摘""要：質(zhì)膜內(nèi)在蛋白（PIP）隸屬于水通道蛋白家族，其以細胞膜定位并具有高效的水分轉(zhuǎn)運活性而著稱。PIP高度保守，主要包含PIP1和PIP2兩個亞類。天然橡膠是重要的工業(yè)原料和戰(zhàn)略物資，其主要來源為巴西橡膠樹。作為橡膠合成和儲藏的特異組織，乳管與鄰近的薄壁細胞之間缺乏胞間連絲，其水分平衡主要由PIP介導。通過前期研究，團隊鑒定到一個PIP1亞類成員HbPIP1;4，該基因在乳管中高水平表達，然而，其在蟾蜍卵母細胞中異源表達卻無水分轉(zhuǎn)運活性，推測因不能有效定位到細胞膜所致。為探討HbPIP1;4在植物體內(nèi)的功能部位及作用模式，本研究構(gòu)建了其亞細胞定位和雙分子熒光互補（BiFC）載體。通過利用農(nóng)桿菌介導法瞬時轉(zhuǎn)化煙草葉片，再用激光共聚焦顯微鏡進行觀察，發(fā)現(xiàn)熒光信號出現(xiàn)在細胞膜，這與生物信息學預(yù)測的細胞膜定位結(jié)果一致。BiFC實驗進一步證實HbPIP1;4定位在細胞膜，結(jié)果同時顯示，HbPIP1;4可形成同源多聚體，這與3D結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致。上述結(jié)果為深入揭示乳管的水分平衡機制奠定了堅實的基礎(chǔ)。但HbPIP1;4的異源互作模式還有待進一步研究。

關(guān)鍵詞：橡膠樹；乳管；水通道蛋白；質(zhì)膜內(nèi)在蛋白；亞細胞定位；雙分子熒光互補中圖分類號：S794.1""""""文獻標志碼：A

Subcellular"Localization"and"Multimerization"Analyses"of"HbPIP1;4，"a"PIP"Aquaporin"from"Rubber"Tree"（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.）

ZOU"Zhi，"ZHENG"Yujiao，"QIAO"Xueying

National"Key"Laboratory"for"Tropical"Crop"Breeding"/"Institute"of"Tropical"Biosciences"and"Biotechnology，"Chinese"Academy"of"Tropical"Agricultural"Sciences"/"Sanya"Research"Institute，"Chinese"Academy"ofnbsp;Tropical"Agricultural"Sciences，"Haikou，"Hainan"571101，"China

Abstract："Plasma"membrane"intrinsic"proteins"（PIPs），"which"belong"to"the"aquaporin"（AQP）"family"within"the"major"intrinsic"protein"（MIP）"superfamily，"are"known"for"the"high"water"transport"activity"at"the"cell"membrane."The"subfamily"is"highly"conservative"and"only"includes"two"phylogenetic"groups"named"PIP1"and"PIP2."Natural"rubber，"an"important"industrial"raw"material"and"strategic"material，"is"mainly"derived"from"Para"rubber"tree"（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.），"a"big"tree"originated"innbsp;the"Amazon"basin"of"South"America."As"a"special"tissue"for"rubber"synthesis"and"storage，"the"laticiferous"cells"possess"no"plasmodesmata"with"neighboring"parenchyma"cells，"and"the"water"balance"is"mainly"mediated"by"PIP"aquaporins."In"previous"studies，"a"highly"abundant"PIP"gene"denoted"HbPIP1;4"was"identified，"however，"no"detectable"water"transport"activity"was"found"when"heterologously"expressed"in"Xenopus"laevis"oocytes，"which"may"be"due"to"its"inability"to"localize"to"the"cell"membrane."To"uncover"the"acting"site"and"multimerization"features"of"HbPIP1;4"in"vivo，"recombinant"plasmids"pNC-Cam1304-SubN-HbPIP1;4，"pNC-BiFC-ECN-HbPIP1;4，"and"pNC-BiFC-ENN-"HbPIP1;4"for"subcellular"localization"and"bimolecular"fluorescence"complementation"（BiFC）"were"successfully"constructed."Agrobacterium"tumefaciens"transformed"with"above"recombinant"plasmids"were"used"to"infiltrate"tobacco"（Nicotiana"benthamiana），"and"transiently"transformed"leaves"were"subsequently"checked"using"laser"confocal"microscopy."Compared"with"wide"distribution"of"fluorescence"signals"throughout"the"cell"for"the"control"pNC-Cam1304-SubN，"signals"of"pNC-Cam1304-GFP-HbPIP1;4"were"restricted"to"the"cell"membrane，"supporting"the"plasma"membrane"localization"of"HbPIP1;4，"which"is"consistent"with"the"bioinformatics"prediction."The"result"was"further"supported"by"the"BiFC"analysis，"which"also"implied"that"HbPIP1;4"could"form"homomultimer，"in"accordance"with"the"3D"prediction"via"homology"modeling."The"results"would"lay"a"solid"foundation"for"further"uncovering"the"mechanism"of"water"balance"of"the"laticifer."Nevertheless，"PIP"aquaporins"that"could"interact"with"HbPIP1;4"in"rubber"tree"remain"to"be"further"characterized.

Keywords："rubber"tree;"laticifer;"aquaporin;"plasma"membrane"intrinsic"protein;"subcellular"localization;"BiFC

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.06.001

質(zhì)膜內(nèi)在蛋白（plasma"membrane"intrinsic"protein，"PIP）隸屬于水通道蛋白（aquaporin，"AQP）家族，其以細胞膜定位并具有高效的水分轉(zhuǎn)運活性而著稱[1]。相比于其他亞族，PIP高度保守，僅包含2個進化小組，其中PIP1具有延伸的N端，而PIP2具有較長的C端[2-5]。結(jié)構(gòu)分析顯示，PIP包含6個跨膜螺旋、2個半螺旋以及半螺旋上高度保守的NPA基序，其在細胞膜上以四聚體的形式起作用[6-8]。雖然PIP1和PIP2都具有便于水分轉(zhuǎn)運的F-H-T-R"ar/R選擇性濾器，但PIP1在蟾蜍卵母細胞、酵母等體外體系中一般無活性或活性極低，其主要原因是PIP1不能有效定位到細胞膜[9-11]。然而，當PIP1與PIP2共表達時，PIP2可介導PIP1的有效定位，從而提高水分轉(zhuǎn)運活性[9-12]。

巴西橡膠樹（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.）起源于南美亞馬遜河流域，是天然橡膠的主要商業(yè)來源[13]。橡膠在橡膠樹的乳管細胞中特異合成和儲藏，并在割膠過程以膠乳的形式被排出[14]。由于乳管與鄰近的薄壁細胞之間不存在胞間連絲，故水分出入乳管主要由細胞膜定位的PIP介導[2]。前期的全基因組分析顯示，橡膠樹共含有15個PIP基因，其中包含5個PIP1和10個PIP2[2]。蛋白互作分析顯示，隸屬于PIP2的HbPIP2;3可形成同源多聚體[15]，然而，隸屬于PIP1的HbPIP1;1雖然在植物體內(nèi)也定位在細胞膜，卻并不能形成同源多聚體[16]。為探究HbPIP1;1不能形成同源多聚體是屬于亞類特征還是個體特性，本研究對另外一個PIP1成員HbPIP1;4[2，"17]進行亞細胞定位和多聚化分析，并通過序列比較以期為揭示潛在的分子機理奠定基礎(chǔ)。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""植物材料""橡膠樹品系熱研7-33-97種植于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院試驗場，膠乳的采集參照文獻[2]；本氏煙草（Nicotiana"benthamiana）的栽培與管理參照文獻[16]。

1.1.2""菌株及載體""大腸桿菌（Escherichia"coli）DH5α、內(nèi)含輔助質(zhì)粒pSoup-P19的根癌農(nóng)桿菌（Agrobacterium"tumefaciens）GV3101、pNC-"Cam1304-SubN、pNC-BiFC-ENN和pNC-BiFC-"ECN由本實驗室保存。

1.1.3""主要試劑""酶、試劑盒及各類生化試劑參照文獻[16，"18]。

1.2""方法

1.2.1""總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄""膠乳總RNA的提取采用改良的SDS法[2]，經(jīng)質(zhì)量檢測合格后用TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript?"RT"reagent"Kit"with"gDNA"Eraser合成cDNA第一鏈。

1.2.2""基因克隆與載體構(gòu)建""根據(jù)前期鑒定的HbPIP1;4基因序列[2]及本地的熱研7-33-97的基因組序列設(shè)計引物對HbPIP1;4F/R（ATGGAGGG-"CAAGGAAGAGGATG/GGCCCTGGCCTTGAAA-"GG）和pNC-HbPIP1;4F/R（AGTGGTCTCTGTCC-"AGTCCTATGGAGGGCAAGGAAGAGGATG/GG-"TCTCAGCAGACCACAAGTGGCCCTGGCCTTG-"AAAGG），并以上述反轉(zhuǎn)錄cDNA作為模板進行PCR擴增。參照文獻[16]，利用無縫克隆技術(shù)將HbPIP1;4構(gòu)建到載體pNC-Cam1304-SubN、pNC-"BiFC-ENN和pNC-BiFC-ECN。

1.2.3""生物信息學分析""本研究所用數(shù)據(jù)庫、軟件及其網(wǎng)址詳見表1。同源分析和多序列比對分別采用BLAST和MUSCLE軟件；蛋白的理化特性、亞細胞定位、保守結(jié)構(gòu)域、二級結(jié)構(gòu)和3D結(jié)構(gòu)預(yù)測分別采用Protparam、WoLF"PSORT、CDD、SOPMA和SWISS-MODEL軟件?？缒ぢ菪齾^(qū)及保守氨基酸基于與SoPIP2;1[6]、AtPIP2;1[7]和AtPIP2;4[8]的序列比對進行界定。

1.2.4""亞細胞定位和雙分子熒光互補（bimolecu-"lar"fluorescence"complementation，"BiFC）實驗""參照文獻[19-20]，采用凍融法將上述重組質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌感受態(tài)，挑選單克隆進行菌落PCR驗證后制備農(nóng)桿菌浸染液，采用微量注射法轉(zhuǎn)化4周齡的煙草葉片，遮光保濕48"h后制片，并用激光共聚焦顯微鏡Zeiss"LMS880進行熒光觀察。

2""結(jié)果與分析

2.1""載體構(gòu)建與序列比較

本研究首先以HbPIP1;4F/R為引物對基因的編碼區(qū)序列進行分離，目的條帶切膠回收后用于第二輪PCR擴增，并利用無縫克隆技術(shù)成功構(gòu)建了亞細胞定位載體pNC-Cam1304-SubN-HbPIP1;4以及BiFC載體pNC-BiFC-ENN-HbPIP1;4和pNC-BiFC-ECN-HbPIP1;4。桑格測序顯示，研究分離到的序列與基因組的對應(yīng)區(qū)域完全一致，預(yù)測編碼287個氨基酸（aa），其理論分子量（MW）、等電點（pI）、脂肪族指數(shù)（AI）、總平均疏水指數(shù)（GRAVY）和不穩(wěn)定系數(shù)（II）與HbPIP1;1、HbPIP2;3、SoPIP2;1、AtPIP2;1、AtPIP2;4相當（表2）；該蛋白的第44～274位為保守的MIP結(jié)構(gòu)域（pfam00230），共包含230個殘基（圖1A）；從氨基酸組成來看，蛋白的小分子氨基酸A和G含

量最高，分別為12.5%和11.5%（圖1B）。HbPIP1;4與HbPIP1;1、HbPIP2;3、SoPIP2;1、AtPIP2;1、AtPIP2;4的序列相似性分別為91.0%、76.0%、72.6%、72.8%和70.2%，其跨膜螺旋區(qū)（TM1～TM6）和保守氨基酸如圖1C所示，2個半螺旋區(qū)（HB和HE）含有典型的NPA基序；連環(huán)LA含有1個與二聚化相關(guān)的C82殘基；連環(huán)LB含有1個保守的磷酸化位點S128；連環(huán)LD含有1個與門控相關(guān)的L211殘基；ar/R選擇性濾器為F94-H224-T231-R239；Froger位點為E154-S240-A244-"F259-W260。與SoPIP2;1、AtPIP2;1、AtPIP2;4和HbPIP2;3相比，HbPIP1;4具有較長的N端和較短的C端，缺乏磷酸化調(diào)控相關(guān)的C端S殘基。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，這些蛋白均以α-螺旋和無規(guī)則卷曲為主，分別為30.24%～40.42%和37.98%～"47.74%（表2）?；赟oPIP2;1的同源建模顯示，HbPIP1;4可以形成同源四聚體（圖1D）。

2.2""亞細胞定位分析

為明確HbPIP1;4的功能執(zhí)行部位，研究以空載pNC-Cam1304-SubN為對照，將含pNC-"Cam1304-SubN-HbPIP1;4的農(nóng)桿菌工程菌微量注射煙草葉片，共聚焦觀察結(jié)果如圖2所示，對照的熒光信號散布于整個細胞，而實驗組僅見于細胞膜，證實HbPIP1;4的作用部位是細胞膜。

2.3""BiFC分析

為明確HbPIP1;4是否可形成同源多聚體，研

究以轉(zhuǎn)pNC-Cam1304-SubN-HbPIP1;1[2]的農(nóng)桿菌工程菌為陽性對照，單轉(zhuǎn)pNC-BiFC-ENN-"HbPIP1;4或pNC-BiFC-ECN-HbPIP1;4的為陰性對照，將轉(zhuǎn)pNC-BiFC-ENN-HbPIP1;4和pNC-"BiFC-ECN-HbPIP1;4的農(nóng)桿菌工程菌等量混合后瞬時轉(zhuǎn)化煙草葉片。共聚焦觀察結(jié)果如圖3所示，陽性對照和實驗組在細胞膜均發(fā)現(xiàn)強烈的熒光信號，而陰性對照均無信號，證實HbPIP1;4可在細胞膜上形成同源多聚體。

3""討論

與其他作物相比，橡膠樹的水分平衡顯得更為重要：首先，除蒸騰耗水外，周期性的割膠活動會造成水分的大量流失；其次，相對于多數(shù)植物鄰近的細胞間存在大量的胞間連絲，用于割膠的成熟乳管與鄰近細胞缺乏功能性的胞間連絲，這使得乳管水分的補給嚴重依賴于細胞膜定位的PIP[2，"14]。在橡膠樹的15個PIP基因中，有10個在乳管中有表達，其中包括HbPIP1;4、HbPIP2;3和HbPIP1;1[2]。在蟾蜍卵母細胞中的功能分析顯示，HbPIP2;3具有高效的水分轉(zhuǎn)運活性[17]，而HbPIP1;4和HbPIP1;1的活性極低[17，"21]。根據(jù)在玉米、水稻、草莓等植物中的研究，PIP1亞類成員之所以在體外體系中無水分轉(zhuǎn)運活性主要歸因于其自身不能有效定位到細胞膜，相反，PIP2自身不僅可定位到細胞膜，還可介導PIP1的細胞膜定位[9-12]。有意思的是，在前期的研究中，團隊發(fā)現(xiàn)HbPIP1;1與HbPIP2;3均定位在煙草葉片的細胞膜；HbPIP2;3可形成同源多聚體，而HbPIP1;1卻不能[15-16]。為探討HbPIP1;1不能形成同源多聚體的可能結(jié)構(gòu)特征，本研究進一步鑒定了HbPIP1;4的細胞膜定位和多聚化特征。據(jù)前期研究，HbPIP1;4在乳管中的表達水平顯著高于HbPIP2;3和HbPIP1;1[2]。亞細胞定位分析顯示，與HbPIP1;1和HbPIP2;3相同，HbPIP1;4也定位在煙草葉片的細胞膜；與HbPIP1;1不同的是，BiFC顯示HbPIP1;4可形成同源多聚體，這與3D結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致。系統(tǒng)的序列比較顯示，HbPIP1;4、HbPIP1;1、HbPIP2;3、SoPIP2;1、AtPIP2;1和AtPIP2;4均屬于穩(wěn)定的疏水型堿性蛋白，即等電點gt;7.0（8.22～9.03）、總平均疏水指數(shù)gt;0（0.334～0.579）、不穩(wěn)定系數(shù)為lt;40（27.46～"31.68）；具有完全一致的NPA基序和ar/R選擇性濾器（F-H-T-R）；對應(yīng)于SoPIP2;1"S115的磷酸化位點、L197的門控位點以及C69的二聚化位點高度保守；對應(yīng)于SoPIP2;1"S188的磷酸化位點僅在AtPIP2;1中保守，而在其他蛋白中均為N；在5個Froger位點中，僅P1存在變異，SoPIP2;1為M，AtPIP2;1、AtPIP2;4和HbPIP2;3為Q，HbPIP1;1和HbPIP1;4為E；相比其他蛋白，HbPIP1;1和HbPIP1;4均缺乏PIP2"C端的磷酸化位點。這些結(jié)果表明HbPIP1;4與HbPIP1;1的序列特征高度一致，而基于前期的研究結(jié)果很難通過序列比對找到?jīng)Q定同源多聚化的結(jié)構(gòu)特征。此外，研究還采用SWISS-MODEL預(yù)測了HbPIP1;4與HbPIP1;"1[16]、HbPIP2;3[15]和HbPIP2;7[22]的互作關(guān)系，發(fā)現(xiàn)它們都不能形成異源多聚體，不過這還有待進一步的實驗驗證；同時，本團隊已構(gòu)建了膠乳特異性的酵母雜交文庫，利用HbPIP1;4作為誘餌的篩選工作還在進行中。

參考文獻

[1]"DANIELS"M"J，"MIRKOV"T"E，"CHRISPEELS"M"J."The"plasma"membrane"of"Arabidopsis"thaliana"contains"a"mercury-insensitive"aquaporin"that"is"a"homolog"of"the"tonoplast"water"channel"protein"TIP[J]."Plant"Physiology，"1994，"106（4）："1325-1333.

[2]"ZOU"Z，"GONG"J，"AN"F，"XIE"G，"WANG"J，"MO"Y，"YANG"L."Genome-wide"identification"of"rubber"tree"（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.）"aquaporin"genes"and"their"response"to"ethephon"stimulation"in"the"laticifer，"a"rubber-producing"tissue[J]."BMC"Genomics，"2015，"16（1）："1001.

[3]"ZOU"Z，"GONG"J，"HUANG"Q，"MO"Y"Y，"YANG"L"F，"XIE"G"S."Gene"structures，"evolution，"classification"and"expression"profiles"of"the"aquaporin"gene"family"in"castor"bean"（Ricinus"communis"L.）[J]."PLoS"One，"2015，"10（10）："e0141022.

[4]"ZOU"Z，"YANG"L"F，"GONG"J，"MO"Y"Y，"WANG"J"K，"CAO"J"H，"AN"F，"XIE"G"S."Genome-wide"identification"of"Jatropha"curcas"aquaporin"genes"and"the"comparative"analysis"provides"insights"into"the"gene"family"expansion"and"evolution"in"Hevea"brasiliensis[J]."Frontiers"in"Plant"Science，"2016，"7："395.

[5]"ZOU"Z，"YANG"J"H."Genome-wide"comparison"reveals"divergence"of"cassava"and"rubber"aquaporin"family"genes"after"the"recent"whole-genome"duplication[J]."BMC"Genomics，"2019，"20："380.

[6]"TORNROTH-HORSEFIELD"S，"WANG"Y，"HEDFALK"K，"JOHANSON"U，"KARLSSON"M，"TAJKHORSHID"E，"NEUTZE"R，"KJELLBOM"P."Structural"mechanism"of"plant"aquaporin"gating[J]."Nature，"2006，"439（7077）："688-694.

[7]"VERDOUCQ"L，"GRONDIN"A，"MAUREL"C."Structure-"function"analysis"of"plant"aquaporin"AtPIP2;1"gating"by"divalent"cations"and"protons[J]."The"Biochemical"Journal，"2008，"415（3）："409-416.

[8]"WANG"H，"SCHOEBEL"S，"SCHMITZ"F，"DONG"H，"HEDFALK"K."Characterization"of"aquaporin-driven"hydrogen"peroxide"transport[J]."Biochimica"et"Biophysica"Acta"（BBA）–"Biomembranes，"2020，"1862（2）："183065.

[9]"FETTER"K，"VAN"WILDER"V，"MOSHELION"M，"CHAUMONT"F."Interactions"between"plasma"membrane"aquaporins"modulate"their"water"channel"activity[J]."The"Plant"Cell，"2004，"16（1）："215-228.

• ZELAZNY"E，"BORST"J"W，"MUYLAERT"M，"BATOKO"H，"HEMMINGA"M"A，"CHAUMONT"F."FRET"imaging"in"living"maize"cells"reveals"that"plasma"membrane"aquaporins"interact"to"regulate"their"subcellular"localization[J]."Proceedings"of"the"National"Academy"of"Sciences，"2007，"104（30）："12359-"12364.
• ZELAZNY"E，"MIECIELICA"U，"BORST"J"W，"HEMMINGA"M"A，"CHAUMONT"F."An"N-terminal"diacidic"motif"is"required"for"the"trafficking"of"maize"aquaporins"ZmPIP2;4"and"ZmPIP2;5"to"the"plasma"membrane[J]."Plant"Journal，"2009，"57（2）："346-355.
• BIENERT"M"D，"DIEHN"T"A，"RICHET"N，"CHAUMONT"F，"BIENERT"G"P."Heterotetramerization"of"plant"PIP1"and"PIP2"aquaporins"is"an"evolutionary"ancient"feature"to"guide"PIP1"plasma"membrane"localization"and"function[J]."Frontiers"in"Plant"Science，"2018，"9："382."
• 鄒智，"楊禮富，"王真輝，"袁坤."巴西橡膠樹轉(zhuǎn)基因研究現(xiàn)狀與展望[J]."中國生物工程雜志，"2010，"30（1）："85-92.ZOU"Z，"YANG"L"F，"WANG"Z"H，"YUAN"K."Advances"and"prospects"on"genetic"modification"of"Hevea"brasiliensis[J]."Chinese"Biotechnology，"2010，"30（1）："85-92."（in"Chinese）
• 鄒智，"楊禮富，"王真輝，"袁坤."橡膠樹中橡膠的生物合成與調(diào)控[J]."植物生理學通訊，"2009，"45（12）："1231-1238.ZOU"Z，"YANG"L"F，"WANG"Z"H，"YUAN"K."Biosynthesis"and"regulation"of"natural"rubber"in"Hevea[J]."Plant"Physiology"Journal，"2009，"45（12）："1231-1238."（in"Chinese）
• 鄒智，"喬雪瑩，"鄭玉皎，"陽江華."橡膠樹HbPIP2;3的亞細胞定位與多聚化分析[J]."熱帶作物學報，"2024，"45（3）："443-449.ZOU"Z，"QIAO"X"Y，"ZHENG"Y"J，"YANG"J"H."Subcellular"localization"and"multimerization"analyses"of"HbPIP2;3，"an"efficient"water"transporter"from"Hevea"brasiliensis[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2024，"45（3）："443-449."（in"Chinese）
• 喬雪瑩，"鄭玉皎，"陽江華，"曾長英，"鄒智."橡膠樹HbPIP1;1基因的克隆及蛋白的亞細胞定位與多聚化分析[J]."熱帶作物學報，"2022，"43（12）："2405-2412."QIAO"X"Y，"ZHENG"Y"J，"YANG"J"H，"ZENG"C"Y，"ZOU"Z."Gene"cloning，"subcellular"localization"and"multimerization"analysis"of"HbPIP1;1"from"Hevea"brasiliensis[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2022，"43（12）："2405-2412."（in"Chinese）

[17]"AN"F，"ZOU"Z，"CAI"X"Q，"WANG"J，"ROOKES"J，"LIN"W"F，"CAHILL"D，"KONG"L"X."Regulation"of"HbPIP2;3，"a"latex-abundant"water"transporter，"is"associated"with"latex"dilution"and"yield"in"the"rubber"tree"（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.）[J]."PLoS"One，"2015，"10（4）："e0125595.

[18]"鄒智，"楊禮富."巴西橡膠樹鐵硫簇支架蛋白cDNA的克隆與分析[J]."熱帶作物學報，"2010，"31（10）："1752-1756.ZOU"Z，"YANG"L"F."Cloning"and"analysis"of"a"cDNA"encoding"an"iron-sulfur"cluster"scaffold"protein"ISU1"from"Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2010，"31（10）："1752-1756."（in"Chinese）

[19]"徐碩，"鄒智，"肖艷華，"張麗，"孔華，"郭靜遠，"郭安平."油莎豆塊莖油脂積累相關(guān)基因CeWRI1的克隆與功能分析[J]."熱帶作物學報，"2022，"43（5）："923-929.XU"S，"ZOU"Z，"XIAO"Y"H，"ZHANG"L，"KONG"H，"GUO"J"Y，"GUO"A"P."Cloning"and"functional"characterization"of"CeWRI1，"a"gene"involved"in"oil"accumulation"from"tigernut"（Cyperus"esculentus"L.）"tubers[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2022，"43（5）："923-929."（in"Chinese）

[20]"ZOU"Z，"ZHENG"Y"J，"ZHANG"Z"T，"XIAO"Y"H，"XIE"Z"N，"CHANG"L"L，"ZHANG"L，"ZHAO"Y"G."Molecular"characterization"of"oleosin"genes"in"Cyperus"esculentus，"a"Cyperaceae"plant"producing"oil"in"underground"tubers[J]."Plant"Cell"Reports，"2023，"42（11）："1791-1808.

[21]"TUNGNGOEN"K，"VIBOONJUN"U，"KONGSAWADWO"RAKUL"P，"KATSUHARA"M，"JULIEN"J"L，"SAKR"S，"CHRESTIN"H，"NARANGAJAVANA"J."Hormonal"treatment"of"the"bark"of"rubber"trees"（Hevea"brasiliensis）"increases"latex"yield"through"latex"dilution"in"relation"with"the"differential"expression"of"two"aquaporin"genes[J]."Journal"of"Plant"Physiology，"2011，"168（3）："253-262.

[22]"鄒智，"鄭玉皎，"喬雪瑩，"陽江華."橡膠樹水通道蛋白HbPIP2;7的亞細胞定位與多聚化分析[J]."西南林業(yè)大學學報（自然科學），"2024，"44（1）："1-6.ZOU"Z，"ZHENG"Y"J，"QIAO"X"Y，"YANG"J"H."Subcellular"localization"and"multimerization"analyses"of"HbPIP2;7，"a"PIP"aquaporin"from"rubber"tree"（Hevea"brasiliensis"Muell."Arg.）[J]."Journal"of"Southwest"Forestry"University"（Natural"Science），"2024，"44（1）："1-6."（in"Chinese）