李藹文，王楠，鄧超

廣東省第二中醫(yī)院檢驗科，廣東廣州 510095

EB 病毒（epstein-barr virus, EBV）是一種能普遍感染人類且與多種惡性腫瘤發(fā)病有密切關(guān)系的DNA 病毒[1]。EB 病毒編碼多種結(jié)構(gòu)抗原，機體感染EB 病毒后針對不同的抗原產(chǎn)生相應的抗體[2]。在鼻咽癌患者的感染早期，EB 病毒衣殼抗原抗體（EB VCA IgA）和EB 病毒早期抗原抗體（EB EAIgA）滴度明顯高于健康攜帶者，檢測系統(tǒng)在應用于臨床之前須對其性能進行方法學驗證。本研究收集2020 年4—6 月到中山大學附屬腫瘤醫(yī)院就診的患者和體檢人群的全血標本，共計40 例。通過MAGLUMI X8 檢測系統(tǒng)測定EB VCA 和EB EA IgA的精密度、敏感性與特異性、方法學效果比對、線性范圍和參考區(qū)間，以驗證廠商給定的性能參數(shù)，為臨床用于鼻咽癌的早期篩查提供快速、準確、可靠的依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集本院就診的患者和體檢人群的全血標本，分為即鼻咽癌（nasopharyngeal cancer, NPC）組（經(jīng)病理診斷確診的鼻咽癌患者20 例）和健康對照組（healthycontrol, HC）（健康體檢人群20 例），共計40例樣本。其中鼻咽癌組中男10 例，女10 例；年齡20～55 歲，平均（33.21±2.44）歲。健康對照組中男9例，女11 例；年齡20～54 歲，平均（33.19±2.42）歲。其中女性排除月經(jīng)和妊娠，所有標本均無溶血、黃疸、脂濁。

1.2 儀器與試劑

新產(chǎn)業(yè)MAGLUMI X8 全自動化學發(fā)光儀，EB VCA IgA 試劑（試劑批號：0861900401）、EB EA IgA檢測試劑（試劑批號：0901900201）。

1.3 方法

1.3.1 精密度 按照CLSI EP15-A2 文件要求[3]，選擇新產(chǎn)業(yè)公司配套的高、低值不同濃度的質(zhì)控品（EB VCA IgA 質(zhì)控品低值、高值批號分別為：0861900401Q1、0861900401Q2；EB EA IgA 質(zhì)控品低值、高值批號分別為0901900201Q1、0901900201Q2）作為精密度評價的樣本進行檢測，每天分析1 個批次、2 個濃度，每個濃度重復測量3 次，連續(xù)測量5天，分別計算均值（xˉ），標準差（s）和變異系數(shù)（CV），與廠家聲明CV 值進行比較，若實驗結(jié)果CV 值小于廠家聲明，則通過驗證。

1.3.2 敏感性與特異性 收集鼻咽癌患者樣本20例，健康體檢人群樣本20 例，均進行EB VCA 和EB EA IgA 化學發(fā)光法檢測。

1.3.3 方法學比對 參考WS/T492-2016 衛(wèi)生行業(yè)標準及CNANS-GL037:2019 性能驗證指南，使用患者樣本不少于20 份，被測物濃度、活性等在測量區(qū)間內(nèi)均勻分布，并關(guān)注醫(yī)學鑒定水平。

1.3.4 線性范圍 參考CLSI EP6-A2 文件要求[3]，分別取EB VCA 和EB EA IgA 的高值（H）和低值（L）校準品各1 份，按5H、3H+1L、2H+2L、1H+3L 和5L 稀釋，形成系列濃度血清進行測定，每個樣本重復檢測2 次，以稀釋后的理論值為X，實測均值為Y，將所有結(jié)果標在坐標圖上，計算回歸方程，要求滿足b值在0.95～1.05 范圍之間，相關(guān)系數(shù)R2≥0.95。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用例數(shù)（n）和率（%）表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果

EB VCA IgA 分析總精密度驗證結(jié)果為低、高值樣品（CV%）分別為3.978%和2.337%；EB EA IgA 分析總精密度驗證結(jié)果為低、高值樣品（CV%）分別為6.078%和4.131%。新產(chǎn)業(yè)生物的EBV VCA IgA 和EBV EA IgA 高低兩個水平的精密度，均符合廠家聲稱的要求（＜10%）。

2.2 敏感性與特異性

檢測樣本中EBV VCA IgA 和EBV EA IgA 血清學檢測結(jié)果針對鼻咽癌樣本檢測陽性率（敏感性）分別為100%和86.36%，累計陽性率（敏感性）達100%，特異性是95.24%；VCA IgA 臨床準確性為97.56%；EA IgA 準確性為90.70%。兩者聯(lián)合檢測可以達到100%。

2.3 方法學效果比對結(jié)果

20 例鼻咽癌患者樣本中，EB VCA IgA 化學發(fā)光法與間接免疫熒光法血清滴度的陽性符合率可達95.24%，EB EA IgA 化學發(fā)光法與間接免疫熒光法血清滴度的陽性符合率可達95%，符合總體判斷標準（＞80%）。見表1、表2。

表1 EB VCA IgA 方法學效果比對結(jié)果

表2 EB EA IgA 方法學效果比對結(jié)果

2.4 線性范圍驗證結(jié)果

選取EB VCA IgA和EB EA IgA高濃度（25.4 AU/mL,24.25 AU/mL）和低濃度（2.37 AU/mL，0.44 AU/mL）血清，稀釋后的理論值和實測均值見表3，散點圖見圖1、圖2。

圖1 EB VCA IgA 線性范圍散點圖

圖2 EB EA IgA 線性范圍散點圖

表3 3EB VCA IgA 線性范圍驗證結(jié)果（AU/mL）

3 討論

鼻咽癌起源于鼻咽黏膜，是上皮腫瘤中較為少見的與Epstein-Barr（EB）病毒感染相關(guān)的惡性腫瘤，鼻咽癌目前屬于常見的、治愈率高的腫瘤性疾病，關(guān)鍵在于早診斷、早治療。然而由于鼻咽部解剖位置隱蔽，鼻咽癌早期癥狀不典型，給早期診斷帶來了一定的困難。對于可疑鼻咽癌患者進行必要的輔助檢查是對鼻咽癌進行早期診斷和鑒別診斷不可缺少的重要手段。傳統(tǒng)的體檢方法ELISA 法檢測時間長，假陽性與假陰性率較高。磁微?；瘜W發(fā)光法檢測胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factor-1, IGF-1）的原理是采用雙抗體夾心法。用抗人IGF-1 抗體包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的IGF-1會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IGF-1 抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人IGF-1 抗體與結(jié)合在包被抗體上的人IGF-1 結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入發(fā)光底物混合液，發(fā)光底物在辣根過氧化物酶的催化下發(fā)出熒光，用化學發(fā)光免疫分析儀測定化學發(fā)光值（RLU），IGF-1 濃度與化學發(fā)光值之間呈正相關(guān)，通過繪制標準曲線求出標本中IGF-1 的濃度。因此，近年發(fā)展起來的化學發(fā)光法采用雙抗夾心檢測EB病毒早期抗原EB EA IgA 和衣殼抗原EB VCA IgA，檢測速度快，準確性高，方便大批量人群篩查。

本研究中檢測樣本中EBV VCA IgA 和EBV EA IgA 血清學檢測結(jié)果針對鼻咽癌樣本檢測陽性率（敏感性）分別為100%和86.36%，累計陽性率（敏感性）達100%，特異性是95.24%；VCA IgA 臨床準確性為97.56%；EA IgA 準確性為90.70%。兩者聯(lián)合檢測可以達到100%。

綜上所示，通過化學發(fā)光法檢測EBV VCA IgA和EBV EA IgA 的精密度、敏感性與特異性、方法學比對、參考區(qū)間驗證，性能均可以滿足實驗室與臨床的使用要求?？勺鳛橐环NEB 病毒早期診斷的快速篩查手段。