(guān)性分析

活動組、緩解組患者血清miR-410-3p 表達水平與髕上囊液體深度和滑膜厚度呈正相關(guān)（P＜0.05），與股骨內(nèi)、外側(cè)踝軟骨厚度呈負相關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 RA 患者血清miR-410-3p 表達水平與膝關(guān)節(jié)軟組織病變的相關(guān)性分析

3 討論

RA 是一種以系統(tǒng)性炎癥為主要特征的慢性風濕性疾病，發(fā)病率約為5/1 000[9]。膝關(guān)節(jié)是重要的承重關(guān)節(jié)，也是RA 常累及的關(guān)節(jié)，持續(xù)性炎癥可造成關(guān)節(jié)及周圍軟組織不可逆的進行性損傷，甚至導致關(guān)節(jié)畸形、硬化，影響肢體功能[10]。研究顯示，miR-410-3p 在膿毒癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等炎癥性、免疫性疾病中發(fā)揮重要作用[11-12]，但miR-410-3p 在RA 中的表達及其與膝關(guān)節(jié)軟組織病變的關(guān)系目前尚無定論。

本研究結(jié)果顯示，活動組和緩解組患者miR-410-3p水平均低于健康組，且活動組低于緩解組，提示RA 患者血清miR-410-3p 表達水平明顯下降，其低表達可能與RA 病情變化有一定關(guān)聯(lián)。miR-410-3p 定位于人染色體14q32.31，其在多種疾病和癌癥中表達異常[13-14]。miR-410-3p 可通過靶向下游轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控滑膜成纖維細胞分泌，進而調(diào)控炎癥微環(huán)境，通過分泌多種促炎細胞因子及趨化因子活化免疫細胞至損傷滑膜，參與RA 的發(fā)生發(fā)展[15]。Wang等[16]研究顯示，miR-410-3p在RA 患者的滑膜組織和滑膜成纖維細胞中表達下調(diào)，證實了miR-410-3p與RA的發(fā)生有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，緩解組、活動組患者髕上囊液體深度和滑膜厚度均大于健康組，且活動組患者上述指標均大于緩解組；緩解組、活動組患者股骨內(nèi)、外側(cè)踝軟骨厚度均小于健康組，且活動組患者上述指標均小于緩解組，提示RA 患者膝關(guān)節(jié)發(fā)生軟組織病變，且與病情嚴重程度有關(guān)。本研究相關(guān)性分析顯示，RA患者miR-410-3p 水平與髕上囊液體深度和滑膜厚度呈正相關(guān)，與股骨內(nèi)、外側(cè)踝軟骨厚度呈負相關(guān)，說明RA 患者中miR-410-3p 表達水平與膝關(guān)節(jié)軟組織病變存在一定相關(guān)性。研究認為，NF-κB 信號通路依賴性基因表達的激活在RA 的發(fā)展中發(fā)揮重要作用，其可調(diào)控關(guān)節(jié)損傷及周圍軟組織下游靶基因TNF-α、IL-1β等炎癥因子表達，導致關(guān)節(jié)軟組織發(fā)生不可逆性病變。還有研究發(fā)現(xiàn)，miR-410-3p 水平與NF-κB 信號通路有一定關(guān)聯(lián)，在體外培養(yǎng)的RA 滑膜成纖維細胞中，miR-410-3p 可通過抑制IKB-α 的磷酸化抑制p65 蛋白磷酸化，從而抑制NF-κB 信號通路的活化，減少炎癥因子分泌和炎癥刺激，進而延緩關(guān)節(jié)軟組織的病變[17-18]。此外，miR-410-3p 還能與下游靶基因轉(zhuǎn)錄因子YY1 相互作用，通過靶向轉(zhuǎn)錄因子YY1 不僅可以抑制細胞因子和趨化因子的釋放，減輕關(guān)節(jié)慢性炎癥，還能抑制RA 滑膜成纖維細胞的增殖，促進其凋亡，進而減少軟骨、滑膜增生[16,19]。

綜上，RA 患者血清miR-410-3p 表達水平降低，且與膝關(guān)節(jié)軟組織病變密切相關(guān)，血清miR-410-3p 水平檢測可為膝關(guān)節(jié)軟組織病變的評估提供依據(jù)。