洪淑芳 吳昕 杜曉明 錢(qián)江

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題，是肝硬化和肝細(xì)胞癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素，2019 年全球估計(jì)有2.96 億人HBV 慢性感染，造成82 萬(wàn)人死亡。HBV 可通過(guò)血液傳播，產(chǎn)生急性或慢性感染，大多數(shù)急性感染都是無(wú)癥狀的[1]。因此，輸血前HBV 檢測(cè)對(duì)保障血液安全至關(guān)重要。采供機(jī)構(gòu)篩查獻(xiàn)血人群中的HBV感染主要通過(guò)雙廠家酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）和核酸擴(kuò)增試驗(yàn)檢測(cè)（nucleic acid amplification，NAT）HBV DNA。本研究通過(guò)分析血站HBV DNA 陽(yáng)性獻(xiàn)血者HBV感染標(biāo)志物定量特征，旨在探索HBsAg陰性乙肝獻(xiàn)血者與HBsAg 陽(yáng)性乙肝獻(xiàn)血者診斷標(biāo)志物的區(qū)別，為相關(guān)標(biāo)志物發(fā)掘提供有價(jià)值的研究基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年9 月至2021年5 月金華市中心血站核酸陽(yáng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本46 324 例，所有標(biāo)本均排除丙型肝炎、艾滋、梅毒感染。獻(xiàn)血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》，按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019版）》和質(zhì)量體系文件的規(guī)定，獻(xiàn)血前經(jīng)過(guò)必要的征詢(xún)、一般檢查和血液初篩檢測(cè)，合格后采血。

1.2 儀器與試劑 Cobas S 201 核酸血液篩查系統(tǒng)（由美國(guó)羅氏公司生產(chǎn)）、EasyCuta 全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光分析儀（由蘇州新波公司生產(chǎn)）、EZbead System-32核酸提取儀（由上海浩源公司生產(chǎn)）。HBVHCV-HIV（1+2型）核酸檢測(cè)試劑盒（cobas@TaqScreen MPX Test，由美國(guó)羅氏公司生產(chǎn)）、乙肝五項(xiàng)[HBsAg；乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）；乙肝e 抗原（HBeAg）；乙肝e 抗體（HBeAb）；乙肝核心抗體（HBcAb）]檢測(cè)試劑盒（由蘇州新波公司生產(chǎn)）、HBV DNA檢測(cè)試劑盒（由上海浩源公司生產(chǎn)）。

1.3 方法

1.3.1 時(shí)間分辨免疫熒光分析法（timed-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）采用EasyCuta全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光分析儀對(duì)NAT檢測(cè)HBV DNA陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)，通過(guò)劑量-反應(yīng)曲線(xiàn)得出定量值。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法（real-time PCR，RTPCR）采用EZbead System-32核酸提取儀對(duì)NAT檢測(cè)HBV DNA陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA定量檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法，計(jì)量資料兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 金華地區(qū)HBV DNA陽(yáng)性基本情況 46 324 例標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)HBV DNA陽(yáng)性124 例，陽(yáng)性率0.27%，平均HBV DNA 濃度（1.82±0.94）lgIU/mL。其中HBsAg 陰性有64 例，占51.61%；HBsAg 陽(yáng)性有60 例，占48.38%。

2.2 兩組不同乙肝血清學(xué)模式比較見(jiàn)表1

表1 兩組不同乙肝血清學(xué)模式比較/例（%）

由表1 可見(jiàn)，HBsAg 陰性組HBcAb 陽(yáng)性率為93.75%，主要以血清學(xué)模式3（HBeAb與HBcAb共同陽(yáng)性）為主，占37.50%；其次為模式2（單獨(dú)HBcAb陽(yáng)性），占28.12%。HBsAg 陽(yáng)性組HBcAb 陽(yáng)性率為100%，主要以血清學(xué)模式3（HBeAb與HBcAb共同陽(yáng)性）為主，占88.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

2.3 兩組血清學(xué)標(biāo)志物HBcAb、HBsAb濃度比較見(jiàn)表2

表2 兩組血清學(xué)標(biāo)志物HBcAb、HBsAb濃度比較

由表2 可見(jiàn)，HBsAg 陰性組HBcAb 濃度明顯低于HBsAg 陽(yáng)性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-4.87，P＜0.05）。HBsAg 陰性組HBsAb 濃度明顯高于HBsAg陽(yáng)性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-5.43，P＜0.05）。

2.4 兩組HBV DNA 定量比較 HBsAg 陰性組HBV DNA 定量為1.33（0.90，1.70）lgIU/mL，明顯低于HBsAg陽(yáng)性組2.15（1.70，3.06）lgIU/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-6.67，P＜0.05）。

3 討論

HBV是一種嗜肝性DNA病毒，可導(dǎo)致終身慢性感染，進(jìn)而發(fā)展成為肝硬化和肝癌[2]。目前嚴(yán)格的獻(xiàn)血者HBV 檢測(cè)是降低輸血傳播HBV 風(fēng)險(xiǎn)的唯一方法。HBV DNA 是HBV 的基因組，其檢測(cè)是判斷獻(xiàn)血者體內(nèi)HBV復(fù)制狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的靈敏度和特異性，能有效縮短HBV檢出的窗口期。

由于檢測(cè)方法的局限性、HBV S 基因突變等原因，存在HBsAg 假陰性的情況[3]。張菊萍等[4]研究發(fā)現(xiàn)，TRFIA 法定量檢測(cè)HBV 感染準(zhǔn)確度較核酸檢測(cè)高，在HBV-M 多次檢測(cè)中差異極其微小。本研究對(duì)HBV DNA 陽(yáng)性獻(xiàn)血者進(jìn)一步運(yùn)用TRFIA 定量檢測(cè)乙肝五項(xiàng)，其中HBsAg 檢測(cè)陰性標(biāo)本的HBcAb 陽(yáng)性率為93.75%，HBsAg 檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本的HBcAb 陽(yáng)性率為100%。HBcAb 是HBV 既往感染的指標(biāo)，在HBV 感染時(shí)具有很高的陽(yáng)性率。Esposito 等[5]研究發(fā)現(xiàn)HBcAb 可輔助診斷HBsAg 陰性的HBV 感染，給免疫抑制或免疫缺陷的受血者輸注HBcAb 陽(yáng)性的成分血時(shí)需謹(jǐn)慎，極易引起輸血后HBV 再激活。本研究發(fā)現(xiàn)HBsAg 陰性組HBcAb 濃度低于HBsAg 陽(yáng)性組，表明高濃度的HBcAb增加了HBV感染風(fēng)險(xiǎn)。

HBsAb 是具有保護(hù)功能的中和抗體，可與HBsAg 特異性結(jié)合，HBsAb 中的Fab 成分可以通過(guò)阻止Pre-S1和NTCP結(jié)合位點(diǎn)之間的相互作用來(lái)阻斷HBV 進(jìn)入肝細(xì)胞，也可以阻斷HBsAg 的“a”決定因子與低親和力細(xì)胞受體HSPG之間的相互作用清除HBV 感染，低濃度的HBsAb 增加了HBV 感染風(fēng)險(xiǎn)[6]。本研究通過(guò)對(duì)HBV DNA 陽(yáng)性獻(xiàn)血者HBsAb濃度定量分析，發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性組HBsAb陽(yáng)性?xún)H為5%，且HBsAb濃度較低為0.80（0.17，1.46）mIU/mL。HBsAg 陰性組HBsAb 陽(yáng)性率和HBsAb 濃度略高于HBsAg陽(yáng)性組，但HBsAb濃度仍然較低。因此加強(qiáng)人群乙肝疫苗宣傳與補(bǔ)種有利于切斷HBV輸血傳播。

本研究中HBsAg 陰性組HBV DNA 定量低于HBsAg 陽(yáng)性組。可能是因?yàn)樵贖BV感染早期、HBV感染康復(fù)期、血清學(xué)無(wú)癥狀的慢性肝炎或HBsAg發(fā)生突變時(shí)，血漿中無(wú)法檢測(cè)到HBsAg，HBV處于低復(fù)制狀態(tài)，血漿HBV DNA濃度較低[7]，即使是靈敏度較高的核酸檢測(cè)也無(wú)法持續(xù)檢測(cè)到血漿中的HBV DNA，當(dāng)輸注大劑量血液制品或受血者免疫低下時(shí)，易造成HBV感染[3]。因此，即便開(kāi)展了核酸檢測(cè)，也應(yīng)注意全過(guò)程的質(zhì)量控制，保持檢測(cè)的靈敏度。

綜上所述，本研究初步表明在HBV DNA 獻(xiàn)血者中，HBsAg 陽(yáng)性獻(xiàn)血者的HBcAb 濃度和HBV DNA 濃度高于HBsAg 陰性獻(xiàn)血者，HBcAb 與HBV DNA具有一定的正相關(guān)性，輸注HBcAb陽(yáng)性成分血時(shí)需更加謹(jǐn)慎。