摘" "要" "在拌料中加入不同濃度含硒水溶肥培育黑木耳，利用高效液相色譜—電感耦合等離子體質(zhì)譜（HPLC-ICP-MS）聯(lián)用技術測定黑木耳中的甲基硒代半胱氨酸SeMeCyS、硒代蛋氨酸SeMet、亞硒酸根SeO32-以及硒酸根SeO42-，在1～100 μg/L范圍內(nèi)，線性關系良好，均大于0.999 3， 4種硒形態(tài)達到完全分離。方法檢出限分別為甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L，硒代蛋氨酸3.5 μg/L，亞硒酸2.6 μg/L，硒酸3.6 μg/L，不同硒含量水溶肥的添加，對木耳中硒的形態(tài)轉化具有不同程度影響，采用700倍稀釋液，木耳中SeMeCyS和SeMet含量最高。

關鍵詞" "富硒；黑木耳；形態(tài)分析

硒是人體所必需的微量元素，是谷胱甘肽過氧化酶的必要組分，若無硒則此酶沒有活力。硒也是一種特殊的營養(yǎng)元素，有研究表明，缺乏硒會引起克山病和大骨節(jié)病，硒還有抗腫瘤、提高免疫機能、抗氧化、延緩衰老等作用。但食用量過高會引起硒中毒，出現(xiàn)惡心、嘔吐，頭發(fā)脫落、指甲變形、煩躁、疲乏等癥狀。我國食品營養(yǎng)學會提出了成人補硒標準50～200 μg/d。

黑木耳是一種營養(yǎng)價值非常高的膠質(zhì)菌類，具有食用和藥用價值。木耳具有很強的富集硒的能力，可以通過菌絲細胞將無機硒轉化并富集于子實體中，而人體所能吸收、利用的硒元素主要是有機硒的形態(tài)。本研究通過在木耳培養(yǎng)基拌料中加入不同濃度的水溶肥培育木耳，采用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法對所培植木耳中的硒形態(tài)進行分析，探討賦肥的濃度對硒不同形態(tài)的轉化產(chǎn)生的影響。

1" "材料與方法

1.1" "試驗材料" "黑木耳菌株；培養(yǎng)基原材料（木屑、鋸末、麥麩、豆粕、石灰）；微量元素水溶肥，硒含量gt;6 g/L。

1.2" "試驗設計" "木屑培養(yǎng)基（雜木屑+鋸末85%，麥麩+豆粕14%，石灰1%）拌料按配方稱取，含水量60%，攪拌均勻后裝袋，水溶肥分別稀釋500、600、700、800、1 000倍添加在拌料中。每組制作菌棒200袋，標注序號為1-1、1-2、1-3、1-4、1-5。以基質(zhì)不添加水溶肥的菌棒200袋作為空白對照。

1.3" "試劑" "亞硒酸根溶液標準物質(zhì)（GBW10032，以亞硒酸根計SeO32-：68.9 μg/g，擴展不確定度1.4 μg/g）、硒酸根溶液標準物質(zhì)（GBW10033，以硒酸根SeO42-計：75.1 μg/g，擴展不確定度2.4 μg/g）、硒代蛋氨酸溶液標準物質(zhì)（GBW10034，以硒代蛋氨酸計C5H11NO2Se：97.9 μg/g，擴展不確定度2.5 μg/g）、甲基硒代半胱氨酸溶液標準物質(zhì)（GBW10088，以甲基-硒代半胱氨酸計C4H9NO2Se·HCl：96.6 μg/g，擴展不確定度2.6 μg/g），以上試劑均為中國計量科學研究院生產(chǎn)；硒元素標準溶液（1 000 mg/L，國家有色金屬研究院）；蛋白酶XIV[默克化工技術（上海）有限公司]；乙酸銨（上海達瑞精細化學品有限公司）；四丁基氫氧化銨（天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）；超純水Milli-Q（電阻率18.0 MΩ·cm）。

1.4" "主要儀器與設備" "ICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀Agilent7700X（美國安捷倫公司），配有MassHunter色譜-質(zhì)譜聯(lián)用工作站，PRP-X100陰離子色譜柱和預處理柱（瑞士哈美頓公司），DCS-250H多功能數(shù)字超聲水浴儀（輔光儀器有限公司），MS105DU電子天平（梅特勒公司），MIlli-Q超純水機（美國默克公司）。

1.5" "試驗方法

1.5.1" "試樣提取" "將試驗用菌棒出耳后，摘下，烘干后粉碎機粉碎，過篩0.4 mm。

稱取試樣1 g于50 mL離心管中，加入10 mL緩沖液，室溫下在超聲水浴超聲30 min。取出加入25 mg蛋白酶，混勻，置于恒溫振蕩器中37 ℃，震蕩酶解20 h，取出，5 000 r/min下離心10 min，吸取2 mL上清液至10 mL容量瓶，加入流動相定容，過0.22 m濾膜，待測。

1.5.2" "儀器條件

1）液相色譜條件。C18色譜柱，4.6×150 mm，5 μm；流動相：15 mmol/L乙酸銨、0.4 mmol/L氫氧化四丁基銨，5%甲醇，pH5.5；流速：1.5 mL/min；洗脫程序：等度洗脫；洗針液：10%甲醇水溶液；進樣量：" 100 μL。

2）電感耦合等離子體質(zhì)譜條件。等離子氣： 9 L/min；輔助氣：1.1 L/min；載氣：0.7 L/min；采樣深度：5 mm；碰撞氣：He，6 mL/min；霧室溫度：5 ℃。

2" "結果與討論

2.1" "應用液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測Se形態(tài)" "基于液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用對目標木耳中硒形態(tài)進行基本形態(tài)分離以及檢測，可以將硒形態(tài)中SeMeCyS、SeMet、SeO32-以及SeO42-，在12 min中達到很好的分離。色譜圖見圖1。

2.2" "測試方法的線性關系，相關系數(shù)及檢出限" "以各個形態(tài)硒濃度的峰面積與對應質(zhì)量濃度（表1）繪制出標準曲線圖譜（圖2），可以看出，在1～100 μg/L范圍內(nèi)，各種形態(tài)硒的線性范圍良好，相關系數(shù)≥0.999 3。

按照相同儀器條件，以試劑空白為基準，連續(xù)測量11次，求出空白值的標準偏差，DL=3 SD/K（K為校正曲線斜率），計算出硒元素各形態(tài)檢出限為：硒代蛋氨酸3.5 μg/L，甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L，亞硒酸2.6 μg/L，硒酸3.6 μg/L。

2.3" "木耳樣品的測定及分析" "從測量結果可以看出（表2），木耳樣品中均含有SeMeCyS，其中1-3號樣品中甲基硒代半胱氨酸形態(tài)含量最高，部分樣品中含有SeMet形態(tài)，同樣是1-3號硒代蛋氨酸形態(tài)含量最高，木耳樣品中SeO32-、SeO42-形態(tài)硒含量均低于檢出限。

另外從部分樣品的圖譜（圖3）中發(fā)現(xiàn)除目標4種形態(tài)硒之外，還有其他的峰存在，可能存在其他形態(tài)硒，還要通過進一步試驗證明。

3" "結論

將不同濃度含硒水溶肥添加到木耳拌料中，采用蛋白酶提取法，結合液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法聯(lián)用技術測量目標木耳樣品中的SeMeCyS、SeMet、SeO32-、SeO42-的4種硒形態(tài)。分析發(fā)現(xiàn)，木耳中硒的形態(tài)甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸可以被檢出，通過提高賦肥濃度的配比，對木耳中有機硒的形態(tài)轉化有一定的影響。在木耳拌料中添加含硒水溶肥按照1 ： 700比例稀釋，SeMeCyS含量和SeMet形態(tài)含量最高。

參考文獻

[1] 何彩梅，吳桂榮，陳春嵐，等. 食品中硒與硒形態(tài)分析方法研究進展[J].食品工業(yè)，2017，38（9）：218-221.

[2] 謝小雪，方迎春，劉龍剛. 富硒食品中硒元素形態(tài)分析的研究進展[J].現(xiàn)代食品，2020，12（6）：15-18.

[3] 張彩妮，鄧百萬. 幾種富硒食用菌的研究進展[J].農(nóng)業(yè)與技術，2021，41（21）：4-6.

[4] 武蕓. 富硒黑木耳營養(yǎng)成分研究[J].食品科學，2008，29（8）：87-90.

[5] 中國營養(yǎng)學會.中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2023.

[6] 劉笑笑，金秋，張振都，等.超聲輔助酶法提取-液相色譜-原子熒光光譜法測定富硒黑木耳中硒形態(tài)[J].中國無機分析化學，2022（1）：163-170.

[7] 張春林，王東，王巖，等. HPLC-ICPMS聯(lián)用法測定富硒酵母粉中砷和硒的形態(tài)分析[J].食品科技，2019，44（6）：326-331.

【基金項目】：遼寧省自然科學基金項目（2021-MS-074）。

崔暢，尤海丹，遼寧省重要技術創(chuàng)新與研發(fā)基地建設工程中心/遼寧省分析科學研究院，郵編110015（沈陽）；閆玉，遼寧省食品檢驗檢測院。

收稿日期：2024-06-13