高安崇 陳 健 王大力 梁 爽 袁 寶

(1.吉林大學(xué)農(nóng)業(yè)實(shí)驗(yàn)基地,長(zhǎng)春 130062)(2.吉林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,長(zhǎng)春 130062)

自19世紀(jì)以來(lái),因?yàn)樨堅(jiān)诮馄蕦W(xué)、生理學(xué)以及對(duì)疾病的反應(yīng)方面與人類(lèi)相似,而被廣泛應(yīng)用在生理學(xué)、毒理學(xué)、免疫學(xué)及神經(jīng)科學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究[1]。英國(guó)短毛貓作為一個(gè)古老的貓品系,遺傳性狀穩(wěn)定,性情溫順,抗病性較強(qiáng),可做為實(shí)驗(yàn)用貓進(jìn)行培育。然而,貓獨(dú)立性較強(qiáng),性格敏感且矛盾,即需要一定的獨(dú)立空間,還需要適當(dāng)?shù)纳缃恍袨?這便給實(shí)驗(yàn)用貓的群體繁殖帶來(lái)很大的困難,一定程度上阻礙了實(shí)驗(yàn)用貓的規(guī)?；曫B(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了3種飼養(yǎng)方式,測(cè)定不同方式下實(shí)驗(yàn)用貓的生長(zhǎng)性狀及部分血液生理生化指標(biāo),在此基礎(chǔ)上分析出適合實(shí)驗(yàn)用貓的飼養(yǎng)方式,為英國(guó)短毛貓的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化做出參考和指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:7月齡雌性英國(guó)短毛貓18只,使用許可證號(hào)【SYXK(吉):2020-0004】,均為離乳幼貓時(shí)期從英國(guó)短毛貓繁殖中心購(gòu)買(mǎi),彼此之間無(wú)血緣關(guān)系,經(jīng)抗原檢測(cè)合格后,在吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心普通級(jí)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境內(nèi)單籠飼養(yǎng)至7月齡,期間正常免疫驅(qū)蟲(chóng)。

1.1.2飼養(yǎng)環(huán)境:實(shí)驗(yàn)室采用自然通風(fēng)和照明,室溫控制在22～26 ℃,相對(duì)濕度40%～60%。正式實(shí)驗(yàn)前,每只實(shí)驗(yàn)貓單籠飼養(yǎng),偶爾放出籠外活動(dòng),籠具規(guī)格1.08 m×0.70 m×0.65 m(0.49 m3);每個(gè)飼養(yǎng)籠內(nèi)放置單獨(dú)的喂料器、飲水器、貓砂盆,籠底置有清潔托盤(pán)。每日清理貓砂和籠內(nèi)衛(wèi)生1次。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組:18只實(shí)驗(yàn)用貓隨機(jī)分成3組,每組6只,分別采用籠養(yǎng)、定期放養(yǎng)以及圈養(yǎng)等3種方式進(jìn)行飼養(yǎng)?；\養(yǎng):每日除清理貓砂和添加水料外,與實(shí)驗(yàn)人員無(wú)任何接觸,全實(shí)驗(yàn)過(guò)程均在單獨(dú)籠內(nèi)。定期放養(yǎng):在單獨(dú)籠內(nèi)飼養(yǎng),每日上午10∶00—11∶00放出籠外活動(dòng)1 h,活動(dòng)期間允許實(shí)驗(yàn)貓之間有社交行為,但不與實(shí)驗(yàn)人員接觸。圈養(yǎng):將實(shí)驗(yàn)貓安置在30 m2的實(shí)驗(yàn)室內(nèi),室內(nèi)設(shè)有貓爬架、貓砂盆、自動(dòng)飲水器及喂料器等,實(shí)驗(yàn)階段每日除清理貓砂、添加水料以及打掃衛(wèi)生外,不再與實(shí)驗(yàn)人員有任何接觸,共同采食、飲水,完全處于圈養(yǎng)狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)總時(shí)間為56 d。

1.2.2飼料及飼喂方法:采用自由采食的飼喂方法,喂全價(jià)全階段貓糧(安肯);飲用水采用煮沸消毒冷卻的自來(lái)水,使用自動(dòng)飲水器每日24 h供應(yīng)。

1.2.3測(cè)定指標(biāo)與方法

1.2.3.1生長(zhǎng)發(fā)育性能測(cè)定:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前測(cè)量每只貓空腹體質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)期間每周周五上午9∶00進(jìn)行個(gè)體空腹稱(chēng)重,計(jì)算平均日增重,持續(xù)8周。

1.2.3.2采食量、飲水量測(cè)定:每天記錄貓糧和飲用水添加量和剩余量,計(jì)算出采食量和飲水量。

1.2.3.3血液樣本采集和處理:需兩名操作人員,一人保定實(shí)驗(yàn)貓,一人完成抽血操作。抽血過(guò)程需要實(shí)驗(yàn)貓?jiān)谇逍褷顟B(tài)下進(jìn)行,經(jīng)股靜脈采集全血液1 mL;取0.5 mL 全血經(jīng) EDTA-K2 抗凝后于2 h內(nèi)測(cè)定血液生理學(xué)指標(biāo);另取 0.5 mL 全血經(jīng)肝素抗凝后于2 h內(nèi)測(cè)定血液生化指標(biāo)。分別使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)量血常規(guī),全自動(dòng)生化分析儀測(cè)量生化指標(biāo)。

1.2.3.4血液生理生化指標(biāo)測(cè)定:測(cè)定22項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo):白細(xì)胞(WBC)、中性細(xì)胞比率(NE%)、淋巴細(xì)胞比率(LY%)、單核細(xì)胞比率(MO%)、嗜酸粒細(xì)胞比率(EO%)、嗜堿粒細(xì)胞比率(BA%)、中性細(xì)胞(NE)、淋巴細(xì)胞(LY)、單核細(xì)胞(MO)、嗜酸粒細(xì)胞(EO)、嗜堿粒細(xì)胞(BA)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、血小板(PLT)、血小板分布寬度(PDW)、平均血小板體積(MPV)、血小板體積(PCT)。測(cè)定14項(xiàng)血液生化指標(biāo):丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白蛋白比(A/G)、總膽紅素(T-BAIL)、肌酐(CR)、尿素氮(Urea)、尿酸(UA)、總膽固醇(T-CH)、三酰甘油(TG)、鈣離子(Ca)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 體質(zhì)量測(cè)量結(jié)果

根據(jù)不同飼養(yǎng)方式英國(guó)短毛貓?bào)w質(zhì)量測(cè)量結(jié)果分析表明(表1),飼養(yǎng)方式的不同不會(huì)對(duì)7～9月齡實(shí)驗(yàn)貓?bào)w質(zhì)量造成顯著影響(P>0.05)。

表1 不同飼養(yǎng)方式對(duì)實(shí)驗(yàn)貓?bào)w質(zhì)量的影響Table 1 Effect of different feeding methods on the

2.2 日增重測(cè)量結(jié)果

根據(jù)不同飼養(yǎng)方式對(duì)英國(guó)短毛貓日增重的影響結(jié)果分析表明(表2),第1周,定期放養(yǎng)組顯著高于圈養(yǎng)組(P<0.05);第4周,定期放養(yǎng)組顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);第6周,圈養(yǎng)組顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);第8周,定期放養(yǎng)組顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);在第4周之后,圈養(yǎng)組和籠養(yǎng)組均出現(xiàn)了不同程度的負(fù)增長(zhǎng),其中籠養(yǎng)組在第4、6、7、8周的日增重都是負(fù)值,表明體質(zhì)量下降;第2、3、5、7周各實(shí)驗(yàn)組之間日增重?zé)o明顯差異(P>0.05)。

表2 不同飼養(yǎng)方式對(duì)實(shí)驗(yàn)貓平均日增重的影響Table 2 Effect of different feeding methods on average daily gain of experimental

2.3 日均采食量

根據(jù)不同飼養(yǎng)方式對(duì)英國(guó)短毛貓日均采食量的影響結(jié)果分析表明(表3),第1周,定期放養(yǎng)組顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);第2周,定期放養(yǎng)組顯著高于圈養(yǎng)組和籠養(yǎng)組(P<0.01);其他實(shí)驗(yàn)周期采食量差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同飼養(yǎng)方式對(duì)實(shí)驗(yàn)貓日均采食量的影響Table 3 Effect of different feeding methods on average daily feed intake of experimental

2.4 日均飲水量

根據(jù)不同飼養(yǎng)方式對(duì)英國(guó)短毛貓日均采食量的影響結(jié)果分析表明(表4),第4周,定時(shí)放養(yǎng)組的日均飲水量顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);其他時(shí)間各組別之間差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同飼養(yǎng)方式對(duì)實(shí)驗(yàn)貓日均飲水量的影響Table 4 Effect of different feeding methods on average daily drinking water volume of

2.5 相關(guān)性分析

根據(jù)各生長(zhǎng)性能之間的相關(guān)性分析得出,體質(zhì)量與日均采食量呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)(r=0.538,P<0.01),與日均飲水量呈顯著正相關(guān)(r=0.200,P<0.05);平均日增重與日均采食量呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)(r=0.340,P<0.01),與日均飲水量呈極顯著正相關(guān)(r=0.254,P<0.01);日均采食量與日均飲水量呈極顯著正相關(guān)(r=0.717,P<0.01)。

2.6 血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

淋巴細(xì)胞比率(LY%)檢測(cè)結(jié)果顯示,圈養(yǎng)組極顯著低于定期放養(yǎng)組和籠養(yǎng)組(P<0.01);中性細(xì)胞數(shù)(NE)檢測(cè)結(jié)果顯示,圈養(yǎng)組顯著高于籠養(yǎng)組(P<0.05);血小板分布寬度(PDW)檢測(cè)結(jié)果顯示,圈養(yǎng)組顯著低于定期放養(yǎng)組和籠養(yǎng)組(P<0.05);其他指標(biāo)各組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)(表5)。

表5 不同飼養(yǎng)方式下實(shí)驗(yàn)貓血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 5 Measurement results of hematology indexes of experimental cats in different feeding

2.7 血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

總膽固醇(T-CH)檢測(cè)結(jié)果顯示,圈養(yǎng)組顯著低于定期放養(yǎng)組和籠養(yǎng)組(P<0.05),其他指標(biāo)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表6)。

表6 不同飼養(yǎng)方式下實(shí)驗(yàn)貓血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 6 Measurement results of blood biochemical indexes of experimental cats in different feeding

3 討論

動(dòng)物采食和能量代謝受到運(yùn)動(dòng)和情緒等行為的影響[2],不同的飼養(yǎng)方式讓實(shí)驗(yàn)貓的運(yùn)動(dòng)量、生活習(xí)性以及情緒調(diào)節(jié)等方面都發(fā)生了改變,從而對(duì)它們部分生長(zhǎng)性能和血液生理生化指標(biāo)產(chǎn)生了影響。

本實(shí)驗(yàn)使用的是7～9月齡的英國(guó)短毛貓,在身體發(fā)育上,基本已經(jīng)達(dá)到性成熟期[3],機(jī)體發(fā)育已經(jīng)相對(duì)緩慢,因此在短期內(nèi),不同的飼養(yǎng)方式不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)貓?bào)w質(zhì)量產(chǎn)生過(guò)大的影響。當(dāng)運(yùn)動(dòng)過(guò)量,使機(jī)體長(zhǎng)期處于能量攝入與消耗負(fù)平衡時(shí),體質(zhì)量就會(huì)降低[4],從實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)上看,實(shí)驗(yàn)第1周,圈養(yǎng)組實(shí)驗(yàn)貓就處于能量負(fù)平衡狀態(tài),因?yàn)閼?yīng)實(shí)驗(yàn)要求加大了該組貓的活動(dòng)空間和自由程度,使得這些貓因?yàn)槭ゼs束而興奮,長(zhǎng)時(shí)間處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài),為此而消耗了過(guò)多的能量,另外通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn),由于貓的群居性較差,在圈養(yǎng)后,各貓之間也常有爭(zhēng)斗,并伴有護(hù)食行為,使部分貓產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),這也可能是導(dǎo)致一些體弱貓采食量和飼料利用率下降的原因,相比較而言,定期放養(yǎng)組的貓雖然也被放出籠外,運(yùn)動(dòng)量增大,但畢竟活動(dòng)時(shí)間有限(只有1 h),而當(dāng)它們被抓回籠后,便會(huì)立刻進(jìn)食和飲水,獲得充分的休息,滿(mǎn)足了貓需要大量時(shí)間休息和睡眠的生理需求[5],有利于它們體質(zhì)量的增加,因此實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的第1周,定期放養(yǎng)組平均日增重要顯著高于圈養(yǎng)組(P<0.05)。而隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,各組貓逐漸適應(yīng)了新的飼養(yǎng)環(huán)境,不再過(guò)于興奮,運(yùn)動(dòng)量下降,圈養(yǎng)組貓群也建立了群體秩序,使組內(nèi)各貓回歸正常飲食和休息,因此自第3周開(kāi)始,圈養(yǎng)組和定期放養(yǎng)組在生長(zhǎng)性能指標(biāo)上并沒(méi)有表現(xiàn)出顯著差異?；\養(yǎng)組的實(shí)驗(yàn)貓,因?yàn)榛\內(nèi)空間有限,缺乏運(yùn)動(dòng),經(jīng)常嗜睡,對(duì)食物欲望的表現(xiàn)也不積極,從表2～4可以看出,該組貓?bào)w質(zhì)量增長(zhǎng)速度與另外兩組相比增長(zhǎng)較慢,甚至在實(shí)驗(yàn)的第4周開(kāi)始出現(xiàn)了體質(zhì)量的負(fù)增長(zhǎng),而在日均采食量和日均飲水量方面,也是3組中最少的,可以看出貓喜歡自由自在的生活,長(zhǎng)時(shí)間籠養(yǎng)會(huì)限制它們的天性[6],此外,陳鴻婷等在觀察福利飼養(yǎng)和籠具飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用貓指標(biāo)差異時(shí)發(fā)現(xiàn),福利組腎上腺素和多巴胺兩項(xiàng)指標(biāo)要顯著低于對(duì)照組(P<0.05),說(shuō)明籠養(yǎng)的貓交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)更敏感,更容易進(jìn)入應(yīng)激狀態(tài)[1]。在研究應(yīng)激動(dòng)物模型時(shí)發(fā)現(xiàn),經(jīng)常受到慢應(yīng)激的小鼠體質(zhì)量要顯著低于對(duì)照組(P<0.05),且隨著實(shí)驗(yàn)的延長(zhǎng)體質(zhì)量也出現(xiàn)了下降的現(xiàn)象[7]。有研究發(fā)現(xiàn),慢應(yīng)激處理的大鼠更容易產(chǎn)生厭食癥[8],因此當(dāng)實(shí)驗(yàn)用貓?jiān)诨\中長(zhǎng)期飼養(yǎng)時(shí),容易導(dǎo)致采食量和體質(zhì)量的下降。

血常規(guī)指標(biāo)能夠反映出動(dòng)物機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)的功能狀態(tài)[7],淋巴細(xì)胞增多會(huì)促進(jìn)機(jī)體特異性免疫[8],而LY%低則意味著圈養(yǎng)組實(shí)驗(yàn)貓的免疫能力要低于籠養(yǎng)組和定期放養(yǎng)組,同時(shí)圈養(yǎng)組NE高于籠養(yǎng)組和定期放養(yǎng)組,其中與籠養(yǎng)組之間具有顯著差異(P<0.05),這可能與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān),因?yàn)榘准?xì)胞分布常被用來(lái)評(píng)估機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng):中性粒細(xì)胞(N)增加、淋巴細(xì)胞(L)降低造成N∶L比值增加,這種現(xiàn)象在大部分脊椎動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)中均可觀察到[1],也有可能與炎性反應(yīng)有關(guān),但從PDW指標(biāo)來(lái)推斷,圈養(yǎng)組顯著低于籠養(yǎng)組和定期放養(yǎng)組(P<0.05),該指標(biāo)對(duì)機(jī)體的炎性反應(yīng)狀態(tài)呈正相關(guān)[9],因此可以初步排除炎性反應(yīng)的可能性,造成LY%和NE指標(biāo)差異的主要原因還是應(yīng)激反應(yīng),分析可能由于采血時(shí),抓捕圈養(yǎng)組實(shí)驗(yàn)貓的動(dòng)作過(guò)于激烈而致其產(chǎn)生嚴(yán)重應(yīng)激。在飲食成分相同的情況下,長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)能夠有效降低血液中總膽固醇的含量[10],圈養(yǎng)組實(shí)驗(yàn)貓因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)時(shí)間較長(zhǎng),所以其血液中T-CH的含量要顯著低于定期放養(yǎng)組和籠養(yǎng)組(P<0.05),單從該指標(biāo)來(lái)看,圈養(yǎng)組的貓會(huì)更為健康。

通過(guò)以上研究可以初步認(rèn)定:圈養(yǎng)方式更容易滿(mǎn)足于貓的天性,但不適合經(jīng)常抓捕,可做繁殖使用;籠養(yǎng)方式適合對(duì)實(shí)驗(yàn)貓短期飼養(yǎng),至少在1～2月內(nèi),不會(huì)對(duì)貓產(chǎn)生太大負(fù)面影響,關(guān)鍵能節(jié)省飼養(yǎng)空間和勞動(dòng)力;如果需要長(zhǎng)期飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)貓,綜合考慮,定期放養(yǎng)方式比較適合,相對(duì)能夠更滿(mǎn)足貓的心理和生理需求。