黃麗芳,宋建華,韋翠容,林子芹,楊達(dá)平,粟連秀

(貴港市人民醫(yī)院病理科,廣西 貴港 537100)

原發(fā)性肝癌是臨床常見的惡性腫瘤之一,其中又以原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)生率最高,其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜、預(yù)后效果差、易反復(fù)發(fā)作及轉(zhuǎn)移。干擾素刺激基因15(ISG15)蛋白是最早被鑒定出來(lái)的泛素樣蛋白(UBL)[1],其是ISG15編碼的小分子蛋白質(zhì),經(jīng)Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)后強(qiáng)表達(dá)。ISG15蛋白與細(xì)胞底物結(jié)合形成的蛋白復(fù)合物顯示出抗病毒和抗菌活性,能夠在免疫功能中發(fā)揮出重要的作用[2-3]。研究發(fā)現(xiàn),ISG15蛋白在多種腫瘤組織中均存在高表達(dá)[4-5],且ISG15蛋白高表達(dá)與腫瘤預(yù)后不良相關(guān),但其與HCC的相關(guān)性研究較少見。本研究探討了ISG15蛋白在HCC中的表達(dá)情況及其與臨床預(yù)后的相關(guān)性,旨在給HCC治療新靶點(diǎn)及預(yù)后判斷帶來(lái)新選擇。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2020年10月本院經(jīng)術(shù)后病理確診的HCC患者100例,其中男女比例為9∶1,年齡29～75歲,平均(50.7±11.9)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均未接受靶向治療和免疫治療等相關(guān)的抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：HCC合并其他腫瘤。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(GYYXLL-20210618-08)。

1.2方法 病理診斷由2位病理醫(yī)生分開閱片,收集患者基本信息及相關(guān)臨床資料,如腫物(含癌組織和癌旁組織)大小、甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)-DNA拷貝數(shù)、分化程度等。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ISG15蛋白在癌組織和癌旁組織中表達(dá)水平,陽(yáng)性對(duì)照采用說明書推薦的結(jié)直腸癌石蠟組織標(biāo)本,陰性對(duì)照采用磷酸鹽緩沖液代替一抗。參考Axiotis評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),整體細(xì)胞陽(yáng)性程度：淡染或無(wú)染色記0分,一般黃染記1分,中等強(qiáng)度黃染記2分,棕黃色或棕褐色記3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占比依次為小于或等于10%、>10%～25%、>25%～50%、>50%～75%、>75%,分別記為0、1、2、3、4分。將2項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加作為最終得分,其中5～7、3～4、1～2、0分依次定義為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)、陽(yáng)性(2+)、弱陽(yáng)性(+)、陰性(-)。門診或電話進(jìn)行隨訪,對(duì)術(shù)后3年患者進(jìn)行生存分析。

2 結(jié) 果

2.1癌組織和癌旁組織中ISG15蛋白表達(dá)水平比較 癌組織及癌旁組織中ISG15蛋白表達(dá)水平分別為(5.00±1.69)、(3.78±1.22),二者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.766,P<0.001)。病理圖見圖1。

注：ISG15蛋白表達(dá)定位在肝細(xì)胞的胞漿和胞核,在癌旁組織中呈陰性表達(dá)(A),在癌旁組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá)(B),在癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)(C),在癌組織中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(D、E)。

2.2不同臨床特征患者ISG15蛋白表達(dá)水平比較 不同腫物大小、HBV-DNA拷貝數(shù)及分化程度患者ISG15蛋白表達(dá)水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床特征患者ISG15蛋白表達(dá)水平比較(n,n=100)

2.3不同ISG15蛋白表達(dá)水平患者生存期分析 術(shù)后3年隨訪70例患者,其中存活27例、死亡38例、失聯(lián)5例?？偵嫫跒?.0～61.0個(gè)月,中位生存期為38.0個(gè)月。癌組織中,ISG15蛋白表達(dá)中位數(shù)值為5.5(<5.5為低表達(dá)組,>5.5為高表達(dá)組)。低表達(dá)組(24例)中位生存期為40.5個(gè)月,生存率為70.83%,高表達(dá)組(41例)中位生存期為33.0個(gè)月,生存率為24.39%。2組生存率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.980,P=0.001 6)。見圖2。

圖2 總生存期分析

3 討 論

HCC是常見癌癥之一,其中超過90%的患者感染了HBV[6]。目前,HCC仍以手術(shù)治療為主,但術(shù)后復(fù)發(fā)率高、預(yù)后較差,放療、化療效果有限且有不良反應(yīng)。因此,研究新型有效藥物對(duì)HCC的治療具有重要意義。ISG15是干擾素刺激基因家族成員之一,其編碼的小分子蛋白是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵效應(yīng)分子。在生理?xiàng)l件下,成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和漿細(xì)胞均可分泌少量ISG15蛋白。ISG15蛋白由2個(gè)泛素樣小亞基通過特殊折疊鏈接形成,其發(fā)揮生物學(xué)功能需要從無(wú)活性的蛋白前體變成有活性的成熟蛋白體。ISG15蛋白由Ⅰ型干擾素和脂多糖誘導(dǎo),對(duì)多種病毒具有直接或間接抗病毒活性,主要通過抑制病毒核酸復(fù)制、影響病毒蛋白修飾和加工及釋放而發(fā)揮抗病毒作用。在免疫調(diào)節(jié)活動(dòng)中也發(fā)揮多種作用,包括誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞增殖和樹突狀細(xì)胞成熟,觸發(fā)T細(xì)胞反應(yīng),增強(qiáng)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞活性,趨化中性粒細(xì)胞[7]。另外,ISG15蛋白可通過刺激γ-干擾素發(fā)揮抗腫瘤作用及對(duì)某些蛋白共價(jià)修飾表現(xiàn)出促癌作用[8]。ISG15蛋白以游離形式和(或)與其他蛋白質(zhì)結(jié)合的形式存在,ISG15蛋白修飾(ISGylation)通過酶級(jí)聯(lián)發(fā)生,ISG15蛋白可通過修飾作用進(jìn)而調(diào)節(jié)致病蛋白和宿主蛋白的功能,并影響下游信號(hào)通路。

本研究結(jié)果顯示,HCC癌組織中ISG15蛋白表達(dá)水平顯著高于癌旁組織,與LI等[5]研究結(jié)果一致。提示ISG15蛋白與HCC的發(fā)生和發(fā)展具有相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示,ISG15蛋白在低分化、腫物小于3 cm、HBV-DNA拷貝數(shù)小于100 IU/mL的肝癌組織中高表達(dá)。提示ISG15蛋白在抵抗腫瘤細(xì)胞分化、增殖、抑制HBV病毒復(fù)制過程中存在一定作用。CHEN等[9]研究表明,HCC組織中ISG15 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增加,且ISG15表達(dá)與腫物大小、分化程度呈正相關(guān),ISG15在高分化、大腫物中高表達(dá)。提示ISG15的過表達(dá)具有促癌作用,與本研究結(jié)果恰好相反,其原因可能是樣本量不同,本研究納入了100例患者,而CHEN等[9]研究?jī)H納入37例患者。另一個(gè)原因可能是病例間的個(gè)體差異,本研究中的病例主要以大腫物(≥3 cm)(73/100)、中高分化(69/100)為主,與CHEN等[9]研究有較大差異。

本研究結(jié)果顯示,低表達(dá)組生存率(70.83%)顯著高于高表達(dá)組(24.39%),與QIU等[10]研究結(jié)果一致。提示ISG15蛋白高表達(dá)可能是預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因素,并可預(yù)測(cè)預(yù)后。QIU等[10]研究結(jié)果顯示,高水平的ISG15蛋白表達(dá)與肝癌患者手術(shù)切除后的不良預(yù)后顯著相關(guān),當(dāng)ISG15蛋白表達(dá)較高時(shí),患者生存時(shí)間較短。ZHOU等[11]研究發(fā)現(xiàn),ISG15蛋白在結(jié)腸癌組織中高表達(dá),其與患者預(yù)后不良密切相關(guān),增強(qiáng)ISG15蛋白表達(dá)可促進(jìn)體外結(jié)腸癌細(xì)胞株的遷移和增殖,而ISG15蛋白低表達(dá)則可減少細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。YAN等[12]通過比較大樣本膀胱癌組織和正常組織中候選基因的表達(dá)情況,并利用多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行生物信息分析篩選出膀胱癌組織中高表達(dá)基因,其中就包括ISG15,結(jié)果顯示,ISG15與膀胱癌的進(jìn)展和不良預(yù)后相關(guān)。CHEN等[13]研究顯示,ISG15蛋白在鼻咽癌中表達(dá)上調(diào),并與腫瘤復(fù)發(fā)和不良預(yù)后存在相關(guān)性,ISG15蛋白高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞能增強(qiáng)癌癥干細(xì)胞(CSC)特征和放化療耐藥性。CSC被認(rèn)為能決定腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,在腫瘤形成過程中起重要作用。TONG等[7]研究發(fā)現(xiàn),ISG15修飾酶基因EFP、HERC5、UBA1和USP18在HCC癌組織中的表達(dá)顯著增高,其與HCC的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。HERC5是ISGylation的主要E3連接酶,其在HCC組織中高表達(dá),有助于HCC的免疫逃逸,可能是肝移植后HCC復(fù)發(fā)的預(yù)后標(biāo)志物[14]。USP18是針對(duì)HBV復(fù)制的免疫應(yīng)答中的一個(gè)重要因素,其通過與S期激酶相關(guān)蛋白2相互作用影響細(xì)胞周期進(jìn)程及激活信號(hào)通路,在抑制HBV復(fù)制中發(fā)揮重要作用[15]。

綜上所述,ISG15蛋白在HCC癌組織中高表達(dá),其在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抵抗HBV病毒復(fù)制、抑制癌細(xì)胞分化過程中具有相關(guān)作用。ISG15蛋白表達(dá)與臨床預(yù)后相關(guān),低表達(dá)者生存期更長(zhǎng)。因此,研究抑制ISG15蛋白表達(dá)的藥物,有望給HCC治療帶來(lái)新方向。