張學(xué)農(nóng),王燕燕,李莉娥,張敏,宋俐萍,易夢娟,吳先迪,游輝

(1.三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院·宜昌市中心人民醫(yī)院藥學(xué)部,宜昌 443003;2.宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司,宜昌 443003)

Lennox-Gastaut綜合征(lennox-gastaut syndrome,LGS)是一種難治性癲癇綜合征,除對因治療外,最重要的是抗癲癇治療。氯巴占是一種合成的1,5-苯二氮芯卓類藥物,1975年作為抗焦慮藥上市,此后不久被發(fā)現(xiàn)具有抗癲癇作用[1]。美國食品藥品管理局(the US Food and Drug Administration,FDA)于2011年10月批準(zhǔn)了氯巴占用于成人和年齡≥2歲的兒童期LGS患者癲癇發(fā)作的聯(lián)合用藥;在許多國家,氯巴占已被作為治療包括LGS在內(nèi)的兒科癲癇的一線藥物[2]。

在我國,氯巴占屬于第二類精神藥品,需進(jìn)行嚴(yán)格管理。雖然2017年國內(nèi)公布的《第二批鼓勵研發(fā)申報兒童藥品建議清單》中納入氯巴占,鼓勵氯巴占制劑在國內(nèi)的仿制研發(fā),但直到2022年上半年,我國既無氯巴占進(jìn)口藥品上市,也無氯巴占仿制藥品上市。因此,關(guān)于氯巴占在中國健康受試者中的藥物代謝動力學(xué)相關(guān)研究報道較少。受宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司委托,宜昌市中心人民醫(yī)院I期臨床試驗研究室于2021年12月至2022年1月開展了國產(chǎn)與原研氯巴占片的人體生物等效性研究,現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1試驗藥物 氯巴占片受試制劑(T),規(guī)格:20 mg,批號:YF55210502,含量:99.9%,有效期至:2025年4月,宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司;氯巴占片參比制劑(R),商品名:ONFI?,規(guī)格:20 mg,批號:3279600A,含量:100.2%,有效期至:2022年5月,Catalant pharma solutions.LLC,宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。

1.2研究對象 本研究擬入組中國健康志愿者64例,其中空腹研究34例、餐后研究30例。主要入選標(biāo)準(zhǔn):①年齡為18～55周歲男性和女性受試者;②男性受試者體質(zhì)量不低于50 kg,女性受試者體質(zhì)量不低于45 kg;③身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)在19.0～26.0 kg(m2)-1。主要排除標(biāo)準(zhǔn):①體格檢查、生命體征、心電圖、臨床實驗室檢查等異常且經(jīng)研究醫(yī)生判斷有臨床意義者;②有嚴(yán)重疾病史者;③有藥物過敏史或過敏體質(zhì)者;④有藥物濫用、酗酒或嗜煙者;⑤不能耐受靜脈穿刺或暈血、暈針者;⑥試驗前3個月獻(xiàn)血者;⑦近14 d使用任何藥物者;⑧近3個月參加其他臨床試驗者。本研究已取得國家藥品監(jiān)督管理局藥物臨床試驗批準(zhǔn)通知書(編號2021LP00148),藥物臨床試驗登記與信息公示平臺登記號為CTR20212387;經(jīng)宜昌市中心人民醫(yī)院臨床試驗倫理委員會審查(批號:2021-040-01)通過后開展,所有受試者在試驗前均經(jīng)過知情同意并自愿簽署知情同意書。

1.3試驗設(shè)計 參考國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《以藥動學(xué)參數(shù)為終點評價指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和原研氯巴占片藥品說明書,本研究采用單中心、開放、隨機(jī)、單劑量、兩周期、兩序列、雙交叉試驗設(shè)計。假設(shè)氯巴占PK參數(shù)個體內(nèi)變異系數(shù)為20%,單側(cè)α=0.05,β=0.1,受試制劑和參比制劑的幾何均值比值=0.95～1.05,計算有效樣本量為25例,考慮脫落率等因素,計劃空腹研究入組34例、餐后研究入組30例受試者。所有受試者均隨機(jī)分為兩組(TR組和RT組),每周期在空腹或餐后狀態(tài)下分別口服氯巴占片受試制劑或參比制劑一片(20 mg)。根據(jù)原研氯巴占藥品說明書,氯巴占的活性代謝產(chǎn)物N-去甲基氯巴占體內(nèi)平均消除半衰期較長(71～82 h),故清洗期(給藥間隔)設(shè)定為28 d[3-4]。

受試者應(yīng)于每周期給藥前1天入?、衿诓》?統(tǒng)一飲食和作息,晚餐后禁食不禁水10 h,給藥前1 h禁水。給藥當(dāng)天,空腹研究受試者空腹10 h以上,在空腹?fàn)顟B(tài)下用240 mL溫水送服相應(yīng)研究藥物;餐后研究受試者在服藥前30 min進(jìn)食一份高脂(提供食物中約50%的熱量)高熱量(3 344～4 180 kJ)標(biāo)準(zhǔn)餐,且需在30 min內(nèi)食用完畢,之后在餐后狀態(tài)下用240 mL溫水送服相應(yīng)研究藥物。受試者服藥后1 h內(nèi)禁水,4 h后進(jìn)食午餐。28 d后交叉給藥進(jìn)行第二周期研究,第二周期的服藥時間及飲食飲水管理同第一周期保持一致。

1.4血液樣本采集與處理 每周期給藥0 h(給藥前60 min內(nèi))和給藥后0.33、0.67、1、1.33、1.67、2、2.33、2.67、3、3.33、3.67、4、4.5、5、6、12、24、36、48、72、96、144、192 h共24個時間點在受試者上肢采集靜脈血,每次取血約4 mL至含EDTA-K2抗凝劑的真空采血管中,輕柔顛倒混勻后置于低溫離心機(jī)(設(shè)置溫度4 ℃),以2 000×g離心10 min,取上層血漿置于凍存管,在超低溫冰箱中凍存待測。

1.5藥物濃度檢測與生物等效性評價 將凍存血漿樣本經(jīng)干冰冷鏈物流轉(zhuǎn)運(yùn)至第三方專業(yè)生物樣本分析與檢測單位,采用其自行開發(fā)驗證的氯巴占及N-去甲基氯巴占血藥濃度檢測方法,使用液質(zhì)聯(lián)用儀(LC-MS/MS)對血漿樣品中的氯巴占和N-去甲基氯巴占濃度進(jìn)行分析測定。以時間為橫坐標(biāo),血漿中氯巴占濃度為縱坐標(biāo),繪制氯巴占血藥濃度-時間曲線和血藥濃度-時間曲線半對數(shù)圖。

參照國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《生物等效性研究的統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)原則》[5],將可納入藥動學(xué)參數(shù)集(PKPS)的受試者數(shù)據(jù),采用Phoenix WinNonlin軟件(8.3.4版本)進(jìn)行非房室模型藥動學(xué)(PK)參數(shù)的估算分析,計算氯巴占和N-去甲基氯巴占的PK參數(shù):峰濃度(Cmax),血藥濃度-時間曲線下面積(從0時至最后一個濃度可準(zhǔn)確測定的樣品采集時間t的AUC0-t和從0時至無限時間的AUC0-∞),達(dá)峰時間(Tmax)和消除半衰期(t1/2)。

根據(jù)美國FDA發(fā)布的氯巴占片《仿制藥開發(fā)個藥指導(dǎo)原則》[6],氯巴占片生物等效性研究需檢測氯巴占及其活性代謝產(chǎn)物N-去甲基氯巴占的血藥濃度,但等效性評價僅基于氯巴占的主要PK參數(shù),即氯巴占的AUC0-t、AUC0-∞和Cmax。當(dāng)氯巴占受試制劑和參比制劑的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞幾何均值比的90%置信區(qū)間(CI)在80.00%～125.00%范圍內(nèi),則可判斷兩制劑生物等效。

1.6安全性評價 通過對受試者的生命體征監(jiān)測、體格檢查、實驗室檢查(血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)、凝血功能)、12導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)檢查等,觀察受試者在試驗期間發(fā)生的不良事件(AE)或嚴(yán)重不良事件(SAE),并判斷其與試驗藥物的相關(guān)性,從而評價口服氯巴占片在健康受試者中的安全性。

2 結(jié)果

2.1受試者一般資料 根據(jù)試驗的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn),空腹研究入組34例健康受試者,餐后研究入組30例健康受試者?？崭寡芯渴茉囌咧?男20例,女14例;年齡為(28.4±7.33)周歲,身高為(164.24±7.56) cm,體質(zhì)量為(60.99±7.14) kg,BMI為(22.58±1.655) kg·(m2)-1。餐后研究受試者中,男22例,女8例;年齡為(24.6±4.83)周歲,身高為(166.37±8.08)cm,體質(zhì)量為(61.70±6.93) kg,BMI為(22.28±1.862) kg·(m2)-1?？崭寡芯亢筒秃笱芯扛饔?例受試者提前退出,未完成全部研究。

2.2氯巴占和N-去甲基氯巴占血藥濃度-時間曲線 本項目的樣本檢測單位建立了氯巴占和N-去甲基氯巴占血藥濃度檢測方法,并對其專屬性、線性范圍與定量下限、精密度及準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)和樣品穩(wěn)定性等方面進(jìn)行考察,結(jié)果表明其建立的檢測方法專屬性好、精密度和準(zhǔn)確度等均符合相關(guān)要求;氯巴占線性范圍3.00～1 200 ng·mL-1、定量下限3.00 ng·mL-1,N-去甲基氯巴占線性范圍1.00 ng·mL-1至400 ng·mL-1、定量下限1.00 ng·mL-1。

健康受試者單次口服氯巴占片受試制劑或參比制劑20 mg后,空腹組受試者血漿中氯巴占的平均藥物濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線如圖1所示,餐后組受試者血漿中氯巴占的平均藥物濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線如圖2所示;空腹組N-去甲基氯巴占的平均藥物濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線如圖3所示,餐后組N-去甲基氯巴占的平均藥物濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線如圖4所示。由圖可見,空腹和餐后狀態(tài)下兩種制劑的氯巴占和N-去甲基氯巴占的血藥濃度-時間曲線變化趨勢均較為一致。

圖1 健康受試者空腹單次口服氯巴占片受試制劑或參比制劑后氯巴占平均血藥濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線Fig.1 Mean and semilogarithmic plasma concentration-time curves of clobazam after single oral administration of clobazam tablet test preparation or reference preparation in healthy subjects under fasting

圖2 健康受試者餐后單次口服氯巴占片受試制劑或參比制劑后氯巴占平均血藥濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線Fig.2 Mean and semilogarithmic plasma concentration-time curves of clobazam after single oral administration of clobazam tablet test preparation or reference preparation in healthy subjects under fed

圖3 健康受試者空腹單次口服氯巴占片受試制劑或參比制劑后N-去甲基氯巴占平均血藥濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線Fig.3 Mean and semilogarithmic plasma concentration-time curves of N-desmethylclobazam after single oral administration of clobazam tablet test preparation or reference preparation in healthy subjects under fasting condition

圖4 健康受試者餐后單次口服氯巴占片受試制劑或參比制劑后N-去甲基氯巴占平均血藥濃度-時間曲線及其半對數(shù)曲線Fig.4 Mean and semilogarithmic plasma concentration-time curves of N-desmethylclobazam after single oral administration of clobazam tablet test preparation or reference preparation in healthy subjects under fed

對于氯巴占的PK參數(shù):空腹研究中受試制劑階段1例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、2例受試者AUC0-t、AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為33例和32例;參比制劑階段1例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、2例受試者AUC0-t、AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為33例和32例。餐后研究中受試制劑階段的Tmax、Cmax、AUC0-t、AUC0-∞和t1/2均納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)均為30例;參比制劑階段1例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、2例受試者AUC0-t、AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為29例和28例。氯巴占的主要PK參數(shù)結(jié)果見表1。

表1 健康受試者空腹或餐后狀態(tài)下體內(nèi)氯巴占的主要藥代動力學(xué)參數(shù)Tab.1 Main pharmacokinetic parameters of clobazam in healthy subjects under fasting or fed condition

2.3藥動學(xué)參數(shù) 本次試驗空腹研究入組34例受試者,餐后研究入組30例受試者,但部分受試者因提前退出或樣本采集時間點不足而無法計算相應(yīng)PK參數(shù),因此納入PKPS的受試者例數(shù)存在差別。

對于氯巴占的活性代謝物N-去甲基氯巴占的PK參數(shù),空腹研究中受試制劑階段2例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、3例受試者AUC0-t不納入PKPS、9例受試者AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為32例、31例和25例;參比制劑階段3例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、4例受試者的AUC0-t不納入PKPS、10例受試者AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為31例、30例和24例。餐后研究中受試制劑階段4例受試者Tmax、Cmax和AUC0-t不納入PKPS、11例受試者AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為26例和19例;參比制劑階段4例受試者Tmax和Cmax不納入PKPS、5例受試者AUC0-t不納入PKPS、12例受試者AUC0-∞和t1/2不納入PKPS,其相應(yīng)受試者例數(shù)分別為26例、25例和18例。N-去甲基氯巴占的主要PK參數(shù)結(jié)果見表2。

表2 健康受試者空腹或餐后狀態(tài)下體內(nèi)N-去甲基氯巴占的主要藥代動力學(xué)參數(shù)Tab.2 Main pharmacokinetic parameters of N-desmethylclobazam in healthy subjects under fasting or fed condition

2.4生物等效性評價 健康受試者空腹或餐后狀態(tài)下口服20 mg氯巴占片(T藥、R藥),氯巴占主要PK參數(shù)Cmax、AUC0-t、AUC0-∞幾何均數(shù)的比值(T/R)均完全落在80.00%～125.00%之間;個體內(nèi)變異系數(shù)均相對較低。結(jié)果見表3。

表3 空腹或餐后條件下氯巴占片受試制劑和參比制劑的生物等效性評價結(jié)果Tab.3 Bioequivalence results of clobazam tablet between test preparation and reference preparation under fasting or fed state

綜合以上試驗結(jié)果,本研究中氯巴占片受試制劑和參比制劑在空腹和餐后條件下均生物等效。

2.5安全性評價 本次試驗依據(jù)CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events)5.0標(biāo)準(zhǔn)判斷AE嚴(yán)重程度,并將與研究藥物相關(guān)的AE按系統(tǒng)器官分類/首選詞(SOC/PT)匯總,比較受試者服用受試制劑階段和服用參比制劑階段發(fā)生的不良反應(yīng)類型及其發(fā)生率。

空腹研究入組34例受試者,其中23例受試者發(fā)生41例次與試驗藥物可能有關(guān)的不良反應(yīng);受試制劑給藥階段發(fā)生12例26例次不良反應(yīng),參比制劑給藥階段發(fā)生12例15例次不良反應(yīng);3例次受試者不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度為2級,其余均為1級。

餐后研究入組30例受試者,其中17例受試者發(fā)生35例次與試驗藥物可能有關(guān)的不良反應(yīng);受試制劑給藥階段發(fā)生10例19例次不良反應(yīng),參比制劑給藥階段發(fā)生11例16例次不良反應(yīng);1例次受試者不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度為2級,其余均為1級。

受試制劑和參比制劑不良反應(yīng)類型相當(dāng),不良反應(yīng)發(fā)生率接近,不良反應(yīng)嚴(yán)重程度較低(不超過2級);多數(shù)不良反應(yīng)無需采取措施即可自行痊愈,少數(shù)不良反應(yīng)采取常規(guī)的對癥治療即可痊愈。試驗期間未出現(xiàn)嚴(yán)重程度為3級及以上的不良事件,受試制劑和參比制劑整體不良反應(yīng)輕微,安全性良好。

3 討論

癲癇在全世界范圍內(nèi)的發(fā)病率約0.7%,其中30%～40%的患者即使經(jīng)長期藥物干預(yù),仍反復(fù)發(fā)作,進(jìn)而成為難治性癲癇[1]。難治性癲癇包括Lennox-Gastaut(LGS)、Dravet綜合征和肌陣攣-失張力癲癇等,在兒童期即可發(fā)病且常常持續(xù)至成年期,給患者身心健康及其家庭帶來嚴(yán)重影響;2011年美國FDA批準(zhǔn)上市的氯巴占,可用于2歲及以上LGS綜合征癲癇患者的輔助治療,且在另外兩種難治性癲癇的治療中也有一定的應(yīng)用[7]。

本次氯巴占片生物等效性試驗,空腹研究入組34例受試者,其中1例受試者(給藥系列RT)給藥后1.67 h發(fā)生AE(過敏性皮炎)退出試驗,無有效PK參數(shù),不納入PKPS集;1例受試者(給藥系列TR)第一周期給藥后血樣采集至96 h后因家中有事未返院采集余下血樣,第二周期全部完成,受試制劑階段缺失PK參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞和t1/2;1例受試者(給藥系列TR)第二周期給藥后血樣采集至96 h后提前退出試驗,參比制劑階段缺失PK參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞和t1/2。餐后研究入組30例受試者,其中1例受試者(給藥系列TR)完成第一周期研究后提前退出,參比制劑階段的PK參數(shù)均缺失;1例受試者(給藥系列TR)第二周期給藥后血樣采集至96 h后提前退出試驗,參比制劑階段缺失PK參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞和t1/2。另外,由于N-去甲基氯巴占半衰期較長,其納入PKPS的受試者例數(shù)除因上述原因減少外,還有部分受試者在N-去甲基氯巴占的Tmax之后少于3個可測濃度、部分受試者第二周期N-去甲基氯巴占給藥前的濃度高于其Cmax的5%。因N-去甲基氯巴占的PK參數(shù)不作為生物等效性評價指標(biāo),且其對整體試驗結(jié)果影響較小,故該品種生物等效性試驗仍可參考本研究的試驗設(shè)計。若不考慮成本,對本試驗設(shè)計進(jìn)行優(yōu)化,可在192 h采血點后增加240 h采血點,并可增加試驗清洗期至30天。

本研究首次報道了中國健康受試者口服氯巴占片的藥代動力學(xué)參數(shù),且氯巴占Tmax、t1/2等參數(shù)與原研產(chǎn)品已報道的參數(shù)基本一致[2];同時,也首次對中國健康受試者口服氯巴占片的安全性進(jìn)行了評價。結(jié)果顯示,空腹研究受試制劑階段不良反應(yīng)發(fā)生率36.4%(12/33),參比制劑階段不良反應(yīng)發(fā)生率35.3%(12/34);餐后研究受試制劑階段不良反應(yīng)發(fā)生率33.3%(10/30),參比制劑階段不良反應(yīng)發(fā)生率37.9%(11/29);主要不良反應(yīng)包括實驗室檢查值異常(如白細(xì)胞計數(shù)降低、中性粒細(xì)胞計數(shù)降低、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高、總膽紅素升高、血紅蛋白降低、尿潛血陽性等)、心率降低、血壓降低、頭暈、嗜睡、咳嗽、過敏、口咽疼痛等。其中1例次受試者口咽疼痛和1例次受試者過敏的不良反應(yīng)為2級,使用藥物對癥治療后痊愈;1例受試者白細(xì)胞計數(shù)降低合并中性粒細(xì)胞計數(shù)降低的不良反應(yīng)為2級,未采取措施即痊愈;其余不良反應(yīng)均為1級,無需采取措施即自行痊愈。上述不良反應(yīng)與參比制劑已報道的不良反應(yīng)類型基本吻合。

通過本次生物等效性研究,表明宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司仿制研發(fā)的氯巴占片,與原研氯巴占片在空腹和餐后狀態(tài)下均能達(dá)到生物等效,總體安全性良好,二者在臨床上可相互替代。經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局優(yōu)先審評審批通道審評,宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的氯巴占片于2022年9月作為化學(xué)藥品注冊分類第3類獲得NMPA批準(zhǔn)在我國上市,成為該品種的國內(nèi)首仿上市廠家。國產(chǎn)氯巴占仿制藥的上市進(jìn)一步保障了國內(nèi)相關(guān)癲癇患者的用藥可及性。