郭姍姍

(東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

引言

赤霉素(GAs)作為植物6大激素之一，參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的許多過(guò)程，能夠促進(jìn)種子的萌發(fā)、莖的伸長(zhǎng)、葉的膨大、花的發(fā)育以及果實(shí)的成熟。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有136種GAs，其中有4種具有生物活性，分別為GA1、GA3、GA4和GA7。在高等植物的種子、果實(shí)、伸長(zhǎng)的莖端和根尖中能夠合成。赤霉素的合成和代謝途徑受到多種因素共同調(diào)節(jié)，如環(huán)境，植物發(fā)育，激素含量和內(nèi)源酶的含量。研究發(fā)現(xiàn),GAs有多種失活機(jī)制，但是主要是由GA2-oxidase氧化酶(GA2ox)基因編碼酶催化的，其可以使植物體內(nèi)具有生物活性的GAs及其前體和其他中間產(chǎn)物分解失活，進(jìn)而保持植物體內(nèi)具有生物活性的GAs和中間體之間的平衡。

GA2ox屬于2-酮戊二酸-雙加氧酶(2OG-FeII_Oxy)超家族，通過(guò)不同的基因家族獨(dú)立編碼，包含DIOX_N(PF14226)和2OG-FeII_Oxy(PF03171)2個(gè)結(jié)構(gòu)域。根據(jù)碳原子的數(shù)目和結(jié)構(gòu)分為C19-GA2oxs和C20-GA2oxs，C19-GA2oxs通過(guò)2-β羥基化反應(yīng)將有生物活性的C19-GAs(GA1和GA4)及其前體物質(zhì)(GA20和GA9)轉(zhuǎn)化為沒(méi)有活性的GA8，GA34，GA29和GA51；C20-GA2oxs將有生物活性的GA12和GA53通過(guò)羥基化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為沒(méi)有生物活性的GA110和GA97。編碼GA2ox的基因最早是從紅花菜豆(Phaseoluscoccineus)子葉cDNA文庫(kù)分離得到，并證明其具有降解赤霉素的功能，并在大腸桿菌中進(jìn)行了功能驗(yàn)證。隨著研究的深入，GA2ox基因的功能己在多種植物中得到了表征，如在水稻(Oryza sativa)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)、毛果楊(Populus trichocarpa)中分別鑒定出11個(gè)、7個(gè)和15個(gè)GA2ox家族成員；在葡萄(Vitis vinifera)中有11個(gè)GA2ox家族成員；桃(Prunus persica)基因組中獲得7個(gè)PpGA2ox基因。GA2ox受到激素調(diào)節(jié)、信號(hào)通路和外界環(huán)境等因素影響，在植物發(fā)育中具有多樣性的功能。目前研究主要在基因克隆、轉(zhuǎn)錄水平和功能效應(yīng)等方面，本文將探討GA2ox在植物生長(zhǎng)發(fā)育中生物作用，為GA2ox基因功能研究提供參考。

1 GA2-oxidase氧化酶基因的表達(dá)模式

1.1 時(shí)空表達(dá)

基因表達(dá)的時(shí)空性是指基因的表達(dá)在個(gè)體發(fā)育的不同階段以及在個(gè)體的不同組織和細(xì)胞類型中均不相同。在擬南芥中，AtGA2ox1在下胚軸和側(cè)根原基中特異表達(dá)，AtGA2ox2在地上部組織中高表達(dá)，AtGA2ox3在花序的早期胚囊和合子胚乳中表達(dá)，AtGA2ox4在莖尖分生組織和側(cè)根起始，AtGA2ox6在成熟區(qū)表達(dá)，而在根分生組織或伸長(zhǎng)區(qū)不表達(dá)，AtGA2ox7在幾乎所有的發(fā)育階段組成型表達(dá)，AtGA2ox8僅在氣孔細(xì)胞中表達(dá)[1]；CoGA2ox3在黃麻(Corchorus sp)的頂端節(jié)間高度表達(dá)；在黃瓜(Cucumis sativus)中，CsGA2ox1和CsGA2ox2在根中的表達(dá)量較高；PqGA2oxs在西洋參(Panax quiquefolium)不同器官中差異表達(dá),尤其是莖中表達(dá)豐度最高,明顯高于根和葉；3個(gè)PvGA2oxs相關(guān)基因在柳枝稷中(Panicum virgatum)克隆得到，分別為PvGA2ox5、PvGA2ox6和PvGA2ox9，在圓錐花序中，PvGA2ox6和PvGA2ox9表達(dá)水平較高，在幼苗和根中PvGA2ox5高表達(dá)；在菠菜(Spinacia oleracea)中，SoGA2ox3在莖尖的表達(dá)量明顯高于葉柄和幼葉[2]；在蘋果(Malus pumila Mill)中克隆得到MdGA2ox1，其基因主要在花中表達(dá)；熒光定量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，芹菜(Apium graveolens)中的AgGA2ox基因在葉柄和葉片的表達(dá)量顯著低于莖中。不同時(shí)期的相同組織中的表達(dá)量也會(huì)有較大的差異，如草地早熟禾(Poa pratensis)的葉片中，幼嫩的葉片表達(dá)水平較高，這與葡萄中的研究結(jié)果一致，在幼嫩的葉片中表達(dá)量較高，在衰老的葉片中表達(dá)量較低，并且葡萄花序、葉片和果實(shí)等器官中VvGA2ox1均有表達(dá),但是高表達(dá)水平主要發(fā)生在花序、幼葉和小果中[3]。

1.2 環(huán)境響應(yīng)

植物體還可通過(guò)調(diào)節(jié)GA2oxs基因的表達(dá)來(lái)響應(yīng)外界環(huán)境的變化，如光照、溫度等。在擬南芥中，光敏色素A與光敏色素B調(diào)控發(fā)芽的條件，光照激活光敏色素因子，從而抑制AtGA2ox2的表達(dá)，促進(jìn)種子的萌發(fā)，在黑暗環(huán)境下，AtGA2ox1表達(dá)水平增加，使擬南芥中的赤霉素含量變少，種子萌發(fā)受到抑制；在藍(lán)光條件下，隱花色素調(diào)節(jié)GA4的水平，誘導(dǎo)AtGA2ox1的表達(dá)；低溫條件下，DOG1的表達(dá)上調(diào)，促使AtGA2ox6的表達(dá)量上升，使具有生物活性的GA含量變少；冷處理成熟的擬南芥種子后，抑制AtGA2ox2基因的表達(dá)，顯著增加了GA的含量[4]；OsGA2ox4的表達(dá)被光上調(diào)并影響節(jié)間伸長(zhǎng)，這可能有助于增加水稻的抗倒伏性[5]；低溫時(shí)豌豆的GA1的含量降低，PsGA2ox2表達(dá)上調(diào)，抑制莖的伸長(zhǎng)。從這些研究表明，環(huán)境因素可以影響植物體內(nèi)的赤霉素含量，而這個(gè)過(guò)程可能是由GA2ox基因調(diào)控的。

1.3 激素響應(yīng)

GA2ox基因在植物中的表達(dá)水平受到激素含量的影響。有研究發(fā)現(xiàn)外源施加生長(zhǎng)素可以促進(jìn)擬南芥和向日葵中的GA的含量，GA2ox基因的表達(dá)量降低；生長(zhǎng)素誘導(dǎo)GA1的含量，AtGA2ox1出現(xiàn)下調(diào)表達(dá)；對(duì)早熟禾施加5μmol·L-1赤霉素后，GA2ox基因上調(diào)表達(dá)，施加10μmol·L-1吲哚乙酸也出現(xiàn)了同樣的現(xiàn)象；在番茄果實(shí)成熟時(shí)，乙烯含量上升，促進(jìn)SlGA2ox基因的表達(dá)，同時(shí)也影響乙烯合成基因的表達(dá)[6]；外源施加乙烯和GA后，SlGA2ox2、SlGA2ox5、SlGA2ox6和SlGA2ox8表達(dá)量上升，而經(jīng)過(guò)赤霉素抑制劑PCA處理后，這些基因下調(diào)表達(dá)；在水稻中，乙烯信號(hào)的轉(zhuǎn)錄因子OsEIL1激活OsGA2ox1、OsGA2ox2、OsGA2ox3和OsGA2ox5的表達(dá)，使具有生物活性的GA變少[7]；用ABA處理擬南芥幼苗期的突變體ga1，AtGA2ox6的表達(dá)量上升[8]。

2 GA2-oxidase氧化酶基因的功能

2.1 GA2ox對(duì)株高的影響

赤霉素與莖的伸長(zhǎng)密切相關(guān)。茶樹(Camellia sinensis)的GA2ox基因在煙草中異源表達(dá)，轉(zhuǎn)基因煙草會(huì)出現(xiàn)植株矮小、開花時(shí)間邊長(zhǎng)、葉片顏色加深[9]；在煙草中過(guò)表達(dá)AtGA2ox7和AtGA2ox8同樣出現(xiàn)了矮化的表型；李(Prunus salicina)的PsGA2ox基因在擬南芥中過(guò)表達(dá)，擬南芥植株變矮；在豌豆(Pisum sativum)中編碼GA2ox基因的缺失后，赤霉素的含量增加，植株伸長(zhǎng)；過(guò)表達(dá)核桃(Juglans regia)JrGA2ox基因獲得了矮化的植株；水稻中的SBI基因，在莖稈中特異表達(dá)，該基因能夠編碼GA2ox基因，使水稻中的赤霉素含量變少，植株變矮，增加了水稻的抗倒伏能力；在白喜草(Paspalum notatum Flugge)中過(guò)表達(dá)擬南芥的AtGA2ox1基因，同樣出現(xiàn)了植株矮化的現(xiàn)象[10]；PcGA2ox1的異位表達(dá)不同程度地降低了轉(zhuǎn)基因小麥的株高。

2.2 GA2ox對(duì)花、果實(shí)、葉片和種子的影響

在煙草中異源表達(dá)荔波連蕊茶的ClGA2ox1-3基因，轉(zhuǎn)基因植株生長(zhǎng)緩慢，開花遲緩，葉片變小顏色變深；過(guò)表達(dá)楊樹的PtGA2ox基因后會(huì)出現(xiàn)提前開花的現(xiàn)象；AtGA2ox8在油菜中的異源表達(dá)增加了葉綠素含量，減少種子的萌發(fā)[11]；而在擬南芥中過(guò)表達(dá)油菜BnGA2ox6后，下胚軸和莖變短，種子萌發(fā)的時(shí)間變長(zhǎng)，開花也出現(xiàn)延遲；而過(guò)表達(dá)BnGA2ox2的轉(zhuǎn)基因擬南芥和油菜葉片顏色較深，葉綠素和花青素積累程度增加，硅果變短和種子變小；麻瘋樹的JcGA2ox6在擬南芥或麻瘋樹中過(guò)表達(dá)，其轉(zhuǎn)基因植株與野生型相比葉子和花都變小，還有較短的長(zhǎng)角果和較小的種子[12]；擬南芥的ga2ox6突變體中花蜜產(chǎn)量減少，而GA2ox6的過(guò)表達(dá)植株可以使花蜜產(chǎn)量顯著增加。

2.3 GA2ox對(duì)抗性的影響

一些研究發(fā)現(xiàn)赤霉素氧化酶基因會(huì)響應(yīng)非生物脅迫。過(guò)表達(dá)的OsGA2ox5可以提高水稻的對(duì)鹽的抗性；在擬南GA2ox基因家族中，AtGA2ox7啟動(dòng)子包含DRE基序(GCCGAC和ATCGAC)，并且該基因的表達(dá)在高鹽脅迫時(shí)顯著上調(diào)，增加了對(duì)鹽脅迫的抵抗力，并引起了形態(tài)變化[13]；在冷脅迫下，擬南芥中的AtGA2ox基因上調(diào)表達(dá)，使有活性的赤霉素含量變低，通過(guò)降低赤霉素的水平來(lái)應(yīng)對(duì)冷脅迫，干旱脅迫也是如此；過(guò)表達(dá)AtGA2ox基因增加了活性氧解毒酶基因的表達(dá)，從而提高擬南芥的應(yīng)激耐受性；在干旱脅迫下，玉米的自交系中GA2ox表達(dá)水平顯著增加；過(guò)表達(dá)GA2ox6的轉(zhuǎn)基因水稻植物對(duì)干旱脅迫的耐受性提高，脯氨酸含量更高，過(guò)氧化氫酶(CAT)活性增強(qiáng)，抗壞血酸過(guò)氧化物酶含量增加，水分利用效率提高，光合作用速率也增加；與非轉(zhuǎn)基因品系相比，過(guò)表達(dá)GhGA2ox1的陸地棉(Gossypium hirsutum)對(duì)干旱和鹽脅迫的耐受性增強(qiáng)，并且游離脯氨酸和葉綠素的含量更高，相對(duì)含水量增加[14]；StGA2ox1在馬鈴薯中(Solanum tuberosum)的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致鹽，干旱，外源激素和低溫脅迫耐受性的增加，這可能與葉綠素，類胡蘿卜素和水分流失的控制增強(qiáng)以及滲透保護(hù)劑的隨后積累有關(guān)，Shi等認(rèn)為StGA2ox1可以調(diào)節(jié)GA的合成，并進(jìn)一步影響馬鈴薯的植物生長(zhǎng)和脅迫響應(yīng)[15]。這些結(jié)果表明，內(nèi)源性GA水平通過(guò)誘導(dǎo)GA2ox基因而降低，從而使植物能夠耐受并適應(yīng)脅迫。

3 展望

赤霉素可以影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育和生理過(guò)程，赤霉素相關(guān)的GA2ox基因同樣也具有重要的作用。目前對(duì)GA2ox基因的研究已經(jīng)取得了重要的進(jìn)展，但是大部分的植物中的GA2ox基因家族鑒定仍然沒(méi)有完成，所以有很多問(wèn)題需要進(jìn)一步研究。在不同植物中GA2ox家族有多少家族成員，不同家族成員之間是否存在相互作用的機(jī)制；GA2ox與其他激素在分子水平的調(diào)控機(jī)制，與環(huán)境和抗性的相互關(guān)系需要進(jìn)一步的了解。GA2ox的一些相關(guān)研究也可以在生產(chǎn)中得到應(yīng)用，GA2ox可以使植株變矮，增加作物的抗倒伏能力，可以通過(guò)分子技術(shù)手段去培育具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)的作物品種，對(duì)農(nóng)業(yè)發(fā)展有重要的作用，但是GA2ox的具體調(diào)控網(wǎng)路尚不清晰，需要更深入的研究與探討。