張菊平, 黎 俊, 周大貴, 熊和琴, 呂 磊, 顧麗群

(畢節(jié)市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心,貴州 畢節(jié) 551700)

磺胺類藥物是1類具有廣譜抗菌作用、價格低廉、性質(zhì)穩(wěn)定、使用方便的抗菌藥,被廣泛用于畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[1～3]?；前奉愃幬锞哂袧撛诘闹掳?、致畸作用且半衰期較長[3,4],若養(yǎng)殖中大量長期使用會在動物產(chǎn)品中殘留,影響消費者身體健康。為了保護人民群眾免受藥物殘留帶來的危害,我國制定了動物源食品中獸藥最大殘留限量,并將獸藥殘留檢測列入國家監(jiān)督管理計劃[5]。目前雞肉中磺胺類獸藥殘留的檢測方法主要有高效液相色譜法[6,7]、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8,9]、酶聯(lián)免疫吸附法[10]等。本研究利用固相萃取-高效液相色譜紫外檢測法對畢節(jié)市各縣(市、區(qū))2022年養(yǎng)殖的肉雞進行磺胺類獸藥殘留檢測分析。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2022年1—12月,在畢節(jié)市各縣(市、區(qū))養(yǎng)殖場隨機采集103批次雞胸肌肉樣品(七星關區(qū)14批次、大方縣14批次、黔西市12批次、金沙縣9批次、織金縣14批次、納雍縣12批次、威寧縣12批次、赫章縣12批次、百里杜鵑管理區(qū)4批次),分別用高速組織搗碎機均質(zhì),四分法縮分后,每批次樣品均分成3份,每份樣品500 g,分別作為檢樣、留樣、復檢樣,密封并標識,-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑

(1)多功能漩渦振蕩器(型號:DMV-16,廣東省科寅實驗室設備有限公司)、離心機(型號:H1750R,湘儀離心機儀器有限公司)、高效液相色譜(型號:LC-20A,島津公司)、分析天平(型號:WT5002K,常州萬泰天平儀器有限公司)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(型號:OSB-2200,上海愛朗儀器有限公司)、氮吹儀(型號:MTN-2800W,天津奧特賽思斯儀器有限公司)、MCX柱(60 mg/3 mL,美國Waters公司)。(2)7種高濃度標準溶液磺胺吡啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺醋酰、磺胺甲噁唑(均購自壇墨質(zhì)檢標準物質(zhì)中心,濃度均為100 μg/mL),乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈(色譜純,安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?,氨水(優(yōu)級純,國藥集團化學試劑有限公司),鹽酸(優(yōu)級純)。

1.3 標準品溶液配制

分別取磺胺吡啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺醋酰、磺胺甲噁唑標準溶液逐級稀釋配制混合標準中間液,每種標準品濃度均為1 μg/mL,儲于棕色試劑瓶中備用。分別量取0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL混合標準中間液至10 mL容量瓶,用0.1%甲酸乙腈定容,配制混合標準工作液,每種標準品濃度分別為0.02、0.05、0.1、0.2、0.25 μg/mL。

1.4 樣品的前處理

(1)稱取雞胸肌肉樣品(5.00±0.05)g于50 mL離心管中,加入乙酸乙酯10 mL,漩渦震蕩2 min,10 000 r/min 離心5 min,取上清液,重復提取殘渣1次,合并2次上清提取液于100 mL雞心瓶中,加入 0.1 mol/L鹽酸4 mL,于40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),濃縮至 <3 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL離心管,用0.1 mol/L鹽酸2 mL沖洗雞心瓶,洗液轉(zhuǎn)移至離心管,再用正己烷3 mL沖洗雞心瓶,將正己烷洗液轉(zhuǎn)移至同一離心管,渦旋混合30 s,10 000 r/min離心5 min,再次用正己烷3 mL沖洗雞心瓶,洗液轉(zhuǎn)移至同一離心管,渦旋混合30 s,10 000 r/min離心5 min,取下層液備用。(2)MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L鹽酸2 mL于室溫下活化2 min,備用液以流速1 mL/min過柱,依次用0.1 mol/L鹽酸1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL以流速1 mL/min沖洗,用5%氨水甲醇溶液4 mL以流速1 mL/min洗脫,收集洗脫液,于40 ℃水浴,氮氣吹干,加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解殘余物,0.22 μm濾膜過濾,得到制備樣品液。

1.5 液相色譜分析條件

色譜柱:C18(150 mm×4.6 mm,粒徑5 μm)。流動相:0.1%甲酸水溶液(A相)和乙腈(B相)。梯度洗脫程序:0～2 min,15%B;2～15 min,15%B～20%B;15～20 min,20%B;20～25 min,20%B～15%B。流速:0.8 mL/min。柱溫:30 ℃。檢測波長:270 nm。進樣體積:50 μL。

2 結果與分析

2.1 7種獸藥的液相色譜圖

采用梯度洗脫模式,利用固相萃取-高效液相色譜紫外檢測法有效分離了7種磺胺類獸藥,獲得了良好峰型(見圖1～圖3)。

圖1 7種獸藥標準溶液色譜圖

圖2 7種獸藥陽性添加物色譜圖

圖3 空白雞肉樣品色譜圖

2.2 實際樣品檢測情況

對2022年畢節(jié)市各縣(市、區(qū))103批次雞肉樣品的磺胺類獸藥殘留情況進行檢測分析,結果見表1。有4批次樣品檢出磺胺類獸藥殘留(見圖4～圖7),分別為磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶和磺胺醋酰,檢出率分別為4%,超標率為0%。

表1 2022年畢節(jié)市肉雞中7種磺胺類獸藥檢測結果

圖4 第52批次樣品色譜圖

圖5 第67批次樣品色譜圖

圖6 第83批次樣品色譜圖

圖7 第97批次樣品色譜圖

2.3 不同采樣地區(qū)檢出情況

大方縣有1批次樣品檢出磺胺甲基嘧啶,檢出率為7%(1/14);金沙縣有1批次樣品檢出磺胺甲噁唑,檢出率為11%(1/9);織金縣有1批次樣品檢出磺胺間甲氧嘧啶,檢出率為7%(1/14);威寧縣有1批次樣品檢出磺胺醋酰,檢出率為8%(1/12)。其余縣(市、區(qū))均無檢出。

3 結論

2022年畢節(jié)市103批次雞肉樣品的磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺醋酰檢出率分別為4%,超標率均為0,磺胺類獸藥殘留情況總體良好,但部分縣(市、區(qū))仍需嚴格控制磺胺類獸藥的使用。

4 討論

本研究采用固相萃取-高效液相色譜紫外檢測法對畢節(jié)市2022年養(yǎng)殖肉雞7種磺胺類獸藥的殘留情況進行檢測,雖然總體情況良好,但仍有部分養(yǎng)殖戶存在不規(guī)范使用此類獸藥的情況。分析原因:一是在肉雞養(yǎng)殖環(huán)節(jié)長期使用該類獸藥或沒有嚴格執(zhí)行休藥期制度;二是宣傳、監(jiān)管還不到位。為了嚴控獸藥殘留,養(yǎng)殖人員應嚴格按照說明書使用獸藥,不得超期、超量使用,并嚴格執(zhí)行休藥期。相關職能部門應做好宣傳工作,使養(yǎng)殖人員認識到獸藥殘留對人體和社會的危害,同時應加強監(jiān)管,完善獸藥追溯體系,加大抽檢力度和處罰力度,保障肉食品安全。