牛慶玲 張 芳 周 穎

鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院產(chǎn)科 (河南 鄭州 450000)

子癇前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特發(fā)疾病，其病因和發(fā)病機制仍未完全明確，臨床表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓和蛋白尿，并伴有惡心嘔吐等癥狀，對母胎健康均造成了嚴重影響[1-2]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(Treg)是一類免疫調(diào)節(jié)細胞，在機體外周免疫耐受、移植免疫耐受及母胎免疫耐受中均有重要作用[3]。叉頭框蛋白3(forkheadbox protein 3，F(xiàn)oxp3)是控制CD4+CD25+Treg發(fā)育、功能和效能的關(guān)鍵基因。研究[4]表明，CD4+CD25+Treg的免疫抑制活動性主要體現(xiàn)于FoxP3陽性的CD4+CD25+Treg部分。另有研究[5]顯示，CD4+CD25+FoxP3+Treg存在于妊娠的各個時期，在母體外周血中均有廣泛存在，是妊娠期重要的免疫耐受調(diào)節(jié)工具。目前，關(guān)于CD4+CD25+FoxP3+Treg在PE患者外周血中的表達相關(guān)研究較多，但關(guān)于其對妊娠結(jié)局的影響仍未明確。故本研究將分析CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中表達的意義及與妊娠結(jié)局的相關(guān)性，以期為PE不良妊娠結(jié)局的防治研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2020年1月～2023年1月收治的PE患者112例為疾病組。

納入標準：疾病組入院后經(jīng)詢問癥狀體征、體格檢查及生化檢測確診為PE，且符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[6]的診斷標準：妊娠20周后收縮壓/舒張壓≥140/90 mmHg，24 h尿蛋白≥0.3 g或隨機尿蛋白(+)或肌酐＞0.3；孕前月經(jīng)周期規(guī)律、孕期明確；自然受孕。排除標準：存在妊娠期糖尿病、妊娠期貧血、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積等其他非妊娠子癇疾??；存在輸血史者；存在結(jié)核及免疫治療史者。另根據(jù)年齡、孕周匹配選取健康孕婦60例為健康組。PE患者根據(jù)病情嚴重程度分為輕度組(74例)、重度組(38例)，分組標準參照《婦產(chǎn)科學(xué)》。依據(jù)妊娠結(jié)局情況分為不良組(27例)與良好組(85例)。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 入院后第2天抽取晨空腹外周靜脈血5 mL，肝素鈉抗凝，分離外周血單核細胞，調(diào)整濃度?？贵wCD4+、CD25+、Foxp3及同型對照各20 μL，加入細胞懸液100 μL，混勻后室溫下避光孵育30 min，3000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，棄上清液，上機檢測。儀器為德國默克密理博公司生產(chǎn)的Guava/easycyte 6-2L流式細胞儀檢測，各抗體均購于美國eBioscience公司。

1.2.2 臨床資料收集 收集不良組與良好組的臨床資料，包括年齡、胎數(shù)、孕次、產(chǎn)次、孕前體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)、發(fā)病孕周、入院時血壓[收縮壓(systolic blood pressure，SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)]、妊娠終止時間、分娩方式、實驗室指標[24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清尿酸(blood uric acid，BUA)、血清Cr、血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine amiotransferase，ALT)、血小板計數(shù)(platelet count，PLT)]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析；計數(shù)資料以[n(%)]表示，組間比較用檢驗；Logistic進行多因素回歸分析。相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)性分析法。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較4組年齡、孕周、孕次、是否初產(chǎn)資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 一般資料比較

2.2 外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平及不良妊娠結(jié)局比較疾病組、輕度組、重度組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于健康組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.001)。疾病組、重度組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于輕度組，且重度組低于疾病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。疾病組、輕度組、重度組不良妊娠結(jié)局發(fā)生率均高于健康組(P<0.01)。疾病組、重度組不良妊娠結(jié)局發(fā)生率高于輕度組，且重度組高于疾病組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

表2 CD4+CD25+Foxp3+Treg水平及不良妊娠結(jié)局比較

2.3 不良組與良好組臨床資料差異分析不良組與良好組的胎數(shù)、分娩方式構(gòu)成比及年齡、孕次、產(chǎn)次、SBP、DBP、白蛋白、BUA、Cr、BUN、AST、ALT、PLT比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；不良組的孕前BMI、24 h尿蛋白定量高于良好組，終止妊娠時間早于良好組，外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于良好組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。見表3。

表3 臨床資料差異分析對比

2.4 Logistic多因素回歸分析以孕前BMI、妊娠終止時間、24 h尿蛋白定量、CD4+CD25+Foxp3+Treg自變量(均為連續(xù)變量)，預(yù)后情況為因變量(預(yù)后良好=0，預(yù)后不良=1)進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示孕前BMI、終止妊娠時間、24 h尿蛋白定量、CD4+CD25+Foxp3+Treg均是影響PE患者妊娠結(jié)局的危險因素(P<0.001)。見表4。

表4 Logistic回歸分析

2.5 C D 4+C D 2 5+Fox p 3+Treg 與妊娠結(jié)局相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析顯示外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平與PE患者不良妊娠結(jié)局呈負相關(guān)(r=-0.722，P<0.01)。

3 討 論

PE可對母體臟器功能造成不可逆的損傷，并影響胎兒生長發(fā)育，是造成孕產(chǎn)婦死亡和圍生兒死亡的主要原因之一[7-9]。研究發(fā)現(xiàn)，PE患者存在血管內(nèi)皮細胞抗體、免疫復(fù)合物、補體增加及Th1/Th2比值向誘導(dǎo)免疫排斥的Th1偏移情況，提示PE屬于母胎免疫不耐受疾病，一旦免疫耐受機制失衡，可出現(xiàn)PE、流產(chǎn)等病理性妊娠[10-11]。CD4+CD25+Foxp3+Treg能抑制機體免疫活性，在維持機體內(nèi)環(huán)境平衡，調(diào)節(jié)免疫耐受中有重要作用。因此，明確CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中的表達情況及對不良妊娠結(jié)局的影響。

Treg是維持機體外周免疫耐受的關(guān)鍵因素，包括來源于胸腺的天然Treg與外周誘導(dǎo)獲得的Treg[12]。CD4+CD25+T細胞即為來源于胸腺的天然Treg，其功能是保持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，抑制機體對異體物質(zhì)的排斥作用，并影響其他T細胞功能，在胚胎生長發(fā)育的免疫耐受平衡中有重要的調(diào)節(jié)作用[13]。Foxp3是存在于細胞質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，是Treg的主要標記表型之一[14]。Foxp3的mRNA及其編碼的蛋白僅特異性表達于CD4+CD25+Treg，是最適宜的Treg鑒定標記，對于控制CD4+CD25+Treg的功能有重要作用[15]。研究顯示[16]，CD4+CD25+Foxp3+Treg在正常妊娠早期有明顯增加，在妊娠中期稍微減弱，在分娩后可顯著下降。李穎證實PE患者的CD4+CD25+Foxp3+Treg水平下降可能與免疫耐受有關(guān)[17]。本研究結(jié)果顯示，PE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表達下降，且與疾病的嚴重程度有關(guān)。

正常生理妊娠時，因母體可對胎兒產(chǎn)生免疫耐受而避免PE在內(nèi)的妊娠期疾病及流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局的發(fā)生[18]。PCD4+CD25+Foxp3+Treg的主要功能是免疫調(diào)節(jié)作用，在母胎耐受的形成中具有重要作用，其水平的異常變化可導(dǎo)致母體免疫紊亂。在PE患者中PCD4+CD25+Foxp3+Tre水平的下降使PE患者的機體內(nèi)調(diào)控機制失衡，發(fā)生免疫耐受不良，并產(chǎn)生針對自身抗原成分的效應(yīng)細胞、分子，引發(fā)免疫損傷，胎兒易受免疫攻擊被母體排斥，增加死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局的發(fā)生風(fēng)險[19]。樓向明等[20]認為，CD4+CD25+Foxp3+Treg能調(diào)控母胎界面免疫耐受的形成，影響妊娠結(jié)局的發(fā)展。葛榕等[21]認為提高PE孕鼠PCD4+CD25+Foxp3+Treg水平可調(diào)節(jié)對父系抗原的特異性免疫耐受，改善圍產(chǎn)期結(jié)局。本研究中Logistic回歸分析證實CD4+CD25+Foxp3+Treg是影響不良妊娠結(jié)局的相關(guān)因素，Spearman相關(guān)性分析顯示CD4+CD25+Foxp3+Treg與不良妊娠結(jié)局呈負相關(guān)。

綜上所述，CD4+CD25+Foxp3+Treg在PE患者外周血中表達下降，是不良妊娠結(jié)局的獨立危險因素，且與不良妊娠結(jié)局呈負相關(guān)。對于收治入院的PE患者，可通過檢測外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg對妊娠結(jié)局進行預(yù)測。