劉怡亭

隨著人們對于飲食品質要求的不斷提升以及食品工業(yè)技術的發(fā)展，食品添加劑的使用范圍變得越來越廣泛?？茖W、合理地添加和使用食品添加劑，可以提升食品的色澤、香味和口感，或是起到保鮮、防腐的作用，但是如果在食品生產過程中不合規(guī)地使用食品添加劑，就會造成嚴重的食品安全問題，對人們的身體健康和生命安全造成威脅。為此，我國對食品添加的使用制定了一系列的明確規(guī)定和要求，從食品添加劑的種類到用量都有相應的規(guī)范，旨在保障食品安全和人們的飲食健康。但在現(xiàn)實中，總有一些食品生產商出于各種目的違規(guī)、違法使用食品添加劑，這就需要通過食品安全檢測對食品中的添加劑進行定性與定量分析，以確保市場中流通的食品是安全且健康的。高效液相色譜法是一種較為先進的分離分析技術，在諸多領域有著普遍應用，能夠準確檢測出樣品中的成分及含量，對食品添加劑檢測來說具有很高的適用性和實用價值。

一、食品添加劑概述

《中華人民共和國食品安全法》對食品添加劑進行了明確的定義，即為改善食品品質和色、香、味以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質。客觀來講，食品添加劑是現(xiàn)代食品工業(yè)、食品技術的一大進步，提升了食品的色澤、香味和口感，不僅滿足了現(xiàn)代人越來越高的飲食品質需求，還能延長食品的存放時間，防止食品變質。

科學、合理地使用食品添加劑有利于改善食品的綜合品質，但如果隨意使用就會帶來食品安全與飲食健康方面的弊端和危害。所以，我國出臺了《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》，對可用食品添加劑的種類、使用量和適用范圍等做出了標準規(guī)定，這是食品生產制作中必須要遵守和執(zhí)行的，而且是不能觸碰的底線。

二、高效液相色譜法概述

高效液相色譜法是一種較為先進的分離分析技術，在20世紀60年代便已出現(xiàn)了高效液相色譜法的技術雛形，經(jīng)過不斷改進、完善與發(fā)展，目前已經(jīng)相當成熟，廣泛應用于化學、醫(yī)學、工業(yè)、農學、法檢和食品安全等諸多領域。高效液相色譜法采用液體作為流動相，通過相應的高壓輸液裝置，將緩沖液和比例不同的混合溶液、極性不同的單一溶液等泵注輸入到色譜柱，使得柱內液體的成分可以被有效分離后再進入檢測裝置，最終實現(xiàn)對樣品的檢測，從而分析出樣品中的物質成分與含量。

高效液相色譜法之所以能夠在諸多領域得到認可和應用，主要在于其具有“四高一廣”的特點與優(yōu)勢?！八母摺奔锤邏骸⒏咚?、高效、高靈敏度，高壓指的是流經(jīng)色譜柱的液體會受到比較大的阻力，因此需要增高載液壓力才能順利、快速地通過色譜柱；高速指的是載液在高壓下流速加快，且與經(jīng)典液體色譜法相比，檢測分析速度更快，多數(shù)樣品在15-30min便可以完成檢測分析，部分樣品的檢測分析時間甚至可以縮短到5min以內，少數(shù)樣品的檢測分析時間較長，但通常也在1h以內；高效體現(xiàn)在分離效能高，與工業(yè)精餾塔和氣相色譜相比，高效液相色譜的效能可以高出數(shù)倍之多；高靈敏度體現(xiàn)在紫外檢測器能達0.01ng，進樣量可低至微升?！耙粡V”指的是高效液相色譜法的應用范圍廣，能夠對超過70%的有機化合物做出準確的檢測分析。除此之外，高效液相色譜法還具有柱子可反復使用、能用于分離不同化合物、樣品需量少、不易破壞、易回收等優(yōu)點。

三、高效液相色譜法在

食品添加劑檢測中的具體應用

1.食品甜味劑檢測。甜味劑具有不同的分類方式，按照營養(yǎng)價值分類，可以分為非營養(yǎng)型和營養(yǎng)型甜味劑；按照甜味劑的來源，又可以分為人工合成甜味劑和天然甜味劑。從食品安全和食品添加劑檢測的角度來講，需要重點關注的是人工生產合成的非營養(yǎng)型甜味劑。常見的甜味劑有天門冬酰苯丙氨酸甲酯（又名阿斯巴甜，已被WHO列為可能致癌物）、乙?；前匪徕?、環(huán)己基氨基磺酸鈉和糖精鈉等，這些甜味劑使用方便，價格低廉，可以有效提高食品的甜味，但如果過量使用會造成食品安全問題。以糖精鈉的檢測為例，采用高效液相色譜熒光法不僅能夠取得非常理想的檢測效果且結果精確，還具有較好的重現(xiàn)性。部分的食品檢測樣品由于組分較多，所以檢測前期的分離和處理難度較大，還可能出現(xiàn)目標物干擾的情況，進而影響到檢測結果的準確性，而高效液相色譜熒光法選擇性響應的特征較低，所以可以很好地規(guī)避這一問題，對復雜樣品做出快速、準確的分析。

采用高效液相色譜法還能夠對不同種類的甜味劑進行同時檢測，而且同樣具有非常高的靈敏度與準確性。有研究者對葡萄酒中的阿斯巴甜、阿力甜和紐甜進行檢測，流動相采用水溶液、乙腈，前處理采用MAX固相萃取柱凈化，溫度為30℃，檢測波長為205nm，采用C18色譜柱。化合物在0.02-3.00mg/L范圍內線性關系良好，相關系數(shù)大于0.9995，回收率可達82.7%-96.4%，相對標準偏差在6%以下。另有研究者對碳酸飲料中的多種甜味劑進行檢測，通過超聲定容過膜的方法進行了前期處理，以甲醇和0.1mol/L磷酸二氫銨梯度洗脫作為流動相。對新橙皮苷二氫查爾酮含量的檢測，在柱溫35℃、波長282nm的條件下進行；對安賽蜜、阿斯巴甜、甘草甜的檢測，在柱溫35℃、波長210nm的條件下進行。結果表明，線性范圍為1-50mg/L，相關系數(shù)在0.9992之上，檢出限為0.02mg/L，相對標準偏差低于3.1%，回收率不低于84.0%，最高可達103.0%。由此證明，在甜味劑的檢測過程中，高效液相色譜檢測的效率、準確度以及樣品回收率都較高，重復性也相當好。

2.食用色素檢測。食用色素有著改善甚至是改變食品顏色的作用，按照來源可以分為天然色素和人工合成色素。天然色素以植物色素、動物色素為主，但成本較高，且顏色的可選性較少；人工合成色素是通過一系列的化學操作獲得的有機色素，成本低廉，可以生產合成各種顏色。然而，如果過量使用人工合成色素就會產生毒性和致癌性，所以人工合成色素在食品安全管理和食品添加劑檢測中非常受重視，高效液相色譜法即可對食用色素做出準確檢測。

有研究者以玉米面制品為樣品進行檸檬黃色素檢測，以超純去離子水作為提取液，輔助提取試劑選用碳酸氫鈉。將碳酸氫鈉和樣品按照1：5的比例振蕩離心，再對其上清液進行提取，并經(jīng)過膜處理，然后對樣品中的檸檬黃色素進行檢測。按照13：87的體積比例，取甲醇與乙酸銨等度洗脫，在柱溫35℃、波長429nm、流速1.0mL/min的條件下進行測定。結果表明，檸檬黃在0.625-15.000μg/mL范圍內的線性關系良好，相關系數(shù)為0.9999，加標回收率為89.55%-93.76%，RSD為0.08%-0.36%。當然，高效液相色譜法除了可以用于檢測人工合成色素外，還可以用于檢測天然色素，比如在葉黃素的檢測方面，當前的技術經(jīng)驗已經(jīng)較為成熟。

3.食品防腐劑檢測。食品防腐劑可以對食品中微生物的產生、繁殖起到抑制作用，使食品能夠保持更長時間的鮮度與品質，比較常見的食品防腐劑是苯甲酸鈉、山梨酸鈉等。需要注意的是，使用食品防腐劑本是為了避免食品腐敗、變質而造成的食品安全問題或是食品浪費，但如果使用不合理，如過量使用食品防腐劑，就會引起食品安全問題，對人們的健康與安全造成危害，所以食品防腐劑也是食品添加劑檢測的一項重要內容。

通過高效液相色譜法檢測食品防腐劑，不但操作方法與過程較為簡單，而且對目標物的分離度良好，能夠取得快速、準確的檢測結果。有研究者對阿膠糕采用沉淀蛋白、超聲提取的前處理，過膜后進入高效液相色譜系統(tǒng)中，從而完成對苯甲酸、山梨酸等16種防腐劑含量的測定。以C18柱為分析柱，將pH為3.8、含有0.02mmol/L乙二胺四乙酸二鈉的0.025mol/L磷酸二氫鈉溶液作為無機相，將甲醇作為有機相，梯度洗脫，在洗脫速度1mL/min、波長230nm的條件下進行檢測。結果表明，該方法在20-500ng/mL范圍內線性關系良好，相關系數(shù)均不小于0.9995，16種防腐劑的加標回收率為98.8%-102.5%，測定結果的相對標準偏差為0.78%-2.36%。

4.食品抗氧化劑檢測。食品抗氧化劑也能對食品的腐敗、變質起到延緩作用，并且同樣有天然和人工之分。常見的天然抗氧化劑主要有植酸、茶多酚以及花青素，不需要人工進行合成，相對來說更為安全，但提取與生產成本高，難以大范圍地推廣使用，并且穩(wěn)定性相對較差，無法實現(xiàn)長期穩(wěn)定的抗氧化效果。常用的人工合成抗氧化劑主要有沒食子酸丙酯、二丁基羥基甲苯和丁基羥基茴香醚，成本低且穩(wěn)定性更好，但使用過量的話會嚴重影響人體健康，因此必須嚴格管控。

高效液相色譜法具有樣品回收率高、靈敏、快速的優(yōu)勢，可以對食品中抗氧化劑的含量做出準確分析。如果樣品為固體，需用乙腈提取，再用固相萃取柱凈化；如果樣品為油脂，需經(jīng)過有機溶劑溶解后，使用凝膠滲透色譜凈化，再利用高效液相色譜儀測定，用外標法定量。有研究者對食用油中的合成抗氧化劑進行檢驗，結果表明，在10-70μg/mL范圍內線性關系良好，相關系數(shù)均大于0.999，加標回收率為84.56%-101.12%，相對標準偏差為1.27%-4.82%。

四、高效液相色譜法

檢測食品添加劑的注意事項

雖然高效液相色譜法對食品添加劑的檢測具有突出優(yōu)勢，但為了保證檢測、分析結果的準確性，仍然有很多問題需要加以注意。一要做好檢測前的準備工作，包括過濾掉0.45μm以上的流動相顆粒，并對流動相進行脫氣處理。二要控制好柱壓與氣泡，可先將保護柱拆下，觀察柱壓