張 溪,南金魚,張翠花,張若玉,王新強(qiáng)

(酒泉市畜牧獸醫(yī)總站,甘肅 酒泉 735000)

豬圓環(huán)病毒(PCV)是以免疫抑制為主要特征的病毒性傳染病,臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜,可嚴(yán)重侵害性免疫器官,導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)免疫的高度抑制,使疫苗免疫失效,機(jī)體免疫力減弱或消失,目前已確認(rèn)PCV有4種基因型PCV1、PCV2、PCV3、PCV4。

其中PCV2和PCV3可引起斷奶仔豬的多系統(tǒng)衰竭綜合征、皮炎腎病綜合征、母豬的繁殖障礙、仔豬的先天性震顫以等一系列疾病給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。為摸清我市PCV2和PCV3流行情況,筆者采用熒光RT-PCR的方法對(duì)酒泉市2023年轄區(qū)內(nèi)采集的豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)、糞便、血清等樣品進(jìn)行了PCV1、PCV2核酸檢測(cè),并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行流行病學(xué)分析,為疫病的預(yù)警和防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 調(diào)查豬圓環(huán)病毒2型和3型材料與方法

1.1 調(diào)查豬圓環(huán)病毒樣品來源

在轄區(qū)內(nèi)隨機(jī)抽取19個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、38個(gè)散養(yǎng)戶、4家屠宰場(chǎng)共采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)等組織樣品220份、糞便樣品250份、血清樣品230份,共650份樣品,其中肅州區(qū)、金塔縣、玉門市、瓜州縣、敦煌市各130份。

1.2 調(diào)查豬圓環(huán)病毒的主要試劑

采購青島立見生物科技有限公司豬圓環(huán)病毒2型和3型雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒和DNA/RNA病毒基因提取試劑盒。

1.3 調(diào)查豬圓環(huán)病毒主要儀器

德國ABI Applied Biosystems公司型號(hào)為Step One的熒光PCR檢測(cè)儀。

1.4 調(diào)查豬圓環(huán)病毒的樣品處理

1.4.1 對(duì)豬圓環(huán)病毒血清樣品的處理 用12000r/min的高速冷凍離心機(jī),將0.5 mL血清,離心3 min,并取上清液200 μL。

1.4.2 對(duì)豬圓環(huán)病毒組織樣品的處理 將豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)等組織剪下黃豆大小的體積,并加入5倍約1～2 mL生理鹽水,用組織研磨器制成組織勻漿液,取0.5 mL以上液體,用12 000 r/min的高速冷凍離心機(jī),離心3 min,并取上清液200μL。

1.4.3 對(duì)豬圓環(huán)病毒糞便處處理 取體積約黃豆大小的糞便。加入5倍約1～2 mL生理鹽水,充分混勻后,取0.5 mL以上液體,用12 000r/min的高速冷凍離心機(jī),離心3 min,并取上清液200 μL。

1.5 RT-PCR檢測(cè)

1.5.1 對(duì)豬圓環(huán)病毒樣品的提取與擴(kuò)增 DNA/RNA病毒基因提取試劑盒說明書依次提取出650份待檢樣品DNA,并按照PCV2和PCV3雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒說明書配制擴(kuò)增試劑,在 Step One型熒光PCR儀上按照說明說要求設(shè)定具體的反應(yīng)條件,PCV2在FAM通道下收集熒光信號(hào),PCV3在VIC通道下收集熒光信號(hào)。

1.5.2 對(duì)豬圓環(huán)病毒檢測(cè)結(jié)果的判定 分別在FAM和VIC 信號(hào)通道下,每份樣品的擴(kuò)增結(jié)果有典型的擴(kuò)增曲線且Ct值≤38時(shí)可判定為PCV2或PCV3核酸陽性,Ct值>40或無Ct值時(shí)可判定為PCV2或PCV3核酸陰性;當(dāng)樣品38

2 對(duì)豬圓環(huán)病毒的檢測(cè)結(jié)果

2.1 對(duì)豬圓環(huán)病毒樣品的熒光PCR檢測(cè)

對(duì)650份樣品進(jìn)行PCV2和PCV3雙重?zé)晒釶CR核酸檢測(cè),共檢測(cè)出PCV2核酸陽性樣品101份(擴(kuò)增圖1～2),陽性率為15.54%, 檢測(cè)出PCV3核酸陽性樣品37份(擴(kuò)增圖3～4), 陽性率為5.69%。

圖1 PCV2 RT-PCR檢測(cè)擴(kuò)增圖圖2 PCV2 RT-PCR檢測(cè)擴(kuò)增圖

圖3 PCV3 RT-PCR檢測(cè)擴(kuò)增圖圖4 PCV3 RT-PCR檢測(cè)擴(kuò)增圖

2.2 不同區(qū)域的PCV2和PCV3流行特點(diǎn)分析

對(duì)不同區(qū)域的650份樣品PCV2和PCV3的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,結(jié)果如表1所示,PCV2和PCV3總體陽性率感染為21.23%,其中玉門市陽性率最高為28.46%;其次是肅州區(qū)23.08%;金塔縣22.31%;瓜州縣和敦煌市均為16.15%,表明PCV2和PCV3在酒泉市的5個(gè)農(nóng)業(yè)縣均有發(fā)生,但感染情況在不同區(qū)域差異較大。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果所示,PCV2的陽性率感染為15.54%,高于PCV3的陽性感染率5.69%,表明PCV2在酒泉地區(qū)流行更為普遍,PCV2的陽性感染率玉門市最高20%;金塔縣次之,為18.46%;肅州區(qū)16.15%;敦煌市12.31%;瓜州縣10.77%。PCV3的陽性率玉門市最高8.46%;肅州區(qū)次之,為6.92%;瓜州縣5.38%;敦煌市和金塔縣都為3.85%。

表1 不同區(qū)域PCV2、PCV3的檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同養(yǎng)殖規(guī)模的PCV2和PCV3流行特點(diǎn)分析

對(duì)不同養(yǎng)殖規(guī)模的650份樣品PCV2和PCV3的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,結(jié)果如表2所示,在不同養(yǎng)殖規(guī)模下的PCV2和PCV3總體陽性率存在較大差異,散養(yǎng)戶最高,達(dá)31.43%;規(guī)模場(chǎng)次之,為20.59%;屠宰場(chǎng)為2%。PCV2的陽性感染率差距也較大,散養(yǎng)戶為24.29%;規(guī)模場(chǎng)為14.12%;屠宰場(chǎng)2%。PCV3的陽性感染率差距較小,散養(yǎng)戶為7.14%;規(guī)模場(chǎng)為6.47%;屠宰場(chǎng)為0。表明不同飼養(yǎng)方式PCV2和PCV3陽性率的影響較大,散養(yǎng)戶標(biāo)準(zhǔn)化程度低,飼養(yǎng)管理粗放,防疫不達(dá)標(biāo),消毒不徹底,其陽性感染率較高。

表2 不同養(yǎng)殖規(guī)模的PCV2、PCV3的檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同生長階段的PCV2和PCV3流行特點(diǎn)分析

對(duì)不同生長階段的650份樣品PCV2和PCV3的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,結(jié)果如表3所示,保育豬的陽性率最高33%;育肥豬19.23%;仔豬18.33%母豬15%;種公豬10%。PCV2和PCV3在不同生長階段的陽性分布排序與總體排序一致。表明豬群在不同生長階段對(duì)PCV2和PCV3的易感性存在差異,保育豬更容易感染PCV2和PCV3。

3 豬圓環(huán)病毒對(duì)酒泉市的危害程度

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果表明PCV在酒泉市已成為多發(fā)性疾病,其中PCV2比PCV3的感染更常見。通過對(duì)不同區(qū)域、不同養(yǎng)殖規(guī)模、不同生長階段的19個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)、38個(gè)散養(yǎng)戶、4家屠宰場(chǎng)共采集豬肺臟、扁桃體、頜下淋巴結(jié)等組織樣品220份、糞便樣品250份、血清樣品230份,進(jìn)行PCV2和PCV3核酸檢測(cè),共檢出陽性樣品138份,陽性率為21.23%,陽性場(chǎng)戶32個(gè),PCV2的陽性率感染為15.54%,PCV3的陽性感染率為5.69%,表明PCV2的流行比PCV3更普遍、陽性感染率更高,但在不同區(qū)域、不同規(guī)模豬場(chǎng)的危害程度和流行情況存在一定的差異。規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的總體陽性感染率為20.59%,散養(yǎng)戶為31.43%,表明部分散養(yǎng)戶飼養(yǎng)管理情況水平低對(duì)豬病的預(yù)防控制能力較弱,大多數(shù)規(guī)模場(chǎng)制定了疫苗免疫規(guī)程序并能按程序開展免疫工作,且養(yǎng)殖場(chǎng)的建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)化程度高,管理科學(xué),對(duì)豬病的預(yù)防控制能力較強(qiáng)。流行病學(xué)調(diào)查期間,發(fā)現(xiàn)PCV2和PCV3的感染,以保育豬(斷乳至60～75日齡)最易感,斷奶應(yīng)激可能是重要的誘導(dǎo)因素,可引發(fā)斷奶仔豬衰竭綜合征,具體表現(xiàn)為斷奶之后的小豬出現(xiàn)持續(xù)性、漸進(jìn)式的消瘦,發(fā)育成長慢,皮毛粗亂,有時(shí)候會(huì)有咳嗽、喘氣等癥狀。體表還通常伴有淋巴結(jié)腫大,特別是腹股溝的淋巴結(jié),少數(shù)會(huì)出現(xiàn)腹瀉。

該病在臨床上無特效藥物治療,發(fā)病后可使用廣譜抗菌藥物,減少并發(fā)感染,降低死亡率,及時(shí)開展臨床監(jiān)測(cè)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是防控該病的重要環(huán)節(jié),通過加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、全面均衡的營養(yǎng)、控制并發(fā)癥和繼發(fā)感染、及時(shí)注射疫苗等方法來降低疫病的爆發(fā)。