摘要： 為快速鑒別石榴種質(zhì)資源，解決石榴“同名異物”、“同物異名”現(xiàn)象，促進新疆石榴產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，本研究在采集新疆石榴主產(chǎn)區(qū)24份種質(zhì)的基礎(chǔ)上，分析新疆石榴種質(zhì)葉片及果實表型性狀的變異特征，選擇多態(tài)性較好的18條引物對石榴種質(zhì)進行遺傳多樣性分析及親緣關(guān)系鑒定，并從中選出可將24份石榴種質(zhì)鑒別出來的核心引物構(gòu)建新疆石榴的分子身份證。結(jié)果表明：新疆石榴的果實、葉片形狀變異較大，遺傳多樣性較為豐富，但僅從表型性狀很難將石榴種質(zhì)進行精準鑒別。18條引物共擴增出240條條帶，其中多態(tài)性條帶199條，占比為82.92%。24份種質(zhì)的平均等位基因數(shù)為1.812 5，有效等位基因數(shù)為1.287 0，Nei’s基因多樣性指數(shù)為0.177 0，Shannon’s多樣性指數(shù)為0.282 0；和田地區(qū)石榴種質(zhì)的Nei’s基因多樣性指數(shù)及Shannon’s多樣性指數(shù)高于喀什地區(qū)石榴種質(zhì)。在遺傳相似系數(shù)為0.85時，24份石榴種質(zhì)被分為6大類群，且石榴的分類結(jié)果與果實風味和地理位置的關(guān)聯(lián)性不大。5條核心引物UBC73、UBC880、UBC810、UBC841、UBC35可實現(xiàn)24份石榴種質(zhì)的鑒別，以其擴增的電泳圖譜所構(gòu)建的新疆石榴的分子身份證也互不相同，表明24份種質(zhì)不存在“同名異物”、“同物異名”現(xiàn)象。本研究結(jié)果為石榴種質(zhì)鑒定提供了一種新方法。

關(guān)鍵詞： 石榴；遺傳多樣性；表型性狀；分子身份證

中圖分類號： S655.4"" 文獻標識碼： A"" 文章編號： 1000-4440（2024）06-1098-13

Phenotypic traits analysis and establishment of molecular identity card of Xinjiang pomegranate

SHENG Xiuli， ZHOU Qian， MA Liufeng， FANG Zhigang， CHEN Yun

（The College of Life and Geographic Sciences， Kashi University/Key Laboratory of Biological Resources and Ecology of Pamirs Plateau in Xinjiang Uygur Autonomous Region， Kashi 844000， China）

Abstract： In order to quickly identify pomegranate germplasm resources， solve the phenomenon of homonyms and synonyms， and promote the development of pomegranate industry in Xinjiang， this study collected 24 germplasms from the main producing areas of pomegranate in Xinjiang， and analyzed the variation characteristics of phenotypic traits of leaves and fruits of pomegranate in Xinjiang. Eighteen primers with good polymorphism were selected to analyze the genetic diversity and genetic relationship of pomegranate germplasms， and the core primers that could identify 24 pomegranate germplasms were selected to construct the molecular identity card of pomegranate in Xinjiang. The results showed that the shape of fruits and leaves of pomegranate in Xinjiang varied greatly， and the genetic diversity was rich， but it was difficult to accurately identify pomegranate germplasms by phenotypic traits. A total of 240 bands were amplified by 18 primers， of which 199 were polymorphic bands， accounting for 82.92%. The average number of alleles of 24 germplasms was 1.812 5， the effective number of alleles was 1.287 0， Nei’s gene diversity index was 0.177 0， and the Shannon’s diversity index was 0.282 0. The Nei’s gene diversity index and Shannon’s diversity index of pomegranate germplasms in Hotan prefecture were higher than those in Kashi prefecture. When the genetic similarity coefficient was 0.85， 24 pomegranate germplasms were divided into six groups， and the classification results of pomegranate were not related to fruit flavor and geographical location. Five core primers （UBC73， UBC880， UBC810， UBC841 and UBC35） could be used to identify 24 pomegranate germplasms. The molecular identity cards of Xinjiang pomegranate constructed by the amplified electrophoresis patterns were also different， indicating that there was no phenomenon of homonyms and synonyms in 24 germplasms. The results of this study provide a new method for the identification of pomegranate germplasms.

Key words： Punica granatum L;genetic diversity;phenotypic traits;molecular identity card

石榴（Punica granatum L.）是千屈菜科石榴屬落葉灌木或喬木，果實風味獨特、營養(yǎng)豐富[1-3]。石榴果實既可鮮食，也可加工成果汁、果酒等產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟價值。石榴在中國的栽培歷史可追溯至兩千年前的漢代，經(jīng)過歷史變遷，現(xiàn)已形成陜西、新疆、河南、安徽、云南、山東等六大石榴產(chǎn)區(qū)[4]。新疆的石榴主要種植于喀什、和田等南部地區(qū)，已成為南疆重點發(fā)展的特色經(jīng)濟林果之一[5]。新疆地區(qū)干燥少雨、日照充足，該地區(qū)生產(chǎn)的石榴果實個大、皮薄、汁多、糖分含量高，品質(zhì)明顯優(yōu)于國內(nèi)其他產(chǎn)區(qū)[6]，頗受市場消費者喜愛。隨著新疆基建工作、快遞及電商行業(yè)的發(fā)展，越來越多的新疆石榴走進全國市場，帶動了新疆地區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展。品種資源是石榴產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的基礎(chǔ)，但長期以來，新疆果農(nóng)大多根據(jù)石榴風味及產(chǎn)地對石榴進行命名，品種魚目混雜，分類混亂。因此，種質(zhì)資源的鑒定及分子身份證構(gòu)建對于新疆地區(qū)石榴種質(zhì)資源的保存、利用以及新品種的選育尤為重要。

分子標記技術(shù)可從DNA分子水平上反映出品種間遺傳物質(zhì)的差異，分析結(jié)果不受外界因素的影響，準確可靠。近年來，隨著分子生物學的快速發(fā)展，現(xiàn)已發(fā)展出幾十種分子標記技術(shù)，被廣泛應用于植物遺傳多樣性分析、DNA指紋圖譜及分子身份證的構(gòu)建[7-9]。目前國內(nèi)外利用分子標記技術(shù)對石榴的研究主要集中于遺傳多樣性分析及評價，Noormohammadi等[10]利用RAPD、ISSR和SSR 3種分子標記技術(shù)對伊朗36個石榴品種進行了遺傳多樣性分析，Narzary等[11]利用ISSR分子標記技術(shù)分析了印度49份石榴的遺傳多樣性及群體結(jié)構(gòu)，Patil等[12]利用SSR分子標記對來自印度、伊朗、阿富汗等14個國家的不同石榴品種進行了遺傳多樣性分析。王慶軍等[13]利用ISSR分子標記對山東24個石榴品種進行遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析，寧琳等[14]利用ISSR分子標記分析了36份番石榴的親緣關(guān)系，趙麗華等[15]利用AFLP分子標記對川滇石榴品種進行了遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析。雖有學者開始利用分子標記構(gòu)建石榴分子身份證，但僅涉及少數(shù)石榴品種[16-17]，關(guān)于新疆地區(qū)石榴分子身份證的構(gòu)建尚未見報道。

本研究以新疆南部地區(qū)收集到的24份石榴品種為材料，在對不同品種葉片及果實表型性狀統(tǒng)計分析的基礎(chǔ)上，進一步利用ISSR分子標記技術(shù)分析其遺傳多樣性并構(gòu)建分子身份證，旨在為石榴種質(zhì)資源的鑒定提供依據(jù)，促進新疆石榴產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗材料采集與預處理

2022年10月于石榴成熟期在新疆喀什、和田24個取樣點采集不同石榴種質(zhì)的果實和葉片，品種編號及采集點詳見表1。每個取樣點選取生長狀況良好的同種質(zhì)石榴樹5～10棵，在果樹的東南西北4個方向隨機摘取石榴果實20個、葉片20張。采集后的石榴果實及葉片置于車載冰箱（4 ℃）帶回實驗室。取10張葉片用蒸餾水清洗干凈后，再用吸水紙吸干葉片表面水分，經(jīng)液氮速凍后置于-80 ℃冰箱，用于基因組提取。

1.2 試驗方法

1.2.1 表型性狀統(tǒng)計 除去觀賞石榴（S22），測量并記錄23份栽培石榴種質(zhì)的果實及葉片的表型指標。測定指標包括單果重、果實橫徑、果實縱徑、萼筒橫徑、萼筒縱徑、葉片長度、葉片寬度，并計算果形指數(shù)、葉形指數(shù)及變異系數(shù)。用電子稱（永康市華鷹儀器有限公司產(chǎn)品）稱量石榴果實的單果重，7次重復；用MNT-300游標卡尺（上海美耐特實業(yè)有限公司產(chǎn)品）測量石榴果實的橫徑、縱徑及萼筒橫徑，10次重復；用卷尺測量葉長、葉寬、萼筒縱徑，10次重復。果形指數(shù)為果實縱徑與果實橫徑的比值，葉形指數(shù)為葉片長度與葉片寬度的比值，變異系數(shù)為標準差與平均值的比值。

1.2.2 石榴基因組DNA的提取 參考譚小艷等[18]的改良CTAB Ⅱ法提取石榴的基因組DNA，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的質(zhì)量。

1.2.3 ISSR引物序列信息 參照王慶軍等[19-20]、Narzary等[11]、趙麗華[21]方法，本研究所用的引物如表2所示。引物由上海生物工程有限公司合成。

1.2.4 ISSR-PCR擴增及退火溫度的優(yōu)化 由于退火溫度對PCR擴增結(jié)果有較大影響，研究中針對不同的引物，利用Eppendorf Mastercycler X50梯度PCR儀（德國艾本德公司產(chǎn)品）對引物的適宜退火溫度進行確定。在40～60 ℃溫度內(nèi)，先以2 ℃為梯度進行預試驗，然后根據(jù)PCR結(jié)果逐步縮小溫度梯度，直至確定引物的適宜退火溫度。PCR反應體系：2×Es Tap Master Mix 12.5 μl，引物1.5 μl，DNA模板0.75 μl，Mg2+ 2 μl，用雙蒸水（ddH2O）補足至25 μl。PCR擴增程序為：94 ℃預變性5.0 min；94 ℃變性1.0 min，確定的較佳退火溫度下退火1.0 min，72 ℃延伸1.5 min，35個循環(huán)；最后72 ℃延伸10.0 min。

1.2.5 擴增圖譜的生成 ISSR-PCR擴增產(chǎn)物用8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，再經(jīng)0.1%的銀離子染色，3%碳酸鈉顯影后，得到24份種質(zhì)的擴增圖譜，并用相機拍照保存。

1.3 石榴種質(zhì)鑒別引物篩選

將每條引物擴增出的電泳圖譜進行人工讀帶，在相同的擴增位置，有清晰條帶的記為“1”，無條帶或模糊的記為“0”，每條引物擴增出的條帶按從上到下的順序依次讀帶，記錄18條引物擴增產(chǎn)生的電泳條帶，構(gòu)建2進制矩陣。統(tǒng)計24份種質(zhì)中所產(chǎn)生的條帶數(shù)以及多態(tài)性條帶，計算引物的多態(tài)性指數(shù)；根據(jù)引物的多態(tài)性指數(shù)篩選出可將所有種質(zhì)鑒別出來的核心引物。

1.4 石榴種質(zhì)遺傳多樣性分析及分子身份證構(gòu)建

利用Popgen32軟件[22]進行新疆石榴種質(zhì)遺傳多樣性分析；利用Ntsys2.10軟件[23]進行石榴種質(zhì)遺傳相似系數(shù)及聚類分析。分子身份證構(gòu)建程序如下：首先將種質(zhì)鑒別核心引物擴增的條帶組合起來得到2進制的DNA指紋圖譜，再將上述指紋圖譜通過數(shù)學方式轉(zhuǎn)換為16進制的身份證編碼[24]，最后將指紋圖譜、身份證編碼及種質(zhì)的基本信息輸入二維碼轉(zhuǎn)換軟件（https：//cli.im）[25]得到種質(zhì)的二維碼分子身份證。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

利用Excel 2019進行石榴表型性狀統(tǒng)計分析及電泳圖譜二進制的數(shù)據(jù)記錄，利用SPSS 26.0軟件（美國IBM公司產(chǎn)品）進行種質(zhì)間表型性狀差異顯著性分析，利用Origin2021（美國OriginLab公司產(chǎn)品）進行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因組DNA檢測

石榴基因組DNA電泳圖如圖1所示。從圖中可以看出，DNA條帶清晰明亮，無拖尾及雜帶，說明本研究提取的DNA較為完整，無蛋白質(zhì)、RNA及雜質(zhì)污染，DNA質(zhì)量滿足后續(xù)試驗要求。

2.2 ISSR-PCR退火溫度的優(yōu)化

不同退火溫度下， UBC841引物對S6種質(zhì)基因組DNA擴增條帶的變化特征如圖2所示。從圖中可以看出，隨著退火溫度的增加，擴增的條帶數(shù)目越來越多，當退火溫度增加至50.2 ℃時，擴增條帶數(shù)最多且條帶清晰明亮。此后，隨著退火溫度的進一步增加，擴增條帶亮度呈減弱趨勢，條帶變得模糊。因此，引物UBC841的適宜退火溫度為50.2 ℃。18條引物的適宜退火溫度如表3所示。 適宜的退火溫度下，UBC842、UBC35、UBC880引物對S7、S13、S17石榴種質(zhì)基因組DNA擴增效果如圖3所示。從圖中可以看出，3個種質(zhì)的DNA擴增條件清晰明亮，說明本研究確定的適宜退火溫度是合理的。

2.3 新疆石榴表型性狀分析

新疆23份栽培石榴種質(zhì)果實及葉片的表型性狀如表4所示。從表中可以看出，新疆23個栽培石榴果實及葉片性狀均出現(xiàn)不同程度的變異，變異系數(shù)為4.60%～30.94%，平均為15.59%，說明新疆石榴種質(zhì)的遺傳多樣性較為豐富。變異系數(shù)從大到小依次為單果重、萼筒橫徑、萼筒縱徑、葉片長、葉片寬、葉形指數(shù)、果實縱徑、果實橫徑、果形指數(shù)。單果重最大值為768.02 g，最小值為123.00 g，極差達645.02 g，差異較大。果形指數(shù)最大值為1.05，最小值為0.63，極差為0.42，整體較為穩(wěn)定。相對來說，果實性狀的變異系數(shù)（橫徑和縱徑）低于葉片性狀（長度、寬度）和萼筒性狀（橫徑和縱徑）。

2.4 新疆石榴的表型性狀分析

新疆栽培石榴種質(zhì)的表型性狀特征如表5所示。從表中可以看出，S8種質(zhì)的單果重最大，平均為569.06 g，顯著高于其他種質(zhì)，S13種質(zhì)的單果重最小，平均值為178.80 g，種質(zhì)間的差異較大。S12種質(zhì)的果實橫徑均值為10.53 cm，顯著高于其他種質(zhì)；S18種質(zhì)的果實橫徑最小（7.06 cm），與S4、S8、S11、S13、S16等種質(zhì)的差異不顯著，顯著低于其他種質(zhì)。S12種質(zhì)的果實縱徑亦顯著高于其他種質(zhì)；S18種質(zhì)的果實縱徑最小，與S11、S13、S16、S17、S24等種質(zhì)無顯著差異，顯著低于其他種質(zhì)。同樣， S12種質(zhì)的萼筒橫徑均值最大，達2.61 cm，與S1、S17種質(zhì)的差異不顯著，顯著高于其他種質(zhì)；S14種質(zhì)的萼筒橫徑均值最小，僅1.37 cm，顯著低于S1、S2、S3、S5、S6、S9、S10、S12、S15、S17、S20、S24等種質(zhì)。S8種質(zhì)的萼筒縱徑均值最大，為2.96 cm，與S1、S2、S5、S6、S14、S18、S19、S23等種質(zhì)無顯著性差異，而顯著大于其他種質(zhì)；S11種質(zhì)的萼筒縱徑均值最小，為1.57cm，與S17種質(zhì)無顯著性差異，顯著低于其他種質(zhì)。S5種質(zhì)的葉片長度均值較大，為8.99 cm，與S21種質(zhì)無顯著差異，顯著大于其他種質(zhì)；S18種質(zhì)的葉片長度均值最小，為4.40 cm，與S10種質(zhì)無顯著差異，顯著低于其他種質(zhì)。S5種質(zhì)的葉片寬度均值最大，為2.85 cm，與S21種質(zhì)無顯著性差異，大于其他種質(zhì)；S11種質(zhì)的葉片寬度均值最小，為1.50 cm，與S3、S7、S16、S17等種質(zhì)無顯著性差異，低于其他種質(zhì)。

2.5 ISSR-PCR擴增多態(tài)性分析

利用18條引物對24份石榴種質(zhì)進行擴增，代表圖譜如圖4所示。18條引物共擴增出240條條帶，其中多態(tài)性條帶199條，平均每條引物擴增出13.33條條帶，多態(tài)性條帶11.06條，多態(tài)性比率為82.92%。

2.6 遺傳多樣性分析

新疆石榴種質(zhì)遺傳多樣性如表6所示，從表中可以看出，24份種質(zhì)的平均等位基因數(shù)（Na）為1.812 5，有效等位基因數(shù)（Ne）為1.287 0，Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（H）為0.177 0，Shannon’s遺傳多樣性指數(shù)（I）為0.282 0。和田地區(qū)石榴種質(zhì)資源的Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（H）及Shannon’s遺傳多樣性指數(shù)高于喀什地區(qū)，表明來自和田地區(qū)的石榴種質(zhì)資源的遺傳多樣性更豐富。

2.7 遺傳相似性及聚類分析

24份石榴種質(zhì)的遺傳相似矩陣如表7所示，從表中可以看出：種質(zhì)間的遺傳相似系數(shù)為0.563 9～0.980 7，變化幅度為0.416 8，平均遺傳相似系數(shù)為0.867 8，表明種質(zhì)間較為相似，可能具有相似的遺傳背景。其中N5種質(zhì)和N20種質(zhì)之間的遺傳相似系數(shù)最小，為0.563 9，表明兩者之間的相似性較低，親緣關(guān)系較遠。S23種質(zhì)和S24種質(zhì)之間的遺傳相似系數(shù)最大，為0.980 7，表明兩者之間的遺傳物質(zhì)相似，親緣關(guān)系較近。

24份石榴種質(zhì)的遺傳關(guān)系聚類圖如圖5所示。從圖中可以看出，在遺傳相似系數(shù)為0.85時，供試種質(zhì)可分為6大類群，其中S4（突尼斯軟籽石榴）、S22（觀賞石榴）、S5（來自和田市皮山縣藏桂鄉(xiāng)的酸石榴）、S19（來自和田地區(qū)皮山縣藏桂鄉(xiāng)的甜石榴）、S20（來自喀什市葉城縣的酸石榴）各自單獨聚為一類，除此之外的其他石榴種質(zhì)被聚為一類。

2.8 DNA指紋圖譜及分子身份證構(gòu)建

根據(jù)引物多態(tài)性分析結(jié)果，從18條引物中篩選出可將所有種質(zhì)鑒別出來的5條引物為UBC73、UBC880、UBC810、UBC841、UBC35。將5條核心引物按UBC73、UBC880、UBC810、UBC841、UBC35順序排列，所擴增的條帶組合起來便得到2進制的DNA指紋圖譜（圖6），可直觀地看出不同種質(zhì)擴增條帶的差異。以種質(zhì)S1為例，根據(jù)電泳圖譜轉(zhuǎn)換后的DNA指紋圖譜為：1000110100001110111000000111101101100111010100100100101010101001001010111000100101，共82位，將DNA指紋圖譜通過數(shù)學方式轉(zhuǎn)換為十六進制后[24]得到的身份證編碼為：2343b81ed9d492aa4ae25，共21位。對比轉(zhuǎn)換前后，身份證編碼與DNA指紋圖譜所表達的信息未改變，但號碼位數(shù)減少了61位，因此，用十六進制的編碼構(gòu)建分子身份證更簡短。將指紋圖譜、身份證編碼及種質(zhì)的基本信息輸入在線二維碼轉(zhuǎn)換器得到種質(zhì)的二維碼分子身份證（圖7），可供電子設(shè)備快速掃描。種質(zhì)S1的二維碼分子身份證掃碼后可看到種質(zhì)的一些基本信息（圖8）。

3 討論

3.1 表型性狀分析

植物的表型性狀變異是其為適應環(huán)境變化而長期進化的結(jié)果，由遺傳物質(zhì)和外部因素共同作用。不同性狀的穩(wěn)定性及變異程度可用變異系數(shù)來體現(xiàn)，變異系數(shù)越大，表明其變異程度越高，對環(huán)境的適應能力越強[26]。果實性狀和葉片性狀的變異在遺傳變異中尤為重要[27]。本研究對新疆石榴的果實及葉片特征分析發(fā)現(xiàn)：不同表型性狀的變異系數(shù)處于4.60%至30.94%之間，其中單果重的變異系數(shù)較大（30.94%），與Farsi等[28]得到的伊朗石榴平均單果重變異系數(shù)（32%）接近；新疆石榴最大單果重量達768.02 g，遠高于山東石榴[29]（397.00 g）、西班牙石榴[30]（414.00 g）、土耳其石榴[31]（540.00 g），這說明新疆地區(qū)的石榴果實個頭較大，這可能與新疆地區(qū)光照時間長、晝夜溫差大等氣候特征有關(guān)。一般認為，變異系數(shù)大于10%時，則表明樣本間差異較大[32]。本研究中，除果形指數(shù)和果實橫徑外，其余7個性狀的變異系數(shù)均大于10%，表明新疆石榴存在豐富的遺傳變異，其中葉長和葉寬的變異系數(shù)分別為18.03%和15.17%，與唐海霞等[33]研究結(jié)果相近。表型性狀具有環(huán)境可塑性[31]，本研究中單果重的可塑性較大，果型指數(shù)可塑性較小，與變異系數(shù)結(jié)果相符。本研究發(fā)現(xiàn)僅根據(jù)表型指標難以區(qū)分新疆的石榴種質(zhì)，且植物的表型性狀很容易受外界因素的干擾而改變[34]。因此，將表型性狀和遺傳因子結(jié)合起來進行新疆石榴種質(zhì)的區(qū)分和鑒別是必要的。

3.2 遺傳多樣性分析

遺傳多樣性是生物多樣性的重要組成成分，一個物種的遺傳多樣性水平越高，表明其對環(huán)境變化的適應能力就越強。ISSR標記技術(shù)可從分子水平揭示物種內(nèi)的遺傳多樣性及親緣關(guān)系，并已在茶樹[35]、大櫻桃[36]、洋紫荊[37]等植物上得到應用。本研究利用18條引物對新疆24份石榴種質(zhì)進行ISSR分子標記，得到的多態(tài)性條帶占比為82.92%，高于Durgac等[38]、Sarkhosh等[39]研究結(jié)果，但低于Patil等[40]的研究結(jié)果，這說明本研究所用的引物對新疆石榴的擴增效果較為理想，適用于新疆石榴的遺傳多樣性分析。24份新疆石榴種質(zhì)的平均等位基因數(shù)（Na）為1.812 5，有效等位基因數(shù)（Ne）為1.287 0，Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（H）為0.177 0，Shannon’s遺傳多樣性指數(shù)（I）為0.282 0。新疆石榴的平均遺傳相似系數(shù)為0.867 8，與帕利達·阿不力孜等[41]、陳蕓等[42]的研究結(jié)果相近，表明新疆石榴遺傳背景狹隘，親緣關(guān)系較近，這可能是新疆石榴種植區(qū)域局限于和田和喀什地區(qū)，氣候環(huán)境接近。研究中還發(fā)現(xiàn)和田地區(qū)石榴種質(zhì)的遺傳多樣性比喀什地區(qū)更豐富，因此可在和田地區(qū)開展石榴新品種的選育工作。

3.3 聚類分析

新疆24份石榴種質(zhì)的聚類分析發(fā)現(xiàn)，種質(zhì)S4、S5、S19、S20、S22都單獨聚為一類，其中S4突尼斯軟籽石榴是從國外引進的，籽粒較軟；S22為觀賞石榴。其他不同風味的石榴種質(zhì)歸為一類。石榴的分類與地理位置有一定的關(guān)聯(lián)性，但僅靠地理位置對石榴進行分類的結(jié)果并不可靠。綜合來看，僅根據(jù)地理位置、果實風味、籽粒軟硬度等特點來對石榴進行分類，雖有一定的參考價值，但結(jié)果并不可靠，這與葛大朋等[43]、趙麗華等[44]、盧龍斗等[45]、Hasnaoui等[46]的研究結(jié)果一致。目前，國內(nèi)外還尚未有統(tǒng)一的分類標準，分子標記可從基因?qū)用娼沂静煌N質(zhì)之間的關(guān)系，使得分類結(jié)果更加準確可靠，已成為石榴分類的重要技術(shù)手段之一。

3.4 分子身份證構(gòu)建

DNA分子身份證是基于DNA指紋圖譜， 將電泳圖的圖片信息編碼為數(shù)字信息[47-48]，并以二維碼、條形碼等形式來呈現(xiàn)[49-51]。分子身份證可供電子設(shè)備快速掃描，可實現(xiàn)個體的便捷、高效識別。其唯一性可有效解決品種間的“同名異物”和“同物異名”現(xiàn)象，有利于品種的保護與利用。在供試種質(zhì)中，S23種質(zhì)和S24種質(zhì)在聚類圖中遺傳相似系數(shù)為0.980 7，表明兩者之間的遺傳物質(zhì)十分相似，但其分子身份證號碼并不相同，說明兩者在分子層面上并非同一種質(zhì)。本研究所構(gòu)建的24份石榴種質(zhì)的分子身份證互不相同，表明24份石榴種質(zhì)都是獨一無二的。本研究利用5條核心引物構(gòu)建了新疆石榴種質(zhì)的分子身份證，并將相關(guān)信息以二維碼的形式呈現(xiàn)，可實現(xiàn)品種的快速溯源，提高種質(zhì)資源的鑒別效率，為新疆地區(qū)石榴種質(zhì)資源的收集、保存、利用及產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供參考。

4 結(jié)論

本研究對新疆南部喀什及和田地區(qū)收集到的24份石榴種質(zhì)進行表型形狀分析和分子身份證的構(gòu)建，表型性狀中以單果重的變異較大，果形指數(shù)變異最小。利用ISSR分子標記構(gòu)建了新疆石榴種質(zhì)的分子身份證，24份石榴種質(zhì)的分子身份證互不相同，具有唯一性和可辨性，說明本研究收集的24份石榴種質(zhì)不存在同名異物、同物異名現(xiàn)象，其中和田地區(qū)的石榴種質(zhì)的遺傳多樣性更為豐富，適宜在該地區(qū)開展新品種的選育工作。

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（責任編輯：石春林）

收稿日期：2023-04-10

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金項目（2020D01A07）；新疆維吾爾自治區(qū)高?？蒲杏媱濏椖浚╔JEDU2019Y039）

作者簡介：盛秀麗（1994-），女，河南商丘人，碩士研究生，主要從事植物分子遺傳學研究。（E-mail）shengxl09@163.com

通訊作者：陳 蕓，（E-mail）chenyun8111@126.com