買春陽 張 健 閆振宇

作者單位：473001 河南省南陽市中心醫(yī)院

慢性萎縮性胃炎(CAG)為胃腸道常見慢性疾病之一[1]。CAG病情進(jìn)展后可能發(fā)生腸上皮化生、異形增生生長、上皮細(xì)胞瘤變等情況,嚴(yán)重者可能惡化為胃癌,因此世界衛(wèi)生組織將CAG定義為存在惡化潛能、存在癌前病變的疾病,因此臨床需探索CAG惡化為胃癌的機制,并在胃癌早期診斷及時實施干預(yù)治療,避免胃癌進(jìn)一步惡化[2]。胃黏膜上皮細(xì)胞在CAG發(fā)生及進(jìn)展中存在重要作用,其分化方向、穩(wěn)態(tài)維持情況是CAG發(fā)生發(fā)展的起始。胃黏膜SLC26A9基因為新型多功能陰離子,在調(diào)節(jié)胃酸分泌、轉(zhuǎn)運氯離子等過程中具有重要作用,其形成減少會直接導(dǎo)致胃壁細(xì)胞、主細(xì)胞、胃酸分泌減少以及胃腺體萎縮等情況[3],說明胃黏膜SLC26A9基因在CAG疾病發(fā)生發(fā)展中存在重要作用,對此,本次研究分析胃癌與CAG患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)情況,探究胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)情況與胃癌發(fā)生及其進(jìn)展程度的相關(guān)性,先將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年5月至2022年5月我院收治的200例過往CAG入院復(fù)查患者,納入標(biāo)準(zhǔn):過往均符合CAG診斷標(biāo)準(zhǔn);低級別瘤變組患者均經(jīng)病理活檢確診為胃黏膜低級別上皮細(xì)胞瘤變[4];高級別瘤變組患者均經(jīng)病理活檢確診為胃黏膜高級別上皮細(xì)胞瘤變[5];胃癌組患者均經(jīng)病理活檢確診為胃癌[6];首次入院復(fù)查;未實施放化療等治療;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):存在其他惡性腫瘤病史;實施手術(shù)治療后復(fù)發(fā)患者;合并心肺功能不全者;存在免疫系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)疾病者。以其中69例CAG患者為胃炎組,40例胃黏膜低級別上皮細(xì)胞瘤變患者為低級別瘤變組,34例胃黏膜高級別上皮細(xì)胞瘤變患者為高級別瘤變組,57例胃癌患者為胃癌組;胃癌組中根據(jù)胃癌進(jìn)展程度[7]分為早期組(n=31)和進(jìn)展期組(n=26)。

胃炎組中性別(男/女):35/34例;平均年齡(37.98±5.31)歲;CAG病程平均(2.03±0.49)年;幽門螺旋桿菌感情況:感染32例,未感染37例。

低級別瘤變組中性別(男/女):22/18例;平均年齡(38.52±5.29)歲;CAG病程平均(2.94±0.62)年;幽門螺旋桿菌感情況:感染25例,未感染15例。

高級別瘤變組中性別(男/女):16/18例;平均年齡(40.90±5.35)歲;CAG病程平均(3.88±0.81)年;幽門螺旋桿菌感情況:感染23例,未感染11例。

胃癌組中性別(男/女):32/25例;平均年齡(43.21±5.32)歲;CAG病程平均(4.75±1.02)年;幽門螺旋桿菌感情況:感染42例,未感染15例。

1.2 檢測方法

使用實施熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測200例患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平:(1)提取總核糖核酸(RNA):獲得患者胃黏膜細(xì)胞后,放置在細(xì)胞培養(yǎng)液中保存,測量時除去細(xì)胞培養(yǎng)液,加入5 ml磷酸鹽緩沖液(PBS),混勻清洗1次,以10 cm2/ml比例加入Trizol,在室溫下放置5 min,進(jìn)行消化裂解,裂解后于12000 rpm轉(zhuǎn)速下離心5 min,取其上層清液,加入200 μl氯仿/ml Trizol混勻,在室溫下放置15 min,于4 ℃下離心15 min,取上層水相按照500 μl異丙醇/ml Trizol混勻放置10 min,再次離心,取下層沉淀按照1 ml 75%酒精/ml Trizol混勻放置離心,取下層沉淀物在室溫下晾曬10 min,晾曬后以30 μl焦炭酸二乙酯水溶液溶解。(2)測定O.D值:使用德國TMPLEN超微量分光光度計測量其O.D值。(3)測定定量RNA濃度:設(shè)置各樣品RNA濃度均為0.2 μg/μl,體積為20 μl,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄、擴增后,使用相對定量法計算其基因表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較胃炎組、低級別瘤變組、高級別瘤變組、胃癌組4組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平;比較早期組和進(jìn)展期組2次組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平。使用logistic相關(guān)性分析模型分析胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與胃癌發(fā)生、胃癌進(jìn)展程度的相關(guān)性。使用受試者工作曲線(ROC)分析胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌的診斷價值;使用ROC曲線分析胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌進(jìn)展程度的診斷價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 4組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平比較

胃炎組、低級別瘤變組、高級別瘤變組、胃癌組4組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平均存在明顯差異,且胃炎組>低級別瘤變組>高級別瘤變組>胃癌組(P<0.05),見表1。

表1 4組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平比較

2.2 2次組胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平比較

早期組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平顯著高于進(jìn)展期組(P<0.05),見表2。

表2 2次組胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平比較

2.3 相關(guān)性分析

經(jīng)logistic相關(guān)性分析,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與胃癌發(fā)生、胃癌進(jìn)展程度均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見表3。

表3 相關(guān)性分析

2.4 胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌發(fā)生的診斷價值分析

ROC曲線中,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平診斷胃癌發(fā)生的AUC為0.935,95%CI為0.892～0.965,敏感度為91.23%,特異度為87.41%,截斷值為0.2787,見圖1。

圖1 胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌發(fā)生診斷價值ROC曲線

2.5 胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌進(jìn)展程度的診斷價值分析

胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平診斷胃癌進(jìn)展程度的AUC為0.881,95%CI為0.768～0.952,敏感度為92.31%,特異度為80.65%,截斷值為0.2368,見圖2。

圖2 胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平對胃癌進(jìn)展程度診斷價值ROC曲線

3 討論

CAG為常見消化系統(tǒng)慢性疾病之一,若控制不當(dāng)疾病惡化可能發(fā)展成胃癌,且由于胃癌早期無特異性癥狀,難以診斷,導(dǎo)致很多患者確診時已發(fā)展至晚期,導(dǎo)致治療效果及預(yù)后均不理想,因此需研究特異性指標(biāo)用于診斷CAG患者胃癌發(fā)生及胃癌進(jìn)展程度[8]。

SLC26家族為新發(fā)新的多功能陰離子轉(zhuǎn)運家族,其中SLC26A9為跨膜蛋白,主要分布在肺泡、氣管、胃黏膜上皮細(xì)胞、胃壁細(xì)胞中,主要作為氯離子轉(zhuǎn)運通道、鈉氯離子共轉(zhuǎn)運體等,有研究表明,肺部疾病患者SLC26A9基因表達(dá)水平存在明顯異常,因此分析SLC26A9基因表達(dá)水平與CAG患者胃癌發(fā)生的相關(guān)性[9]。本次研究結(jié)果中,胃炎組、低級別瘤變組、高級別瘤變組、胃癌組4組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平均存在明顯差異,且胃炎組>低級別瘤變組>高級別瘤變組>胃癌組;經(jīng)logistic相關(guān)性分析,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與胃癌發(fā)生呈負(fù)相關(guān);ROC曲線中,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平診斷胃癌發(fā)生的AUC為0.935,95%CI為0.892～0.965,敏感度為91.23%,特異度為87.41%,截斷值為0.2787,提示胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與CAG患者發(fā)生胃癌密切相關(guān),用于臨床診斷CAG患者胃癌發(fā)生的診斷價值理想。原因在于,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)減少導(dǎo)致離子通道減少,影響胃黏膜細(xì)胞分化分泌,減少胃酸分泌,導(dǎo)致胃內(nèi)酸堿度紊亂,進(jìn)而導(dǎo)致壁細(xì)胞及泌酸腺體萎縮,引發(fā)胃壁細(xì)胞、胃黏膜組織形態(tài)學(xué)改變,發(fā)生上皮細(xì)胞瘤變等情況,進(jìn)一步發(fā)展為胃黏膜高級別上皮細(xì)胞瘤變,若未得到及時控制,胃組織形態(tài)學(xué)改變進(jìn)一步加重,且胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)減少會抑制胃黏膜凋亡,并導(dǎo)致其過度增殖,將進(jìn)一步發(fā)展為胃癌,因此胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平為CAG患者胃癌發(fā)生密切相關(guān),當(dāng)其水平<0.2787時,可初步診斷為胃癌發(fā)生[10]。

CAG患者疾病惡化為胃癌后,其胃癌進(jìn)展程度與治療方案制定、患者生存時間等密切相關(guān)。本次研究結(jié)果中,早期組患者胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平顯著高于進(jìn)展期組;經(jīng)logistic相關(guān)性分析,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與胃癌進(jìn)展程度呈負(fù)相關(guān);胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平診斷胃癌進(jìn)展程度的AUC為0.881,95%CI為0.768～0.952,敏感度為92.31%,特異度為80.65%,截斷值為0.2368,說明胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)水平與胃癌進(jìn)展程度也存在明顯相關(guān)性,可用于診斷胃癌進(jìn)展程度。究其原因,惡性腫瘤發(fā)展過程中,細(xì)胞凋亡為對抗腫瘤發(fā)展的途徑,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)會增加抑癌基因p53表達(dá),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,當(dāng)胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)減少,抑癌基因表達(dá)隨之降低,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡失衡,腫瘤細(xì)胞快速增殖,使胃癌進(jìn)一步發(fā)展惡化。

綜上所述,胃黏膜SLC26A9基因表達(dá)與CAG患者胃癌發(fā)生、胃癌進(jìn)展程度密切相關(guān),用于診斷胃癌發(fā)生及其進(jìn)展程度具有理想診斷價值,可為臨床診斷提供參考依據(jù)。