伍萃欣，廖志玲，黃順?gòu)?，吳潔?/p>

廣東省英德市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東英德 513000

變形桿菌屬廣泛存在于泥土和污水及人、畜糞便中，為條件致病菌，可引起尿路感染、呼吸道感染、腹膜炎、胃腸炎等[1-2]，也可產(chǎn)生超廣譜β 內(nèi)酰胺酶，產(chǎn)酶株對青霉素、第一代、第二代、第三代頭孢素及單酰胺抗生素均產(chǎn)生耐藥[3-4]。該菌屬具有多重耐藥和交叉耐藥的特性，給臨床的治療和醫(yī)院感染的控制帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，而亞胺培南是碳青霉烯類抗菌藥物，是臨床重要抗菌藥物[5]，對治療感染疾病非常重要，掌握亞胺培南的藥物敏感性對指導(dǎo)臨床用藥十分重要[6-7]。如今，由于時(shí)代的進(jìn)步，大型實(shí)驗(yàn)儀器的投入使用，使得臨床上獲知感染源和相應(yīng)抗菌藥物信息的速度迅速加快，同時(shí)也需保證儀器性能的準(zhǔn)確性。儀器稀釋法的藥敏試驗(yàn)屬于微型的肉湯試驗(yàn)，通過應(yīng)用光電比濁原理得到最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration, MIC）值，而紙片擴(kuò)散法，是將浸有抗菌藥的紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈，抑菌圈直徑的大小與待檢菌的MIC 呈負(fù)相關(guān)，抑菌圈越大，MIC 越小[8]。本研究選取廣東省英德市人民醫(yī)院2021 年5 月—2023 年8 月臨床標(biāo)本分離出的208株變形桿菌屬進(jìn)行兩種方法學(xué)的藥物敏感試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院各科室門診及住院患者各臨床標(biāo)本，包括痰液、尿液、分泌物、膿液、血液等送檢標(biāo)本208 份。

1.2 儀器與試劑

VITEK2 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀、分析儀所配套的革蘭陰性菌鑒定卡和藥敏卡片、血瓊脂培養(yǎng)基，含萬古霉素的巧克力瓊脂培養(yǎng)基、無菌鹽水、一次性無菌塑料管、VITEK2 DensiCHEK 比濁儀、標(biāo)準(zhǔn)比濁管、無菌棉拭、水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（mueller-hinton agar medium plate, M-H）平板、亞胺培南藥物紙片、游標(biāo)卡尺、標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）等。

1.3 方法

儀器稀釋法:使用新鮮菌，用經(jīng)過校準(zhǔn)的VITEK2 DensiCHEK 制備相當(dāng)于麥?zhǔn)蠞岫?.50～0.63的均質(zhì)懸液，選取VITEK2 COMPACT（法國生物梅里埃）全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀配套的革蘭陰性菌鑒定卡和藥敏卡進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，儀器進(jìn)行6～18 h 的測試后根據(jù)其工作原理分析得出MIC 值。

K-B 紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer method, K-B）:挑選新鮮菌制備成0.5 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙海脽o菌棉拭蘸取菌液均勻涂布整個(gè)MH 平板表面，用無菌鑷子取藥敏紙片貼于平板中心表面，置35℃孵育18～24 h 后觀察結(jié)果。

1.4 觀察指標(biāo)

儀器稀釋法應(yīng)用光電比濁原理得到MIC 值，MIC 值≤1:判讀敏感，MIC 值≥4:判讀耐藥MIC 值=2:判讀中介。紙片擴(kuò)散法:用所測抑菌圈的大小報(bào)告敏感（S）、中介（I）、耐藥（R），抑菌環(huán)≥23:敏感，抑菌環(huán)20～22:中介，抑菌環(huán)≤19:耐藥。以上兩種方法學(xué)的藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)均是依照2023 年版的CLSI 判讀標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）由廣東省臨檢中心提供，藥敏質(zhì)控流程參照《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》完成。實(shí)驗(yàn)研究所有變形桿菌屬菌株數(shù)中，使用儀器稀釋法與使用手工K-B 進(jìn)行亞胺培南藥敏試驗(yàn)達(dá)到的判讀結(jié)果保持兩者一致性作為這兩種方法學(xué)結(jié)果的相符性，以及兩者藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果的吻合程度作為其結(jié)果的相符率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 208 株變形桿菌屬比例

據(jù)統(tǒng)計(jì)，208 株變形桿菌屬中，以普通變形桿菌占比為2.40%（5/208），奇異變形桿菌占比為87.98%（183/208），豪澤變形桿菌占比為9.62%（20/208）見表1。

表1 208 株變形桿菌屬比例

2.2 兩種方法相符率分析

208 株變形桿菌屬亞胺培南儀器稀釋法與紙片擴(kuò)散法藥敏結(jié)果相符比例，見表2。

表2 兩種方法相符比例

3 討論

分離出的變形桿菌屬208 株中，奇異變形桿菌達(dá)到183 株，占總菌株數(shù)的87.98%，其余包括有普通變形桿菌和豪澤變形桿菌，分別是5 株和20 株，占比分別為2.40%和9.62%。數(shù)據(jù)可見，3 種變形桿菌的亞胺培南藥敏結(jié)果均為耐藥或中介時(shí)兩種試驗(yàn)方法的相符率在50%～65%之間，藥敏結(jié)果均為敏感時(shí)相符率可達(dá)到90%以上。紙片擴(kuò)散法是藥敏試驗(yàn)中常用的一種試驗(yàn)方法，其方法操作簡單，效果明顯，可觀察度高，是適合國情的藥敏試驗(yàn)方法，我國已經(jīng)統(tǒng)一操作規(guī)程[9-11]，儀器稀釋法則使用自動(dòng)化檢測，計(jì)算機(jī)管理，能快速得出試驗(yàn)結(jié)果，但是對于誘導(dǎo)型細(xì)菌可能產(chǎn)生錯(cuò)誤，細(xì)菌生長情況亦不可查，存在其局限性[12]，根據(jù)《2023 年最新版本CLSIM-100 抗微生物藥物敏感試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)》機(jī)構(gòu)治療指南，感染預(yù)防程序或流行病學(xué)調(diào)查表示可能需要識(shí)別產(chǎn)碳青霉烯酶的腸桿菌科，包括變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根摩根菌屬等，對于碳青霉烯類藥物MIC 升高（中介或耐藥）時(shí)，對其藥敏結(jié)果提出不一定報(bào)告建議，指南指出亞胺培南對變形桿菌屬的MICs 趨向性更高（即MICS 處于中介或耐藥范圍），這些菌株可能存在非產(chǎn)碳青霉烯酶機(jī)制而導(dǎo)致亞胺培南MICs 升高[13-14]。以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)亦顯示儀器稀釋法檢測亞胺培南藥物敏感性呈現(xiàn)耐藥或中介時(shí)，紙片擴(kuò)散法對此呈現(xiàn)低相符性，造成這種情況的原因可能是這些菌株存在非產(chǎn)青霉烯酶機(jī)制或者其他誘導(dǎo)因素[15]，導(dǎo)致儀器對MIC 分析得出過高判讀結(jié)果，結(jié)論現(xiàn)象與指南論述一致，這屬于儀器稀釋法針對變形桿菌屬對亞胺培南抗菌藥物藥敏檢測的局限性，而K-B 可以對其藥敏試驗(yàn)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)驗(yàn)證，從而能夠適當(dāng)?shù)貙x器藥敏結(jié)果予以糾正，降低假耐藥性。

綜上所述，推進(jìn)抗菌藥物的合理使用需要多學(xué)科的相互協(xié)作，保證各科室工作質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室務(wù)必準(zhǔn)確提供檢測結(jié)果，從而幫助臨床正確使用抗菌藥物，提高療效，遏制耐藥蔓延，為患者的安全合理用藥保駕護(hù)航。