蘇舒 呂昕 祁亮 韋敏 劉寶瑞 王立峰

肺癌是全世界癌癥相關(guān)死亡的主要原因，每年全球約有160萬人死于肺癌[1,2]。根據(jù)病理類型，肺癌主要分為兩種亞型：非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）（占80%-85%）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）。臨床研究[3,4]表明，晚期肺癌患者接受程序性死亡受體1（programmed cell death 1,PD-1）或程序性死亡配體1（programmed cell death ligand 1,PD-L1）抗體治療可改善臨床結(jié)局，與單純化療相比，可改善臨床反應(yīng)率、生存率，并減少治療相關(guān)的不良反應(yīng)。近十年來，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（immune checkpoint inhibitors,ICIs）已成為治療肺癌特別是NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)治療方式。然而，多項(xiàng)抗PD-1治療的臨床試驗(yàn)觀察結(jié)果[5-7]也表明，無論P(yáng)D-L1表達(dá)如何，僅有約15%-25%的肺癌患者對(duì)抗PD-1單抗單藥治療有反應(yīng)。

有一些預(yù)測性生物標(biāo)志物有助于發(fā)現(xiàn)可能通過PD-1/PD-L1免疫治療獲益的腫瘤患者。已有研究[8]證明生物標(biāo)志物PD-L1以及腫瘤突變負(fù)荷（tumor mutational burden,TMB）是腫瘤免疫治療的預(yù)測性標(biāo)志物。然而，在NSCLC中，腫瘤組織中表達(dá)的PD-L1是迄今為止唯一被認(rèn)可的療效預(yù)測因子[9]。這對(duì)于選擇有治療反應(yīng)的患者方面具有很大限制，臨床實(shí)踐中在PD-L1表達(dá)陰性的情況下也有很大一部分患者對(duì)ICIs有反應(yīng)。除此之外，大多數(shù)患者將同時(shí)或序貫接受包括化療、放療及靶向治療等在內(nèi)的多種治療，因此PD-L1的表達(dá)模式也可能受到這些因素的極大影響。目前，包括TMB、腫瘤微環(huán)境、組織基因表達(dá)譜[10]等在內(nèi)的其他預(yù)測性生物標(biāo)志物仍在研究中，然而，這些與腫瘤組織相關(guān)的標(biāo)志物成本高昂且需通過有創(chuàng)操作獲取腫瘤組織，實(shí)踐具有一定難度。因而，迫切需要能更便捷獲取的外周血生物標(biāo)志物來幫助識(shí)別有反應(yīng)的肺癌患者。前期有研究[11,12]表明，一部分外周血標(biāo)志物可能是抗PD-1/PD-L1治療的潛在預(yù)后因素，包括血清標(biāo)志物，如中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比率（neutrophil-lymphocyte ratio,NLR）、血小板-淋巴細(xì)胞比率（platelet-lymphocyte ratio,PLR）、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)（absolute monocyte count,AMC）、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（absolute eosinophil count,AEC）或血清生物標(biāo)志物如乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）、血漿白蛋白（albumin,ALB）或C反應(yīng)蛋白（C reactive protein,CRP）。此外，外周血PD-1+T細(xì)胞的T細(xì)胞受體（T cell receptors,TCR）譜多樣性預(yù)測了癌癥患者免疫治療療效[13]。有研究[14]還表明，治療前外周血血清白介素（interleukin,IL）等細(xì)胞因子水平也可能是預(yù)測抗PD-1治療腫瘤患者的臨床療效和生存率的有效指標(biāo)。

本研究旨在探索與肺癌患者免疫治療臨床反應(yīng)相關(guān)的外周血免疫指標(biāo)，從而更便捷、高效地發(fā)現(xiàn)能通過PD-1/PD-L1抑制劑治療獲益的肺癌人群。

1 資料和方法

1.1 患者資料 本項(xiàng)單中心研究納入了61例2020年3月至2021年12月在南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院腫瘤中心治療的肺癌患者。患者平均年齡為60歲，男性46例，女性15例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）美國東部腫瘤協(xié)作組（Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG）評(píng)分為0-2分，免疫治療周期數(shù)≥2個(gè)；（2）IIIA-IV期不可切除非鱗狀NSCLC患者、鱗狀NSCLC和SCLC患者；（3）自愿接受免疫治療前后的血液采集，用于血清細(xì)胞因子檢測和T細(xì)胞表型分析。排除標(biāo)準(zhǔn)為活動(dòng)性自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病或全身免疫抑制使用期間?；颊呋€特征見表1。該回顧性觀察研究經(jīng)過鼓樓醫(yī)院研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

表1 患者基線特征以及臨床應(yīng)答情況（n=61）Tab 1 Baseline characteristics and clinical response of patients (n=61)

1.2 治療和研究評(píng)估 患者每3周接受含鉑標(biāo)準(zhǔn)方案的化療，包括白蛋白紫杉醇（260 mg/m2）或培美曲塞（500 mg/m2）聯(lián)合卡鉑［曲線下面積（area under the curve,AUC）=5］、洛鉑（30 mg/m2）或順鉑（75 mg/m2）以及PD-1/PD-L1抗體（帕博利珠單抗200 mg、納武利尤單抗3 mg/kg、卡瑞利珠單抗200 mg、信迪利單抗200 mg、替雷利珠單抗200 mg、阿特珠單抗1200 mg、度伐利尤單抗1200 mg）治療。對(duì)于維持治療，根據(jù)病理表型，患者使用PD-1/PD-L1抗體治療，使用或不使用白蛋白紫杉醇或培美曲塞維持。根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST）1.1版，每2個(gè)治療周期評(píng)估一次臨床療效。標(biāo)準(zhǔn)為：（1）完全緩解（complete response,CR）：靶病灶完全消退；（2）部分緩解（partial response,PR）：總靶病灶減少30%以上；（3）疾病穩(wěn)定（stable disease,SD）：總靶病灶減少少于30%或增加少于20%；（4）疾病進(jìn)展（progressive disease,PD）：總靶病灶增加20%以上；（5）疾病控制率（disease control rate,DCR）：臨床應(yīng)答或穩(wěn)定的比例（CR+PR+SD）。

1.3 樣品采集和流式細(xì)胞術(shù) 在首次影像評(píng)估的同時(shí)采集61例肺癌患者PD-1/PD-L1抗體治療前后的外周血，進(jìn)行外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）分離和血清的分離，后續(xù)進(jìn)行細(xì)胞因子檢測以及表面分子流式細(xì)胞檢測。選擇淋巴細(xì)胞分泌上清中Th1以及Th2型細(xì)胞因子，代表細(xì)胞免疫應(yīng)答以及體液免疫應(yīng)答。具體實(shí)驗(yàn)方法如下：在免疫治療前一天收集10 mL血液樣本，然后在2 h內(nèi)將樣品轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離。1200 rpm離心7 min后收集上清，加入抗體偶聯(lián)beads制備混合樣品溶液，采用CBA（Cytometric Bead Array,Biolegend,San Diego,CA,USA）分析試劑盒檢測IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、干擾素γ（interferon gamma,IFN-γ）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）。細(xì)胞沉淀采用PBS重懸加入Ficoll Plaque（GE,Chicago,IL,USA）離心純化，制備PBMC懸液，并用CD3、CD4、CD8、CD274、CD279、TIGT、CD27、CD11b、CD33、CD45RO、CD62L、CD127和CD38（Biolegend,San Diego,CA,USA）特異性的熒光流式抗體標(biāo)記以進(jìn)行流式細(xì)胞分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 使用GraphPad Prism 9軟件和R語言進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。通過t檢驗(yàn)以及非參數(shù)Wilcoxon檢驗(yàn)分析細(xì)胞因子水平、T細(xì)胞表型和臨床應(yīng)答之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者血清IFN-γ、TNF-α和IL-5水平對(duì)抗PD-1治療的預(yù)測價(jià)值 收集61例接受PD-1或PD-L1單抗治療的晚期肺癌患者治療前的血清，對(duì)IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、IFN-γ和TNF-α進(jìn)行檢測和分析。根據(jù)DCR中臨床療效的定義，PR+SD（n=49）定義為有效，PD定義為無效（n=12）。治療前外周血中IFN-γ（P=0.023）、TNF-α（P=0.007）和IL-5（P=0.002）水平DCR組高于PD組。而兩組間血清中的其余細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-13水平與PD-1或PD-L1單抗治療的療效差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（圖1）。這些結(jié)果表明，肺癌患者體內(nèi)預(yù)先存在的較高水平的Th1型細(xì)胞因子，如IFN-γ和TNF-α以及Th2型細(xì)胞因子IL-5，可能是預(yù)測PD-L1/PD-1阻斷治療獲益的良好指標(biāo)。

圖1 治療基線外周血清細(xì)胞因子水平情況與臨床應(yīng)答相關(guān)性。A-H：肺癌患者免疫治療基線外周血細(xì)胞因子分泌水平情況及與臨床應(yīng)答相關(guān)性；I: 肺癌患者免疫治療基線外周血細(xì)胞因子分泌水平在各療效組人群中的熱圖分析。Fig 1 Correlation between baseline peripheral serum cytokine levels and clinical response in lung cancer patients.A-H: Correlation between baseline peripheral blood cytokine secretion levels and clinical response in lung cancer patients with immunotherapy;I: Heatmap analysis of baseline peripheral blood cytokine secretion levels in lung cancer patients in each efficacy group population.DCR: disease control rate;IFN-γ:interferon gamma;TNF-α: tumor necrosis factor α;IL: interleukin;PD: progressive disease;ns: not signiticant.*: P＜0.05;**: P＜0.005.

2.2 治療后血清IL-5和IL-10水平升高提示抗PD-1治療臨床獲益 通過評(píng)估Th1/Th2細(xì)胞因子，包括IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、IFN-γ和TNF-α在治療前后表達(dá)變化情況表明，在有效組（DCR）的患者中，免疫治療后血清中IL-5（P=0.0027）和IL-10（P=0.0208）水平較治療前明顯升高。然而，其他細(xì)胞因子，包括IFN-γ（P=0.1775）和TNF-α（P=0.1884），在DCR組患者中，治療后表達(dá)水平?jīng)]有顯著上調(diào)。同樣，IL-2（P=0.1300）、IL-4（P=0.1829）、IL-6（P=0.4911）和IL-13（P=0.0879）在DCR組患者血清中并沒有檢測到顯著的變化（圖2）。

圖2 疾病控制組肺癌患者免疫治療前后外周血清細(xì)胞因子水平變化情況。A：治療前后IFN-γ水平情況；B：治療前后TNF-α水平情況；C：治療前后IL-5水平情況；D：治療前后IL-13水平情況；E：治療前后IL-2水平情況；F：治療前后IL-6水平情況；G：治療前后IL-10水平情況；H：治療前后IL-4水平情況。Fig 2 Changes in peripheral serum cytokine levels in lung cancer patients in the disease control group before and after immunotherapy.A: IFN-γ levels before and after treatment;B: TNF-α levels before and after treatment;C: IL-5 levels before and after treatment;D: IL-13 levels before and after treatment;E: IL-2 levels before and after treatment;F: IL-6 levels before and after treatment;G: IL-10 levels before and after treatment;H: IL-4 levels before and after treatment.PRE: pre-therapy;PST: post-therapy.*: P＜0.05.

2.3 外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)的減少與抗PD-1阻斷的疾病進(jìn)展相關(guān) 在DCR組隊(duì)列（n=49）中，治療前后淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)沒有差異（P=0.2911）。而在PD組（n=12）治療后，淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)顯著降低（P=0.023）（圖3）。這些結(jié)果表明，PD-1抗體治療后外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)的減少與疾病進(jìn)展相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)也有助于在影像評(píng)估前盡早識(shí)別未能從免疫治療中獲益的患者。

圖3 治療前后外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)變化情況。A: 疾病控制組治療前后淋巴細(xì)胞總計(jì)數(shù)情況；B: 疾病進(jìn)展組治療前后淋巴細(xì)胞總計(jì)數(shù)情況；C：不同療效組淋巴細(xì)胞總計(jì)數(shù)變化情況瀑布圖。Fig 3 Changes in peripheral blood lymphocyte count before and after treatment.A: Total lymphocyte count before and after treatment in the disease control group;B: Total lymphocyte count before and after treatment in the disease progression group;C: Waterfall plot of total lymphocyte count changes in different therapeutic groups.*: P＜0.05.

2.4 抗PD-1阻斷劑對(duì)T細(xì)胞表型和臨床反應(yīng)的預(yù)測價(jià)值對(duì)61例肺癌患者在接受免疫治療基線時(shí)PBMC中的CD4+和CD8+T細(xì)胞各亞群進(jìn)行了流式細(xì)胞分析。通過分離PBMC并用流式抗體染色，包括活化和共刺激分子標(biāo)志物（如CD27、CD38）、抑制性分子標(biāo)志物（PD-1、PD-L1、TIGT）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞標(biāo)志物（CD25、CD127）以及記憶和效應(yīng)標(biāo)志物（CD45RO、CD62L）評(píng)估DCR組和PD組患者T細(xì)胞的基線表型特征是否不同。如圖4所示，兩組間CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞上的大多數(shù)標(biāo)志物沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在DCR組中，CD4+T細(xì)胞上CD45RO+CD62L+（中央記憶表型）/CD45RO+CD22L-（效應(yīng)記憶表型）的比率有高于PD組的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.23）。除此之外，通過分析T細(xì)胞表面活化和共刺激標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)CD8+CD27+T細(xì)胞的百分比較高與臨床反應(yīng)答較差有關(guān)聯(lián)（P=0.0096）。然而，基線CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞上抑制性分子標(biāo)志物PD-1、PD-L1或TIGT在DCR組和PD組的患者之間并未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這些結(jié)果也表明，使用T細(xì)胞特定表型來確定PD-1/PD-L1抑制劑對(duì)肺癌患者的預(yù)后仍極具挑戰(zhàn)。

圖4 不同療效組免疫治療基線外周血T細(xì)胞亞群組成情況。A：CD4+ T細(xì)胞以及CD8+ T細(xì)胞表面各亞群表達(dá)情況；B：CD4+ T細(xì)胞以及CD8+ T細(xì)胞CD27分子表達(dá)情況；C：CD4+ T細(xì)胞以及CD8+ T細(xì)胞記憶以及效應(yīng)亞群表達(dá)情況；D：CD4+中央記憶性T細(xì)胞與效應(yīng)記憶性T細(xì)胞比例。Fig 4 Composition of peripheral blood T cell subpopulations at the baseline of immunotherapy in different efficacy groups.A: Expression of CD4+T cells and CD8+ T cell surface subpopulations;B: CD4+ T cells and CD8+ T cell CD27 molecule expression;C: Memory and effector subpopulations expression of CD4+ T cells and CD8+ T cells;D: Ratio of CD4+ central memory T cells to effector memory T cells.**: P＜0.05.

3 討論

近年來，免疫療法在肺癌患者的治療中得到了廣泛的應(yīng)用。然而，仍有一些患者對(duì)免疫治療存在原發(fā)性耐藥，或者在免疫治療過程中出現(xiàn)獲得性耐藥。PD-1阻斷療法的耐藥機(jī)制尚未得到很好的闡明，可能涉及多種因素，包括異常腸道微生物組成以及抗原呈遞功功能的缺失等。因而，需要有生物標(biāo)志物以便能有效地預(yù)測肺癌患者對(duì)PD-1阻斷治療的療效[15-17]。腫瘤組織PD-L1的表達(dá)強(qiáng)弱是目前已明確的NSCLC免疫治療的預(yù)后因素。除外PD-L1，其他一些分子標(biāo)志物包括TMB、腫瘤微環(huán)境、組織基因表達(dá)譜等仍在研究中，然而，這些標(biāo)志物需通過有創(chuàng)操作獲取腫瘤組織，成本較高且在動(dòng)態(tài)監(jiān)測方面具有一定的局限性。因此，迫切需要外周血生物標(biāo)志物以便能更快捷、有效地預(yù)測肺癌患者對(duì)PD-1阻斷治療的療效。

本研究結(jié)果顯示，肺癌患者外周血中預(yù)先存在較高水平的Th1細(xì)胞因子，如IFN-γ、TNF-α和Th2細(xì)胞因子IL-5，可能提示對(duì)PD-L1/PD-1阻斷治療有更好的臨床應(yīng)答。從機(jī)制上來說IFN-γ是通過增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞以及T細(xì)胞的細(xì)胞毒性和增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞功能等幾方面來調(diào)節(jié)天然免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答來增強(qiáng)患者抗腫瘤免疫反應(yīng)[18]。同樣，TNF-α在腫瘤微環(huán)境中通過招募和激活中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，從而發(fā)揮抗腫瘤免疫應(yīng)答的作用[19]。既往有研究[20]表明在免疫治療前和治療開始后3個(gè)月，IFN-γ和TNF-α細(xì)胞因子水平的增加與NSCLC免疫治療反應(yīng)的改善和總生存期（overall survival,OS）延長有關(guān)。而本研究結(jié)果表明，預(yù)先存在的細(xì)胞免疫應(yīng)答可能有助于PD-1抗體發(fā)揮較強(qiáng)和持久的免疫反應(yīng)。腫瘤免疫主要由Th1介導(dǎo)的細(xì)胞免疫介導(dǎo)，這能解釋為什么較高的IFN-γ和TNF-α細(xì)胞因子水平與更好的預(yù)后相關(guān)。同時(shí)，本研究也觀察到，預(yù)先存在較高水平的IL-5與更好的臨床應(yīng)答相關(guān)。IL-5主要由Th2淋巴細(xì)胞和2型固有淋巴細(xì)胞（group 2 innate lymphoid cell,ILC2）產(chǎn)生。它可以通過促進(jìn)B細(xì)胞的分化和生長來增加抗體分泌，并增強(qiáng)支持抗體應(yīng)答的體液免疫應(yīng)答[21]，從而更好地協(xié)同細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮作用。本研究還發(fā)現(xiàn)治療后患者血清IL-5和IL-10水平的升高提示與抗PD-1單克隆抗體治療的療效有關(guān)。這可能提示，細(xì)胞因子水平的動(dòng)態(tài)變化與治療的客觀反應(yīng)率也有一定的關(guān)聯(lián)。此外，研究還觀察到在免疫治療過程中腫瘤進(jìn)展患者的總淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)明顯減少，這也有助于我們?cè)缭谟跋裨u(píng)估之前識(shí)別那些未能從免疫治療中獲益的人群。

腫瘤微環(huán)境中的CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞免疫在介導(dǎo)持久抗腫瘤反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。研究[22]表明，外周血中的中央記憶CD4+T細(xì)胞可以作為惡性黑色素瘤患者對(duì)PD-1阻斷治療臨床反應(yīng)的預(yù)測指標(biāo)。本研究觀察到CD4+T細(xì)胞上CD45RO+CD62L+（中央記憶表型）/CD45RO+CD62L-（效應(yīng)記憶表型）比率較高的患者與PD-1阻斷的臨床療效有一定關(guān)聯(lián)，但無明顯差異，這可能是由于樣本數(shù)相對(duì)較少、數(shù)據(jù)偏倚等所致，后續(xù)需要更大樣本量的驗(yàn)證。此前的研究表明，CD27配體CD70表達(dá)于樹突狀細(xì)胞表面，是CD8+T細(xì)胞有效活化和發(fā)揮抗腫瘤免疫應(yīng)答所必需的[23-28]。然而，本研究基線時(shí)外周血中CD8+CD27+T細(xì)胞比例與臨床反應(yīng)呈負(fù)相關(guān)。但事實(shí)上，之前有研究[29]通過供體淋巴細(xì)胞過繼輸注的動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞因持續(xù)暴露于抗原后因活化而耗盡，通過激動(dòng)劑抗CD27和抗PD-L1的組合可以實(shí)現(xiàn)短暫的CD8+T淋巴細(xì)胞功能恢復(fù)。這可能是耗竭的CD8+CD27+細(xì)胞對(duì)PD-1阻斷缺乏應(yīng)答的原因之一。

有研究[30-34]表明在CD8+T細(xì)胞表面未檢測到明顯的與治療或應(yīng)答相關(guān)表型差異，包括PD-1以及PD-L1，這和本研究結(jié)果相一致。然而，也有研究[35]表明，PD-1阻斷治療后PD-1+CD8+T細(xì)胞的早期增殖與臨床應(yīng)答相關(guān)，外周血細(xì)胞上PD-1的表達(dá)可能提示腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的富集。針對(duì)PD-L1在外周血細(xì)胞上的表達(dá)，有一項(xiàng)對(duì)32例接受PD-L1/PD-1阻斷治療的NSCLC患者的研究結(jié)果[36]提示在應(yīng)答者和無應(yīng)答者之間PD-L1+CD11b+髓系細(xì)胞群體的百分比存在顯著差異，基線時(shí)PD-L1+CD11b+細(xì)胞百分比＞30%的患者顯示出更高的臨床應(yīng)答率。然而，本研究并未觀察到外周血中CD33+CD11b+PD-L1+細(xì)胞的表達(dá)對(duì)PD-1/PD-L1阻斷治療有預(yù)測價(jià)值，這也提示在分析外周血中的這些標(biāo)志物時(shí)，應(yīng)考慮比腫瘤環(huán)境更復(fù)雜的詳細(xì)的分子標(biāo)志物組合以及門控分析策略。此外，除了PD-1或PD-L1細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量外，腫瘤抗原特異性免疫細(xì)胞的TCR多樣性和特異性也可能在預(yù)測中發(fā)揮重要作用。已有研究[31,37,38]表明，外周PD-1+CD8+T細(xì)胞的TCR多樣性和新抗原特異性CD8+T細(xì)胞在預(yù)測抗PD-1/PD-L1對(duì)于NSCLC治療的臨床療效方面有一定價(jià)值，這也為我們后續(xù)進(jìn)一步的深入研究提供了一定的思路。

本研究有幾個(gè)局限性。首先，這是一項(xiàng)回顧性的單中心研究，入選的患者數(shù)量相對(duì)較少，治療前后配對(duì)的患者樣本量有限，并且入組患者包括鱗癌、腺癌、SCLC等多種肺癌亞型，其生物學(xué)特性有著一定差異，未進(jìn)一步分析血清指標(biāo)的變化和不同病理亞型的肺癌療效之間的相關(guān)性，我們?cè)诤罄m(xù)的研究中也將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以及進(jìn)行亞組分析進(jìn)一步明確；第二，本研究將所有接受PD-1/PD-L1抗體治療的患者納入研究，其中包括大部分聯(lián)合化療的患者，但并沒有設(shè)立僅接受化療的對(duì)照組。因而，細(xì)胞因子水平或免疫細(xì)胞表型可能受化療藥物的影響，并不能純粹歸因于免疫治療；第三，這些參數(shù)的截?cái)啵╟ut-off）值沒有進(jìn)一步確定，不同的cut-off值可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響；第四，該研究包括了一部分SCLC患者，其生物學(xué)性質(zhì)以及對(duì)免疫治療的應(yīng)答模式與NSCLC也有著較大差異，可能會(huì)對(duì)研究結(jié)果造成一定影響和偏倚；第五，在這項(xiàng)研究中，1/3的患者作為二線或二線后治療接受PD-1抑制劑，因而基線血液標(biāo)志物可能受到先前治療（包括化療、靶向或其他治療）的影響。盡管存在這些局限性，這項(xiàng)研究仍是首次確定晚期肺癌患者基線Th1/Th2細(xì)胞因子水平和抗PD-1/PD-L1阻斷性抗體治療療效有關(guān)，并初步探索了這些細(xì)胞因子在外周血的動(dòng)態(tài)變化趨勢與免疫治療療效的關(guān)系。

總之，本研究初步表明，肺癌患者基線血清IFN-γ、TNF-α和IL-5水平可以預(yù)測抗PD-1阻斷治療的臨床療效，且治療后IL-5和IL-10的上調(diào)可能預(yù)示更好的臨床應(yīng)答，而免疫治療后外周血總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的減少可能預(yù)示預(yù)后的不佳。此外，CD4+CD45RO+CD62L+/CD4+CD45RO+CD62L-亞群的比率較高似乎與較好的臨床應(yīng)答有關(guān)。大型前瞻性研究有待進(jìn)一步闡明這些生物標(biāo)志物的價(jià)值。相信這些外周血生物標(biāo)志物可以幫助臨床中更早期識(shí)別能夠從抗PD-1/PD-L1免疫治療中獲益的優(yōu)勢人群。

Competing interests

The authors declare that they have no competing interests.

Author contributions

Wang LF and Liu BR conceived and designed the study.Su S,Lv X and Wei M performed the experiments and analyzed the data.Qi L contributed analysis tools.All the authors had access to the data.All authors read and approved the final manuscript as submitted.