孫俊紅 張方方 張麗媛 李雷花

作者單位：457000 河南省濮陽市人民醫(yī)院

前列腺癌疾病屬于臨床上常見的上皮性惡性腫瘤,主要發(fā)生于男性生殖系統(tǒng)。近幾年,隨著人們生活方式及飲食習(xí)慣的變化,前列腺癌疾病的發(fā)生率逐漸增加[1]。晚期前列腺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的幾率比較大,前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者并發(fā)骨痛,嚴(yán)重情況下,可能引起病理性骨折,影響其生活質(zhì)量[2]。前列腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病的發(fā)病原因備受關(guān)注。目前,大多數(shù)研究學(xué)者表示前列腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病的發(fā)生主要與遺傳及環(huán)境因素有關(guān)[3]。相同環(huán)境下,不同個(gè)體前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也存在差異性,進(jìn)一步表明遺傳因素屬于前列腺癌骨轉(zhuǎn)移易感性關(guān)鍵原因[4]。目前關(guān)于基因多態(tài)性與前列腺癌易感性相關(guān)的研究較多[5-6],但是其潛在發(fā)病機(jī)制尚且不清楚。機(jī)體正常情況下,錳超氧化物歧化酶(MnSOD)主要通過清除機(jī)體內(nèi)多于的氧物質(zhì),目的為維持氧化-還原系統(tǒng),但是若此系統(tǒng)被破壞,ROS過剩,引起氧化應(yīng)激反應(yīng),最終促進(jìn)腫瘤疾病發(fā)展[7]。研究證實(shí),MnSOD基因Ala多態(tài)性與多種腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān),如食管癌[8]、乳腺癌[9]、前列腺癌[10]等,尤其前列腺癌。但關(guān)于MnSOD基因Ala多態(tài)性與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)病關(guān)系值得探討。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇本院腫瘤科2019年3月至2021年3月前列腺癌患者94例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):①本研究納入的研究對象均中華醫(yī)學(xué)會(huì)泌尿外科分會(huì)符合《2019版EAU前列腺癌指南更新摘要》中關(guān)于前列腺癌疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11];②均為首次確診的患者;③以往均未采用去勢或者藥物治療;③年齡均在50-80歲;④前列腺癌分期均≥M1b期;⑤均無心、肝、腎等疾病重要臟器障礙的患者;⑥臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①既往存在精神異常的患者;②合并嚴(yán)重骨折疾病史者;③合并血液系統(tǒng)類、代謝性類疾病史者;④其他部位合并惡性腫瘤的患者;⑤既往具有腫瘤手術(shù)史的患者。本研究納入對象均簽署對研究的知情同意書且研究設(shè)計(jì)符合《赫爾辛基宣言》。根據(jù)患者是否發(fā)生骨轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組,將發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者作為骨轉(zhuǎn)移組,將未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者作為前列腺癌組。收集入組研究對象年齡、病程、TNM分期、體質(zhì)量指數(shù)等臨床資料。

前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)準(zhǔn)[12]:根據(jù)《2011版中國泌尿外科疾病診斷治療指南》,即①患者存在明顯的臨床癥狀,如排尿困難、血尿以及骨轉(zhuǎn)移造成的臨床癥狀;②經(jīng)腫瘤標(biāo)記物證實(shí);③均經(jīng)過直腸指診、B超、CT以及MRI等檢查存在腫塊;④經(jīng)穿刺活檢病理證實(shí),且骨掃描顯示具有至少1處的骨轉(zhuǎn)移病灶。

1.2 研究方法

1.2.1 主要儀器與試劑 主要儀器:-80 ℃冰箱(澳柯瑪生物醫(yī)療,DW-86L290);PCR儀(美國/Thermo Scientific,PikoReal);DNA提取試劑盒(美國/MP Biomedicals,50 preps);MnSOD基因引物設(shè)計(jì)及合成(美國BLP,Dr.Oligo);主要試劑:溴化乙錠(鈺博生物,1.5 mL);3%瓊脂糖(雅吉,1 g)。

1.2.2 MnSOD基因多態(tài)性檢測 入院當(dāng)天抽取肘部靜脈血溶液2～5 ml,置于-80 ℃冰箱,酚-氯仿抽取基因DNA,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)法(PCR-RFLP)檢測基因型。Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物,上游引物:5'-CAGATGTAGTGGTTAGCGCC-3';下游引物:5'-CATGGATTGCGCTTAAGGGC-3';PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性3 min,94 ℃變性30 s,58.5 ℃退火45 s,72 ℃延伸7 min。采用3%瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切產(chǎn)物,溴化乙錠染色,數(shù)碼凝膠成像系統(tǒng)確定MnSOD基因Val16Ala基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較

前列腺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移40例,即骨轉(zhuǎn)移組40例,未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移患者為前列腺癌組54例。兩組年齡、病程、TNM分期、體質(zhì)量指數(shù)等臨床資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組臨床資料比較

2.2 兩組MnSOD基因Val16Ala遺傳平衡檢驗(yàn)

骨轉(zhuǎn)移組和前列腺癌組MnSOD基因Val/Val、Val/Ala和Ala/Ala基因型實(shí)際頻數(shù)和理論頻數(shù)分布比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

表2 兩組MnSOD基因Val16Ala遺傳平衡檢驗(yàn)

2.3 兩組MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性分布比較

骨轉(zhuǎn)移組MnSOD基因Ala/Ala基因型、Ala等位基因頻率高于前列腺癌組,Val/Val基因型頻率、Val等位基因頻率低于前列腺癌組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 兩組MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性分布比較(例,%)

2.4 攜帶不同基因型前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床特征比較

MnSOD基因Val16Ala基因型與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者PSA、年齡以及Gleason評分無關(guān)(P>0.05);TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者Ala/Ala比例[75.00%(18/24)]顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者[37.5%(6/16)](P<0.05)。見表4。

表4 攜帶不同基因型前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床特征比較/例

3 討論

關(guān)于腫瘤遺傳易感性屬于目前研究熱點(diǎn)。尤其關(guān)于MnSOD基因多態(tài)性與腫瘤疾病之間的關(guān)系受到越來越多研究學(xué)者的關(guān)注,發(fā)現(xiàn)MnSOD基因多態(tài)性可以參與多種腫瘤疾病進(jìn)展,如前列腺癌[13]、肝癌[14]以及肺癌[15]等。MnSOD主要來源于線粒體,屬于一類較為關(guān)鍵的抗氧化酶,主要將O2-轉(zhuǎn)化氧化為H2O2,再經(jīng)過氧化酶等物質(zhì)的轉(zhuǎn)化,最終分解為水及氧氣,使細(xì)胞表現(xiàn)為無毒化[16]。MnSOD基因表達(dá)水平下降后,ROS濃度上升,引起細(xì)胞內(nèi)DNA、脂質(zhì)等水平異常增加,進(jìn)一步導(dǎo)致正常細(xì)胞出現(xiàn)異常分化,同時(shí)促進(jìn)腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展。MnSOD基因啟動(dòng)子區(qū)域處16號(hào)位點(diǎn),T轉(zhuǎn)為C,可引起Val轉(zhuǎn)為Ala,無法有效清除線粒體內(nèi)ROS物質(zhì),從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。

前列腺癌屬于男性好發(fā)疾病,目前,已有多項(xiàng)研究證實(shí)了MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性與前列腺癌易感性存在關(guān)系,但是也有研究表明兩者無關(guān)系,同時(shí)MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系研究報(bào)道不多。由此,本次研究分析了MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的關(guān)系。結(jié)果顯示,骨轉(zhuǎn)移組MnSOD基因Ala/Ala基因型、Ala等位基因頻率高于前列腺癌組,Val/Val基因型頻率、Val等位基因頻率低于前列腺癌組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示MnSOD基因Ala等位基因突變可能促進(jìn)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),此基因rs16位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與疾病進(jìn)展有關(guān),也可能是前列腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病發(fā)生和發(fā)展的遺傳因素之一,MnSOD是SOD調(diào)節(jié)的關(guān)鍵酶,Ala等位基因可能通過干擾MnSOD酶的活性進(jìn)而影響前列腺癌骨轉(zhuǎn)移疾病的發(fā)生和發(fā)展。張超賢等人的研究中[17],研究顯示MnSOD基因攜帶Ala基因的頻率在Ⅲ～Ⅳ期患者明顯高于Ⅰ～Ⅱ期,其研究結(jié)果與本次研究結(jié)果具有一致性。另外在WIKLUND的研究中[18],研究顯示MnSOD基因多態(tài)性與前列腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān),與本次研究存在一定差異性,分析其原因可能與種族、樣本量不同存在關(guān)系。

綜上所述,MnSOD基因Val16Ala多態(tài)性與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移患者易感性存在關(guān)系,可能存在促進(jìn)前列腺癌發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的作用。但是本研究也存在不足,關(guān)于遺傳因素與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系還需要大樣本、多中心的隨機(jī)對照研究,以進(jìn)一步提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性,同時(shí)為預(yù)防以及控制前列腺癌骨轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。