王紅芳，宋小飛，王潞娜，聶 磊，張 輝

(山西振東制藥股份有限公司，山西 長治 046000)

拉洛他賽(larotaxel)是一種新型的紫杉烷類細(xì)胞周期特異性化療藥，具有較廣的抑瘤譜，其分子式為C45H53NO14，結(jié)構(gòu)式如圖1所示[1]。目前，該藥物在國內(nèi)外均未上市，目前山西振東制藥股份有限公司正在進(jìn)行拉洛他賽脂質(zhì)微球注射液的新藥研發(fā)，已進(jìn)入臨床研究階段。

圖1 拉洛他賽的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of larotaxel

拉洛他賽與其他紫杉烷類抗癌藥藥效相似，主要作用于細(xì)胞分裂過程中紡錘體微管蛋白，抑制癌細(xì)胞的有絲分裂[2]。研究顯示，拉洛他賽與其他紫杉烷類抗癌藥相比，可以殺傷耐藥性的癌細(xì)胞，可以用于乳腺癌[3]、非小細(xì)胞肺癌[4]、前列腺癌[5]等，有良好的抗癌應(yīng)用前景[6-7]。在拉洛他賽合成過程中用到了叔丁基鋰，在后續(xù)工藝過程中進(jìn)行去除，但仍需對鋰元素的殘留進(jìn)行控制。目前元素測定的方法有AAS[8]、ICP-OES[9]、ICP-AES[10]、ICP-MS[11]等。電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)以其測定速度快、高靈敏度，線性范圍廣，抗干擾能力強(qiáng)，廣泛應(yīng)用于藥品中元素雜質(zhì)的控制[12-14]。本研究結(jié)合中國藥典、美國藥典及ICHQ3D中有關(guān)元素雜質(zhì)檢測方法要求[15-17]，建立拉洛他賽中鋰元素殘留的測定方法，并用于拉洛他賽中鋰元素的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

1.1 儀 器

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(Agilent)；T-214電子分析天平，上海梅特勒托利多儀器發(fā)展有限公司；Milli-Q References 超純水處理系統(tǒng)，美國密理博公司；WX-600微波消解儀，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司。

1.2 試 劑

鋰單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/mL，批號207034-1)，國家有色金屬及電子材料分析測試中心；硝酸(分析級，批號K50198856816)，默克股份兩合公司；混合內(nèi)標(biāo)液(Bi、Ge、In、6Li、Lu、Rh、Sc、Tb)(100 μg·mL-1，批號54-124CRY2)，Agilent；調(diào)諧液(Ge，Co，Li，Mg，Ti，Y)(1 μg·L-1)，Agilent；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.3 供試品

拉洛他賽(批號：20190401、20190402、20190403)，山西振東制藥股份有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定條件

在試驗(yàn)過程中，采用He碰撞模式，可以消除多原子離子的干擾[18]，同時(shí)采用調(diào)諧液對ICP-MS儀器和方法進(jìn)行調(diào)諧，控制雙電荷<2%，氧化物<3%，10%的峰寬在0.65～0.80范圍內(nèi)，使儀器的靈敏度、穩(wěn)定性和背景滿足實(shí)驗(yàn)要求，具體參數(shù)見表1。

表1 ICP-MS工作參數(shù)Table 1 ICP-MS working parameters

2.2 溶液配制

5%硝酸溶液：量取50 mL硝酸置1 000 mL容量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻。

內(nèi)標(biāo)溶液：精密量取混合內(nèi)標(biāo)液0.1 mL，置50 mL量瓶中，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻(選擇鈧(Sc)作為內(nèi)標(biāo)元素)。

鋰元素貯備液：精密量取0.5 mL鋰標(biāo)液，置20 mL量瓶中，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻(鋰濃度約為25 μg·mL-1)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液：精密量取鋰元素貯備液0 mL、0.02 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、1.0 mL分別置50 mL量瓶中，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻(鋰元素濃度分別為0、10、50、100、200、500 ng·mL-1)。

2.3 樣品前處理

微波消解具有試劑用量少、消解效率高、空白值低等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于固體樣品的消解。消解過程常用的酸為硝酸、鹽酸、雙氧水等，硝酸是樣品制備的首選酸[15]。參考GB/T 24875-2010《畜禽類糞便中鉛、鎘、鉻、汞的測定電感耦合等離子體質(zhì)譜法》[19]中的消解條件進(jìn)行消解，見表2。

表2 微波消解條件Table 2 Microwave digestion conditions

樣品溶液：精密稱取0.5 g拉洛他賽樣品于微波消解罐中，加入7 mL硝酸，加塞密閉，按照表2微波消解條件進(jìn)行消解，消解畢，將消解罐置趕酸器，120 ℃趕酸2 h，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，消解罐用5%硝酸溶液洗滌三次，洗滌液依次轉(zhuǎn)移至上述量瓶中，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻。同法制備空白溶液。

加標(biāo)樣品溶液：精密稱取0.5 g拉洛他賽樣品于微波消解罐中，加入7 mL硝酸，加塞密閉，按照表2微波消解條件進(jìn)行消解，消解畢，將消解罐置趕酸器，120 ℃趕酸2 h，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，消解罐用5%硝酸溶液洗滌三次，洗滌液依次轉(zhuǎn)移至上述量瓶中，加入0.1 mL鋰元素貯備液，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 系統(tǒng)適用性

樣品溶液分析之前，取100 ng·mL-1鋰標(biāo)準(zhǔn)品溶液(限度濃度溶液)進(jìn)樣分析，結(jié)果見表3。6次測定結(jié)果中鋰元素質(zhì)量濃度的RSD為2.24%，結(jié)果表明系統(tǒng)適用性良好。

表3 系統(tǒng)適用性測定結(jié)果Table 3 System suitability test results

2.4.2 專屬性

取空白溶液，100 ng·mL-1鋰元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣分析。結(jié)果見表4。空白溶液占100 ng·mL-1鋰元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液質(zhì)量濃度的比值為8.55%；空白溶液對樣品測定無較強(qiáng)干擾，專屬性良好。

表4 專屬性測定結(jié)果Table 4 Specificity assay results

2.4.3 線性與范圍

取標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，以鋰元素濃度為橫坐標(biāo)，鋰元素響應(yīng)值與鈧元素的比值為縱坐標(biāo)，繪制曲線，結(jié)果見表5。鋰元素在質(zhì)量濃度為0～500 ng·mL-1范圍內(nèi)，線性回歸方程為：y=0.000 161 7x+0.001 492，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，相對剩余標(biāo)準(zhǔn)差為3.42%，線性關(guān)系良好。

表5 線性測定結(jié)果Table 5 Linearity assay results

2.4.4 靈敏度

取空白溶液連續(xù)測定11次，計(jì)算檢測下限(LOD)和定量下限(LOQ)，結(jié)果見表6。計(jì)算公式如下：

表6 檢測限和定量限測定結(jié)果Table 6 Detection limit and quantification limit determination results

LOD=3s/b

LOQ=10s/b

式中：s——11次空白溶液響應(yīng)值/內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

b——工作曲線斜率

LOD——檢測下限，ng·mL-1

LOQ——定量下限，ng·mL-1

鋰元素的檢測限為2.766 ng·mL-1，定量限為9.221 ng·mL-1。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

加標(biāo)供試品溶液：取拉洛他賽約0.5 g，精密稱定，置消解罐，精密加入7 mL硝酸，密塞，置微波消解儀按表2消解程序進(jìn)行消解，消解畢，將消解罐置趕酸器，120 ℃趕酸2 h，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，消解罐用5%硝酸溶液洗滌三次，洗滌液依次轉(zhuǎn)移至上述量瓶中，精密加入鋰標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1 mL，用5%硝酸溶液定容至刻度，搖勻，平行制備6份，結(jié)果見表7。6份加標(biāo)供試品溶液測定濃度的RSD為2.5%，重復(fù)性良好。

表7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 7 Repeated experimental results

2.4.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

依據(jù)樣品溶液制備方法，按50%、100%、150%限度濃度的加入一定體積的鋰元素貯備液配制成低、中、高濃度的加標(biāo)樣品溶液，每個(gè)濃度溶液平行制備3份，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表8。結(jié)果表明，鋰元素在3濃度水平下平均回收率均在95.6%～104.2%范圍內(nèi)，9份加標(biāo)樣品溶液的RSD值為2.8%，回收率良好。

表8 準(zhǔn)確度測定結(jié)果Table 8 Accuracy measurement results

2.4.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品溶液和加標(biāo)樣品溶液，分別于0、24 h進(jìn)樣分析，計(jì)算兩次試驗(yàn)測定結(jié)果的相對平均偏差，結(jié)果見表9。結(jié)果表明，室溫放置24 h，樣品溶液中均未檢出鋰元素，加標(biāo)樣品溶液在0 h和24 h的測定結(jié)果分別為99.972 ng·mL-1和102.461 ng·mL-1，相對平均偏差為1.2%，溶液穩(wěn)定性良好。

表9 溶液穩(wěn)定性測定結(jié)果Table 9 Solution stability test results

2.5 樣品測定

按“2.3”項(xiàng)下樣品制備方法，測定3批樣品(批號：20190401、20190402、20190403)，結(jié)果3批樣品中均未檢出鋰元素。

3 結(jié) 論

目前，《中國藥典》2020年版中未對鋰元素殘留限量做出規(guī)定。ICH Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則[17]規(guī)定，鋰的安全風(fēng)險(xiǎn)等級為3類，注射用制劑中鋰元素的PDE值(每日允許暴露量)為250 μg·d-1，與美國藥典通則USP<232>規(guī)定的PDE值一致[20]。拉洛他賽脂質(zhì)微球注射液規(guī)格為50 mg∶50 mL，每21天為一個(gè)周期，每個(gè)周期第一天用藥1次，按照拉洛他賽脂質(zhì)微球注射液用量50 mL(按1 mL=1 g)從嚴(yán)計(jì)算拉洛他賽原料藥中鋰元素的限度為5 μg·g-1，樣品稀釋體積為50倍，因此拉洛他賽原料藥中鋰的最高限度濃度為100 ng·mL-1。實(shí)驗(yàn)中3批拉洛他賽原料藥中鋰含量均未檢出，因此原料藥生產(chǎn)工藝中對鋰元素的控制是成功的。

采用微波消解-電感耦合等立體質(zhì)譜法測定拉洛他賽中鋰元素具有樣品用量少，操作簡單，靈敏度高，可滿足拉洛他賽原料藥中鋰元素的質(zhì)量控制。