侯棟亮 張 飛 韋 源

作者單位：450018 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院,河南省兒童醫(yī)院,鄭州兒童醫(yī)院

神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma,NB)較為常見,好發(fā)于身體多個(gè)部位交感神經(jīng)組織,發(fā)病群體以5歲以下兒童為主,可誘發(fā)腹脹、腹痛、呼吸困難、骨痛等一系列癥狀,若不及時(shí)治療,可威脅患兒生命[1-2]。臨床對(duì)于兒童NB多以早確診、早治療為原則,盡早開展以手術(shù)為主的綜合治療方案,能夠阻止腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移,以緩解臨床癥狀,促使患兒獲得良好預(yù)后[3-4]。NB早期癥狀不典型,且惡性程度高,易發(fā)生轉(zhuǎn)移,臨床治療難度大,遠(yuǎn)期預(yù)后不理想。高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)是一種高度保守的核蛋白,臨床近年來發(fā)現(xiàn)其在多種惡性腫瘤中均存在異常表達(dá),或可加速腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[5]。骨髓細(xì)胞瘤病毒相關(guān)基因(myeloclaoma virus-related genes,MYCN)屬于MYC原癌基因家族成員,最初是從NB腫瘤細(xì)胞內(nèi)分離而出,可能與腫瘤生長、增殖、轉(zhuǎn)化等相關(guān)[6]。鑒于此,本研究分析HMGB1、MYCN在兒童NB組織中的表達(dá)及其意義,旨在為臨床完善兒童NB治療方案提供指導(dǎo)。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1月至2022年1月我院收治的75例NB患兒臨床資料,其中男性35例,女性40例;年齡1個(gè)月～10歲,平均年齡(3.89±1.45)歲;體質(zhì)量5.5～38 kg,平均體質(zhì)量(18.96±6.15)kg;腫瘤部位:60例腎上腺,15例其他。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)手術(shù)病理明確診斷;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤;肝腎衰竭;術(shù)前接受放化療;存在嚴(yán)重先天性疾病。

1.2 方法

手術(shù)中采集所有患兒病理標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本,術(shù)后及時(shí)送至病理科檢驗(yàn),并開展免疫組織化學(xué)法檢測HMGB1、MYCN在病理標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。HMGB1表達(dá):先以10%甲醛溶液固定標(biāo)本48 h,石蠟包埋切片、滅活處理,之后以微波抗原修復(fù),加入兔抗人HMGB1抗體,在4 ℃環(huán)境內(nèi)孵育過夜,之后室溫孵育40 min,以PBS溶液沖洗;滴入二氨基聯(lián)苯胺顯色液,之后進(jìn)行復(fù)染、脫水及封片等一系列處理。結(jié)果判斷:依據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比判斷,其中染色強(qiáng)度分為0、1、2、3分,對(duì)應(yīng)無色、淡黃色、棕色、棕褐色;陽性細(xì)胞比:<5%為0分,≥5%且<20%為1分,≥20%且<50%為2分,≥50%為3分;其中0～1分為陰性,反之為陽性。MYCN表達(dá):先以10%甲醛溶液固定標(biāo)本48 h,石蠟包埋切片、滅活處理,常規(guī)脫蠟后用枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液稀釋為工作液,煮沸處理,切片置于耐熱染色架上在工作液內(nèi)高壓加熱,之后以PBS溶液沖洗5 min,反復(fù)3次,以3% H2O2室溫下避光孵育15 min,之后滴加兔抗人多克隆抗體MYCN,室溫下靜置15 min,之后依次滴加封閉用山羊血清工作液,不洗,15 min后,生物素標(biāo)記山羊抗兔工作液,間隔15 min,去除PBS溶液后,進(jìn)行顯色處理,自來沖洗后蘇木精復(fù)染,之后脫水及封片等。結(jié)果判斷:依據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比判斷,其中染色強(qiáng)度分為0、1、2、3分,對(duì)應(yīng)無色、淡黃色、棕色、棕褐色;陽性細(xì)胞比:0分為陽性細(xì)胞無,≤10%為1分,>10%～50%為2分,>50%～75%為3分,≥75%為4分;綜合兩者評(píng)分,其中0～2分為陰性,反之為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)HMGB1、MYCN表達(dá)情況:比較HMGB1、MYCN在腫瘤組織及癌旁組織中的表達(dá)水平。(2)HMGB1表達(dá)與病理特征間的關(guān)系:分析不同HMGB1表達(dá)NB患兒年齡、性別、體質(zhì)量、腫瘤部位、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、分化程度等病理特征間差異。(3)MYCN表達(dá)與病理特征間關(guān)系:分析不同MYCN表達(dá)NB患兒年齡、性別、體質(zhì)量、腫瘤部位、腫瘤轉(zhuǎn)移、INSS分期、分化程度等病理特征間差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HMGB1、MYCN表達(dá)情況

腫瘤組織HMGB1陽性表達(dá)率、MYCN陽性表達(dá)率均高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組HMGB1、MYCN表達(dá)情況對(duì)比(例,%)

2.2 HMGB1、MYCN表達(dá)與病理特征間關(guān)系

HMGB1、MYCN陽性組腫瘤轉(zhuǎn)移率、腫瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于HMGB1、MYCN陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 HMGB1、MYCN表達(dá)與病理特征間關(guān)系(例,%)

3 討論

NB病因復(fù)雜,臨床認(rèn)為該病始于成神經(jīng)細(xì)胞,這種細(xì)胞為胎兒發(fā)育過程中產(chǎn)生的一類未成熟神經(jīng)細(xì)胞,在胎兒發(fā)育成熟過程中,該細(xì)胞最終可轉(zhuǎn)變?yōu)樯窠?jīng)細(xì)胞、纖維等[7-8]。多數(shù)胎兒在出生后成神經(jīng)細(xì)胞均會(huì)成熟,發(fā)育為神經(jīng)細(xì)胞,但仍有部分胎兒體內(nèi)存在少量未成熟的成神經(jīng)細(xì)胞,該類細(xì)胞可發(fā)生一定突變,難以正常成熟,反而不斷生長分裂,從而進(jìn)展為腫瘤[9-10]。NB病情較為復(fù)雜,發(fā)展相對(duì)較快,較多患兒確診時(shí)已伴有腫瘤轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散情況,臨床治療難度加大。手術(shù)為主的綜合治療方案為當(dāng)前治療NB患兒的重要方式,盡早切除病灶可阻止腫瘤持續(xù)進(jìn)展,降低轉(zhuǎn)移等風(fēng)險(xiǎn),從而延長生存時(shí)間[11]。但NB整體惡性程度偏高,術(shù)后仍有部分遠(yuǎn)期預(yù)后欠佳,故如何進(jìn)一步改善NB患兒預(yù)后成為臨床重點(diǎn)關(guān)注。

腫瘤的浸潤、生長及轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程,若能尋找到腫瘤進(jìn)展過程中的相關(guān)分子機(jī)制,則有助于臨床評(píng)估腫瘤生長、浸潤及轉(zhuǎn)移情況,為臨床早期治療提供方向,以進(jìn)一步提高惡性腫瘤治療效果。HMGB1則為核內(nèi)蛋白,能夠參與細(xì)胞核內(nèi)多種生物學(xué)功能,如參與DNA的復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄及修復(fù)等。HMGB1亦屬于結(jié)構(gòu)蛋白,能夠起到協(xié)助基因轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定細(xì)胞核等多種作用。本研究結(jié)果顯示,腫瘤組織HMGB1陽性表達(dá)率高于癌旁組織,HMGB1陽性組腫瘤轉(zhuǎn)移率、腫瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于HMGB1陰性組;提示HMGB1在兒童NB中表達(dá)水平較高,且高表達(dá)患兒腫瘤分期高、分化程度低,并存在較高的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。其原因?yàn)镠MGB1表達(dá)水平較高時(shí),能夠結(jié)合相關(guān)受體,誘導(dǎo)金屬蛋白酶類物質(zhì)釋放,促使細(xì)胞外基質(zhì)降解,從而促進(jìn)腫瘤生長、浸潤及擴(kuò)散[12-13]。HMGB1還能夠活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,使得Th2細(xì)胞出現(xiàn)極化,促使腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)控,故HMGB1陽性表達(dá)患兒腫瘤增殖速度快,更易出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示,腫瘤組織MYCN陽性表達(dá)高于癌旁組織,MYCN陽性組腫瘤轉(zhuǎn)移率、腫瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于MYCN陰性組,提示MYCN在兒童NB患兒中表達(dá)水平較高,并可影響腫瘤分期及轉(zhuǎn)移。其原因?yàn)镸YCN為MYC家族重要成員,編碼為具有基本螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì),主要位于細(xì)胞核內(nèi),其基因擴(kuò)增與腫瘤生長、擴(kuò)散等存在密切關(guān)系,尤其在NB中存在明顯異常表達(dá)。當(dāng)MYCN高表達(dá)時(shí),其可通過調(diào)控蛋白在腫瘤增殖中起到重要作用,促使腫瘤細(xì)胞無法正常凋亡,增強(qiáng)腫瘤生長、侵襲能力,故MYCN陽性患兒普遍腫瘤分期高、分化程度低,且腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高[14-15]。因此,臨床可將HMGB1、MYCN作為評(píng)估腫瘤生長、轉(zhuǎn)移等情況的重要參考指標(biāo),并可為臨床完善早期治療方案提供指導(dǎo)。

綜上所述,HMGB1、MYCN在兒童NB組織中表達(dá)水平較高,且陽性表達(dá)患兒腫瘤分期高、分化程度低,更易伴有腫瘤轉(zhuǎn)移,可為臨床診療提供重要參考。