劉海虹 劉耀慧 雷毅

作者簡介：劉海虹（1988—），女，廣東揭陽人，碩士，工程師。研究方向：食品安全與檢測技術(shù)。

通信作者：雷毅（1977—），男，云南宜良人，博士，主任藥師。研究方向：食品安全與質(zhì)量分析。E-mail：Leiy04@qq.com。

摘 要：目的：驗證多種獸藥殘留項目快檢試劑產(chǎn)品的準(zhǔn)確性，評估快檢在抽檢中的實際篩查效果。方法：采用真實樣品為驗證基質(zhì)，比對不同快檢試劑產(chǎn)品的檢測結(jié)果與實驗室檢驗結(jié)果，以氯霉素為例探討快檢應(yīng)用于食品抽檢的可行性。結(jié)果：13種快檢試劑產(chǎn)品的平均結(jié)果驗證符合率為96.6%，實例表明產(chǎn)品H、O的抽檢命中率分別為74.1%、100.0%。結(jié)論：科學(xué)合理地應(yīng)用快檢技術(shù)，可以在抽檢中提高靶向命中率。

關(guān)鍵詞：快速檢測；真實食品；陽性；結(jié)果驗證

Accuracy Verification and Application Exploration of Rapid Testing Results of Veterinary Drug Residues Based on Real Food

LIU Haihong， LIU Yaohui， LEI Yi*

（Guangdong Institute of Food Inspection， Guangzhou 510435， China）

Abstract： Objective： Verify the accuracy of a variety of veterinary drug residue items rapid test results and evaluate the rapid screening effect in sampling inspection. Method： Real samples were drawn， and the test results of different fast detection products were compared with the laboratory test results. Taking chloramphenicol as an example to discuss the feasibility of using rapid detection in food sampling. Result： The average verification coincidence rate of 13 kinds of rapid detection reagent products was 96.6%. The examples showed that the sampling hit rates of products H and O were 74.1% and 100.0%， respectively. Conclusion： Scientific and reasonable use of fast detection technology can improve the target hit rate in quantitative sampling.

Keywords： rapid detection; real food; positive; result verification

快檢技術(shù)作為一種檢測手段，被廣泛應(yīng)用于食品安全監(jiān)管[1-3]。隨著我國食品快檢制度體系的不斷完善，快檢操作逐漸規(guī)范化[4-5]。巨大的市場需求推動了快檢技術(shù)的發(fā)展[6-8]。國家市場監(jiān)督管理總局文件《關(guān)于規(guī)范食品快速檢測使用的意見》中規(guī)定，市場監(jiān)管總局對聲稱采用市場監(jiān)管總局公布食品快檢方法的快檢產(chǎn)品，組織開展符合性評價，并鼓勵市場監(jiān)管部門采購?fù)ㄟ^符合性評價或獲得認(rèn)證的食品快檢產(chǎn)品[4]。目前，快檢產(chǎn)品的評價驗證備受關(guān)注，評價指標(biāo)包括靈敏度、交叉反應(yīng)率、假陰性率和假陽性率等，經(jīng)過評價的快檢產(chǎn)品性能得到保障，能有效避免快檢結(jié)果假陰性情況的發(fā)生[9-13]。

快檢產(chǎn)品符合性評價采用的盲樣基質(zhì)為典型樣品基質(zhì)，通常采用空白樣品加標(biāo)的方式制備盲

樣[14-17]。真實樣品通常含有多種干擾成分，且目標(biāo)物的含量范圍較寬，基質(zhì)效應(yīng)也各有差別，因此采用真實樣品進行驗證時，快檢結(jié)果出現(xiàn)假陽性的情況較多。抽查發(fā)現(xiàn)快檢結(jié)果呈陽性的食用農(nóng)產(chǎn)品樣品，處理方式多是直接銷毀，送實驗室檢驗的情況較少，關(guān)于快檢結(jié)果的準(zhǔn)確性驗證報道較少[18-19]。

本研究基于農(nóng)貿(mào)市場抽取的風(fēng)險監(jiān)測真實樣品，包括魚類、蝦類、貝類、禽肉、畜肉及鮮蛋等，采用實驗室參比方法與快檢試劑產(chǎn)品進行比對，對快檢結(jié)果準(zhǔn)確性進行驗證分析。由于陰性和陽性樣品數(shù)量及比例無法預(yù)先設(shè)定，不以假陽性率和假陰性率作為指標(biāo)，以驗證符合率進行結(jié)果論證。以氯霉素為例，開展抽檢應(yīng)用研究，通過驗證快檢試劑產(chǎn)品符合率及分析產(chǎn)品本身存在的問題，探討快檢技術(shù)應(yīng)用于食品抽檢的可行性。

1 材料與方法

1.1 儀器

Xevo TQ-S micro超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters公司）；多通道渦旋振蕩器（上海ANPEL科技股份有限公司）；ROUTINE高速冷凍離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.2 驗證項目及對象

本研究共驗證13個快檢產(chǎn)品，涉及氯霉素、孔雀石綠、呋喃唑酮代謝物、恩諾沙星及氟苯尼考5種獸藥殘留項目，不同快檢結(jié)果的驗證信息見表1。

本研究選擇氯霉素項目的2個快檢產(chǎn)品，包括膠體金免疫層析法、時間分辨熒光免疫層析定量法[20-22]兩種快檢技術(shù)，開展抽檢應(yīng)用研究，檢測對象包括貝類養(yǎng)殖水及組織，快檢產(chǎn)品信息見表2。

1.3 驗證方式

快檢結(jié)果驗證的判定標(biāo)準(zhǔn)為當(dāng)快檢結(jié)果呈陽性，其對應(yīng)項目的實驗室驗證結(jié)果大于或等于快檢檢出限（最低檢出水平）的最大負(fù)偏離（一般情況不超過20%，對于痕量物質(zhì)檢測時可達(dá)30%）時，則判定為驗證通過，結(jié)果符合；當(dāng)快檢結(jié)果呈陰性時，實驗室驗證結(jié)果小于快檢檢出限水平，則判定為驗證通過，反之為不通過。

2 結(jié)果與分析

2.1 驗證結(jié)果

采用快檢檢測及實驗室參比方法對2020—2022年抽取的農(nóng)貿(mào)市場食用農(nóng)產(chǎn)品分別進行檢測，驗證結(jié)果見表3。共驗證1 367項次，驗證符合1 320項次，不符合的情況以假陽性結(jié)果為主，其中假陽性40項次，假陰性7項次，平均驗證符合率為96.6%。

2.2 驗證結(jié)果分析

對驗證結(jié)果不一致的樣本進行分析，結(jié)果見表3、表4。21項次氯霉素假陽性結(jié)果中，有15項次的檢出值低于參比方法檢出限，說明快檢產(chǎn)品的實際檢出限普遍低于標(biāo)示值；另有6項次檢出高濃度的氟苯尼考、甲砜霉素，說明該快檢產(chǎn)品存在對結(jié)構(gòu)相似物的交叉反應(yīng)。本研究組采用的產(chǎn)品A1～A4的標(biāo)示檢出限均為0.1 μg·kg-1，經(jīng)驗證，魚肉基質(zhì)加標(biāo)檢出限為0.02～0.06 μg·kg-1，普遍比標(biāo)示值低。

氯霉素快檢產(chǎn)品A1出現(xiàn)4項次假陽性結(jié)果，其中3項次的檢出值接近0.1 μg·kg-1，表明快檢試劑盒產(chǎn)品實際檢出限低于0.1 μg·kg-1，1項次貝類檢出高含量的氯霉素同類型物質(zhì)氟苯尼考和甲砜霉素。氯霉素快檢產(chǎn)品A1出現(xiàn)5項次假陰性結(jié)果，其中1批次貝類中的氯霉素含量為0.1 ?g·kg-1，其他4批次為蝦和魚，檢出值均大于0.17 ?g·kg-1，最大為皖魚

1.92 ?g·kg-1，表明該快檢產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定。

孔雀石綠快檢產(chǎn)品B3出現(xiàn)3項次假陽性結(jié)果，實驗開展過程中該產(chǎn)品的快速檢測卡的T線顯色隨時間變化較快，影響最終判讀結(jié)果。

呋喃唑酮代謝物快檢產(chǎn)品C1出現(xiàn)1項次假陽性結(jié)果，樣品為蝦，經(jīng)參比方法確認(rèn)樣品中含量為

0.30 ?g·kg-1，低于法檢方法檢出限0.5 ?g·kg-1。

恩諾沙星試劑盒D1、D2的標(biāo)示檢出限為

100 μg·kg-1。恩諾沙星快檢產(chǎn)品D1出現(xiàn)9項次假陽性結(jié)果，樣品為魚類和貝類，8項次恩諾沙星的檢出數(shù)值遠(yuǎn)低于試劑盒標(biāo)示檢出限，樣品中可能含有其他喹諾酮類抗生素；快檢產(chǎn)品D2出現(xiàn)3項次假陽性結(jié)果，樣品均為魚類，3項次參比方法檢出數(shù)值分別為75.9 ?g·kg-1、68.7 ?g·kg-1、55.2 ?g·kg-1；快檢產(chǎn)品D2出現(xiàn)2批次的假陰性結(jié)果，樣品為黃骨魚，可能是基質(zhì)雜質(zhì)干擾，CT線均未顯色，導(dǎo)致快檢結(jié)果無效。

氟苯尼考快檢產(chǎn)品E1出現(xiàn)1項次假陽性結(jié)果，樣品為初生蛋，參比方法檢出數(shù)值遠(yuǎn)低于0.1 ?g·kg-1。

2.3 應(yīng)用實例

氯霉素快檢產(chǎn)品A1、A2、A3和A4均為膠體金免疫層析法，其陽性驗證符合率分別為69.2%（9/13）、44.4%（4/9）、30.0%（3/10）和37.5%（3/8），應(yīng)用于食品安全抽檢時，假陽性比例較高。為提高抽檢命中率，本研究組采取對養(yǎng)殖水快篩及組織熒光定量手段開展實例應(yīng)用。

本研究組在農(nóng)貿(mào)市場現(xiàn)場篩查貝類養(yǎng)殖水，對快檢陽性結(jié)果且樣品量滿足抽檢需求的，抽檢養(yǎng)殖水及其組織，分別進行實驗室檢驗，測定其氯霉素含量，具體樣品包括花甲、白貝、蟶子、沙甲及蜆等，共計27批次，對應(yīng)的養(yǎng)殖水及其組織的氯霉素含量見圖1。

27批次氯霉素快檢陽性的養(yǎng)殖水中，檢出氯霉素含量均在0.10 μg·L-1以上，產(chǎn)品H對養(yǎng)殖水氯霉素的陽性驗證符合率為100%；對應(yīng)組織的氯霉素含量參比方法確證結(jié)果在0.10 μg·kg-1及以上的共20批次，產(chǎn)品H對組織氯霉素的抽檢命中率為74.1%（20/27）。

氯霉素作為一種廣譜性抗生素，使用廣泛，多種日常外用藥均含有氯霉素。當(dāng)養(yǎng)殖水中氯霉素含量水平較低時（0.1～0.5 μg·kg-1），對組織中氯霉素的篩查命中率較低，僅為50%。本研究組在農(nóng)貿(mào)市場采用時間分辨熒光免疫層析定量法的產(chǎn)品O對

17批樣品組織進行檢測，對應(yīng)的快檢結(jié)果及實驗室檢驗結(jié)果見表5?？鞕z定量結(jié)果（＞0.1 μg·kg-1）的樣

品，實驗室確認(rèn)結(jié)果均檢出氯霉素，從表5可知，產(chǎn)品O對組織氯霉素的抽檢命中率為100%。

3 結(jié)論與討論

本研究針對風(fēng)險較高的5種獸藥殘留項目，采用真實樣品驗證13種快檢試劑產(chǎn)品的結(jié)果準(zhǔn)確性，平均驗證符合率約96.6%，反映了快檢試劑產(chǎn)品在實際應(yīng)用中的效果。

快篩技術(shù)應(yīng)用在實際抽檢時，涉及多個環(huán)節(jié)，需充分考慮檢驗項目與品種的針對性、快檢試劑盒實際檢出限及其對結(jié)構(gòu)相似物的交叉反應(yīng)率、檢測方法定量限及不確定度判定、現(xiàn)場條件所限導(dǎo)致的樣品間交叉污染風(fēng)險、樣品來源復(fù)雜導(dǎo)致的個體或批次差異等因素的影響。

養(yǎng)殖水氯霉素的快檢陽性結(jié)果驗證符合率為100%，且快檢篩查速度遠(yuǎn)比組織氯霉素的快檢篩查速度要快，且操作簡單，無須稀釋，用于現(xiàn)場快篩，能極大提高抽檢效率。養(yǎng)殖水中氯霉素的來源有多種可能性，存在較大交叉污染的風(fēng)險。應(yīng)用于抽檢時，采用熒光定量法試劑盒對養(yǎng)殖水陽性的組織進行定量，可以有效避免低濃度的假陽性結(jié)果，篩查命中率可以大幅提高。

本研究通過開展多種快檢試劑產(chǎn)品的結(jié)果驗證，針對風(fēng)險較高的氯霉素項目進行抽檢應(yīng)用，證明合理、科學(xué)地應(yīng)用快檢技術(shù)，在食品安全抽檢中能提高靶向性、命中率，真正發(fā)揮快檢技術(shù)為食品安全監(jiān)管保駕護航的作用。

參考文獻

[1]岳清洪，黃瑛，黃璐瑤，等.食品安全快速檢測技術(shù)基層監(jiān)管中存在的問題及對策[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019，10（18）：6356-6361.

[2]欒振祥.食品快檢技術(shù)與實驗室檢驗技術(shù)在食品質(zhì)量安全抽檢中的應(yīng)用探討[J].現(xiàn)代食品，2018（20）：31-32.

[3]蔡若純，劉海虹，鄧皇翼，等.基于快檢初篩的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全抽檢模式分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（16）：5385-5390.

[4]市場監(jiān)督管理總局.市場監(jiān)管總局關(guān)于規(guī)范食品快速檢測使用的意見[EB/OL].（2023-01-18）[2023-09-20].https：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/spcjs/202301/t20230129_353024.html.

[5]國家市場監(jiān)督管理總局.食品快速檢測方法數(shù)據(jù)庫[EB/OL].（2017-09-20）[2023-09-20].http：//www.samr.gov.cn/spcjs/ksjcff/.

[6]林偉琦.食品安全快速檢測技術(shù)的應(yīng)用研究進展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（3）：961-967.

[7]李向梅，劉志威，陳曉敏，等.食品安全免疫層析檢測技術(shù)研究進展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（15）：4939-4955.

[8]龔頻，王思遠(yuǎn)，陳雪峰，等.膠體金免疫層析試紙條技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用研究進展[J].食品工業(yè)科技，2019，40（13）：358-364.

[9]謝剛，葉金，王松雪.食品安全快速檢測方法評價技術(shù)研究進展[J].食品科學(xué)，2016，37（17）：270-274.

[10]劉歡，吳立冬，李晉成，等.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速檢測產(chǎn)品管理評價研究[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2016（4）：

41-46.

[11]趙博，張慶合，李紅梅.快速篩選技術(shù)的評價驗證[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2014，5（12）：4121-4127.

[12]寧霄，賀鑫鑫，金紹明，等.食品快速檢測方法的評價及其貝葉斯推斷[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2021，12（3）：1015-1020.

[13]ALEXANDER R，JENS A，IDESBALD B，

et al.Overview of validated alternative methods for the detection of foodborne bacterial pathogens[J].Trends in Food Science & Technology，2017，62：113-118.

[14]李濤，孫寧寧，劉海靜，等.水產(chǎn)品中氯霉素快速檢測產(chǎn)品的驗證性評價及分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2018，9（11）：2596-2601.

[15]葉秋雄，梁俊發(fā)，張彬彬，等.膠體金免疫層析產(chǎn)品快速檢測農(nóng)藥殘留的評價與分析[J].食品工業(yè)科技，2021，42（4）：187-193.

[16]喻俊磊，陳沙，李雨露，等.動物源性食品中克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇快速檢測產(chǎn)品的穩(wěn)健性評價[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2019，31（11）：105-110.

[17]劉婷，曹進，王鋼力，等.市售食品快速檢測產(chǎn)品的應(yīng)用評價與分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2017，8（7）：2439-2447.

[18]劉海虹，申超群，蔡若純，等.食品快速檢測產(chǎn)品跟蹤評價新模式探索[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019，10（13）：4138-4144.

[19]何麗媛，倪樹標(biāo)，張冠文，等.食品安全快速檢測方法與參比方法一致性的評價方法探討[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（23）：8857-8861.

[20]崔乃元，趙義良，馬義才，等.水產(chǎn)品中氯霉素時間分辨熒光免疫層析定量檢測方法[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2019，45（24）：241-245.

[21]趙維章，崔乃元，張漢青，等.時間分辨熒光免疫層析定量檢測牦牛肉中喹諾酮類藥物[J].食品工業(yè)科技，2020，41（18）：239-243.

[22]HU L M，LUO K，XIA J，et al.Advantages of time-resolved fluorescent nanobeads compared with fluorescent submicrospheres，quantum dots，and colloidal gold as label in lateral flow assays for detection of ractopamine[J].Biosensors and Bioelectronics，2017（91）：95-103.