潘小娟 史曉光 汪唐順 陳振宙 左禧萌

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院,北京,100700)

乳腺癌已經(jīng)成為全球女性新發(fā)癌癥中發(fā)生率最高的癌癥[1-2]。目前乳腺癌的治療方法主要為手術(shù)、放化療及靶向治療等。化療作為乳腺癌的主要治療手段之一,不良反應(yīng)主要為惡心嘔吐、骨髓抑制及心臟毒性等[3],這些不良反應(yīng)使抗腫瘤藥物的臨床應(yīng)用難以達(dá)到滿意的治療預(yù)期,且隨著化療藥物的應(yīng)用,患者逐漸出現(xiàn)耐藥[4],藥物耐藥性是腫瘤治療中一個(gè)需要迫切解決的問題。中醫(yī)藥在臨床中抗腫瘤治療的效果得到了越來越多的認(rèn)可,并且在臨床治療實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)其具有獨(dú)特的臨床優(yōu)勢。中藥因其不良反應(yīng)小等優(yōu)勢對于乳腺癌術(shù)后并發(fā)癥及化療不良反應(yīng)有較好的療效[5]。中藥在乳腺癌治療過程中發(fā)揮著不可替代的作用,尋找治療效果好,不良反應(yīng)小的中醫(yī)藥物質(zhì)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究重點(diǎn)之一。槲皮素作為一種廣泛存在的中草藥黃酮類化合物,具有抗腫瘤、抗炎癥、抗菌和保護(hù)心血管的作用[6]。研究表明,大鼠肉瘤蛋白(Rat Sarcoma,Ras)-加速纖維肉瘤蛋白(Rapidly Accelerated Fibrosarcoma,Raf)-絲裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activatedProtein Kinase,MAPK)-細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Extracellular Signal Regulated Kinase,ERK)信號通路在乳癌細(xì)胞的增殖、凋亡及分化過程中具有重要作用。此外,RAS/RAF/MEK/ERK信號通路可以減少血管生成因子的分泌,抑制乳腺癌前病變血管生成[7]。雖然已有研究表明槲皮素可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖[8],但關(guān)于槲皮素作用于RAS/RAF/MEK1信號通路的具體機(jī)制相關(guān)研究較少。本研究對槲皮素抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞作用機(jī)制進(jìn)行研究,探討其與RAS/RAF/MEK1信號通路的關(guān)系,為槲皮素應(yīng)用于臨床提供更多的實(shí)驗(yàn)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 乳腺癌MCF-7細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心提供(資源編號:1101HUM-PUMC000013)。

1.1.2 藥物 槲皮素購自北京索萊寶科技有限公司(批號:312C022,貨號:SQ8030,純度≥98%)。

1.1.3 試劑與儀器 N/H/K-Ras抗體(Proteintech,美國,貨號:HX16148);MEK1抗體(Proteintech,美國,貨號:11049-1-AP);YAP1抗體(Proteintech,美國,貨號:10176-2-AP);ER抗體(Proteintech,美國,貨號:21244-1-AP);PR抗體(Proteintech,美國,貨號:25871-1-AP);GAPDH(Proteintech,美國,貨號:10494-1-AP);山羊抗兔IgG(H&L)二抗Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(Proteintech,美國,貨號:SA00001-2);二甲基亞砜(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BS087);DMEM培養(yǎng)液(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL304A);10%胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司,貨號:11011-8611);青霉素(100 U/mL)鏈霉素(100 mg/mL)溶液(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL505A);蛋白酶抑制劑cocktail(北京索萊寶科技有限公司,貨號:P6730);Annexin V-FITC/PI(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL110B);胰蛋白酶消化液(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL527A);4%多聚甲醛(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL539A);0.1%曲拉通(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BS084-500ml);RIPA細(xì)胞裂解液(北京索萊寶科技有限公司,貨號:R0100);PBS緩沖液(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL302A);DAPI溶液(北京蘭杰柯科技有限公司,貨號:BL105B)。細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑檢測試劑盒(北京蘭杰柯科技有限公司,型號:BS350A);熒光顯微鏡(Leica公司,德國,型號:DM1000);酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技有限公司,型號:51119180ET);流式細(xì)胞儀(貝克曼庫爾特國際貿(mào)易有限公司,型號:CYTOMITS FC 500)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng) 乳腺癌MCF-7細(xì)胞系經(jīng)STR鑒定且無支原體,以DMEM培養(yǎng)液(Dulbecco′s modified Eagle Medium,DMEM)加入10%胎牛血清和青霉素(100 U/mL)鏈霉素(100 mg/mL)溶液進(jìn)行配置,成為完全培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為5%CO2,37 ℃的加濕培養(yǎng)箱。

1.2.1.2 槲皮素的制備 用二甲基亞砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)充分溶解槲皮素,隨機(jī)溶解為23.75 μmol/L、47.5 μmol/L、95 μmol/L、190 μmol/L,母液終濃度為190 μmol/L,用0.22 μm濾膜過濾2次,于4 ℃保存1周。1周內(nèi)4 ℃保存。

1.2.1.3 分組 將培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞采用數(shù)字隨機(jī)法分為空白對照組(0 μmol/L)、低劑量組(23.75 μmol/L)、中劑量組(47.5 μmol/L)、高劑量組(95 μmol/L)、極高劑量組(190 μmol/L)。

1.2.2 干預(yù)方法 空白對照組:乳腺癌MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基+0 μmol/L濃度的槲皮素培養(yǎng)基;低劑量組:乳腺癌MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基+23.75 μmol/L濃度的槲皮素培養(yǎng)基;中劑量組:乳腺癌MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基+47.5 μmol/L濃度的槲皮素培養(yǎng)基;高劑量組:乳腺癌MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基+95 μmol/L濃度的槲皮素培養(yǎng)基;極高劑量組:乳腺癌MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基+190 μmol/L濃度的槲皮素培養(yǎng)基。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)法(CCK-8)測定細(xì)胞活性 96孔板中種植MCF-7細(xì)胞,用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后,分別替換為含不同濃度槲皮素(0、23.75、47.5、95、190 μmol/L)的培養(yǎng)基繼續(xù)在37 ℃、5%CO2、37 ℃條件下培養(yǎng),分別在培養(yǎng)24 h、48 h和72 h后加入CCK-8試劑混勻,孵育1 h使用酶標(biāo)儀在450 nm處測定吸光度(Absorbance,A)值。根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞生長抑制率:抑制率(%)=(對照組A值-觀察組A值)/對照組A值×100%。

1.2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率 6孔板中種植密度為1.0×105MCF-7細(xì)胞/孔,貼壁后加入含不同濃度(23.75、47.5、95、190 μmol/L)槲皮素的培養(yǎng)基5 mL,培L養(yǎng)時(shí)間為48 h。然后用磷酸鹽緩沖液(Phosphate-buffered Saline,PBS)洗滌3次,適量的加入胰蛋白酶進(jìn)行消化,收集其細(xì)胞懸液,用1 000 r/min轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心5 min,離心半徑5.5 cm,棄其上清,再使用預(yù)冷的PBS重懸,離心后將細(xì)胞重懸于500 μL Binding Buffer(上樣緩沖液);加入10 μL Annexin V-FITC(一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒)以及5 μL碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)輕輕混勻,使用流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。

1.2.3.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測RAS、MEK1、YAP的表達(dá) 25 mL培養(yǎng)瓶中種植密度為1.0×105MCF-7細(xì)胞/瓶,貼壁后加入含不同濃度(0、23.75、47.5、95、190 μmol/L)槲皮素培養(yǎng)基5 mL培養(yǎng)48 h。用PBS洗滌3次,加入適量胰蛋白酶消化,收集細(xì)胞懸液,用1 000 r/min轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心5 min,離心半徑5.5 cm,棄上清,使用預(yù)冷的PBS清洗3次,離心后收集細(xì)胞沉淀,用3 000 r/min轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心5 min,離心半徑8 cm,每組細(xì)胞沉淀加入含蛋白酶抑制劑cocktail的RIPA裂解液100 μL,在冰上裂解細(xì)胞30 min,手持式超聲儀超聲10 s。裂解后離心機(jī)離心收集上清,用12 000 r/min轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心15 min,離心半徑10 cm,BCA法蛋白定量后將蛋白濃度調(diào)至1.5 μg/μL,加5×loading buffer(上樣緩沖液),沸水煮10 min。用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(100 V,1.5 h),轉(zhuǎn)膜(206 mA,2.25 min),封閉1 h,4 ℃水平搖床一抗(N/H/K-Ras、Mek1、Yap1、GAPDH)孵育過夜。TBST緩沖液(Tris Buffered Saline with Tween-20,TBST)洗滌后加入二抗(1∶10 000)進(jìn)行孵育,洗滌,然后用配制的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(Enhanced Chemiluminescence,ECL)發(fā)光液與膜一起孵育30 s,用化學(xué)發(fā)光成像儀自動曝光,Image QuantTmlAS-4000Mini Imager攝片,ImageJ180分析量化條帶灰度值,計(jì)算相對蛋白的含量。

1.2.3.4 免疫熒光染色及定量分析 12孔板中加入細(xì)胞爬片,種植密度為1.0×105MCF-7細(xì)胞/孔,貼壁后,加入含不同濃度(0、23.75、47.5、95、190 μmol/L)槲皮素的培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h。4%多聚甲醛固定15 min,PBS溶液清洗3次。0.1%曲拉通-100于4 ℃條件下通透20 min,PBS清洗3三次。5%BSA封閉液封閉7 ℃孵育20 min,加一抗于4 ℃條件下孵育24 h,用PBS洗滌3次,加二抗后放37 ℃避光孵育30 min,PBS清洗3次,使用含4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-Diamidino-2-phenylindole Dihydrochloride,DAPI)熒光淬滅封片劑封片,熒光顯微鏡下觀察染色情況。攝片后ImageJ180進(jìn)行平均熒光強(qiáng)度的分析。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌MCF-7細(xì)胞活力的比較 與空白對照組比較,低劑量組、中劑量組、高劑量組、極高劑量組的乳腺癌MCF-7細(xì)胞活力均有下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)?？瞻讓φ战M在24 h、48 h、72 h的A值均高于低劑量組、中劑量組、高劑量組和極高劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2 乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡率的比較 與空白對照組比較,低劑量組、中劑量組、高劑量組、極高劑量組的乳腺癌MCF-7細(xì)胞晚期細(xì)胞凋亡率占比增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖1?？瞻讓φ战M和低劑量組的細(xì)胞凋亡率相對接近(P>0.05),低劑量組、中劑量組、高劑量組和極高劑量組任意2組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表1 各組不同時(shí)間乳腺癌MCF-7細(xì)胞活力比較

圖1 流式細(xì)胞儀檢測各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的情況

表2 各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡率的比較

2.3 乳腺癌MCF-7細(xì)胞MEK1、RAS、YAP蛋白表達(dá)比較 與空白對照組比較,中劑量組的MEK1、RAS、YAP蛋白的表達(dá)有一定降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);極高劑量組的MEK1、RAS、YAP蛋白有更明顯的降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);此外,低劑量組的YAP蛋白表達(dá)有一定下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3,圖2。

2.4 乳腺癌MCF-7細(xì)胞中雌、孕激素受體表達(dá)比較 與空白對照組比較,中劑量組和極高劑量組的ER表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);低劑量組、高劑量組的雌、孕激素受體表達(dá)和中劑量組、極高劑量組的孕激素受體表達(dá)均有顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表4,圖3。

圖2 各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞YAP1、MEK1、RAS蛋白表達(dá)

3 討論

槲皮素(3,3′,4′,5,7-五羥基黃酮)是最豐富的黃酮類化合物之一[9],既往研究發(fā)現(xiàn)槲皮素對許多不同類型的癌細(xì)胞有效[10],研究表明對前列腺癌、肝癌、肺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌是最有效的[11]。馮亞莉等[12]認(rèn)為槲皮素的抗癌活性可歸因于與多種受體的相互作用,即死亡受體、生長因子受體和激素受體,以及抑制可能引發(fā)癌癥的酶系統(tǒng),參與修飾癌癥發(fā)展的信號系統(tǒng)等。盡管槲皮素對許多癌癥的抗癌作用已得到廣泛認(rèn)可,但關(guān)于槲皮素作用于RAS信號通路的作用機(jī)制研究較少。相關(guān)研究證明槲皮素通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)發(fā)揮抗癌作用,本實(shí)驗(yàn)主要研究的是槲皮素抗腫瘤相關(guān)機(jī)制,有研究表明槲皮素可調(diào)控口腔癌細(xì)胞中癌基因蛋白質(zhì)p21-ras(Oncogene Protein p21-ras)的表達(dá)[13]。在本研究中,隨著槲皮素濃度的上升,MEK1、RAS及YES關(guān)聯(lián)蛋白重組蛋白(Recombinant Yes Associated Protein,YAP)的表達(dá)均出現(xiàn)不同程度的下降,其中MEK1、RAS均以190 μmol/L為最佳作用濃度,提示槲皮素對RAS-RAF信號通路中與腫瘤增殖相關(guān)的關(guān)鍵蛋白MEK1、RAS起到抑制作用。除此之外,隨著槲皮素干預(yù)濃度的上升,乳腺癌MCF-7細(xì)胞的活性出現(xiàn)不同程度的下降,細(xì)胞凋亡出現(xiàn)不同程度的水平上升,這表明槲皮素對Ras信號通路的影響可能是進(jìn)一步影響MCF-7細(xì)胞的活性并促進(jìn)凋亡的原因。

表3 各組MEK1、RAS、YAP蛋白表達(dá)比較

表4 各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞中雌、孕激素受體表達(dá)比較

圖3 各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞中ER、PR熒光染色(其中綠色為DyLight488,紅色為DyLight594,×400)

RAS信號通路是經(jīng)典信號通路之一,在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和存活方面起著核心作用[14]。Ras作為RAS信號通路上游關(guān)鍵信號分子之一,可以通過與二磷酸鳥苷(Guanosine-5′-diphosphate,GDP)(與GDP結(jié)合為失活狀態(tài))或三磷酸鳥苷(Guanosine Triphosphate,GTP)(與GTP結(jié)合為活化狀態(tài))結(jié)合發(fā)揮活性,參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡以及分化[15]。既往研究表明,RAS信號通路主要依靠各級激酶的磷酸化而激活,具體表現(xiàn)為Ras募集并激活Raf,Raf促進(jìn)MEK1/2和ERK1/2的激活[16]。ERK的激活可磷酸化多數(shù)胞漿內(nèi)和核內(nèi)的靶基因,它們能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長因子調(diào)節(jié)的基因表達(dá),以此抑制Ras/Raf/MEK/ERK信號通路,進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。此外,RAS/RAF/MEK/ERK信號通路還是多種血管生成信號通路的調(diào)節(jié)中心,通過協(xié)調(diào)多種促進(jìn)或抑制血管生成的信號而決定新生血管的最終狀態(tài)。乳腺癌是一種典型的血管依賴性腫瘤,其癌前病變的致癌機(jī)制與腫瘤血管生成密切相關(guān)[17]。研究表明RAS/RAF/MEK/ERK信號通路可以下調(diào)血管生成因子的分泌,從而抑制乳腺癌前病變的血管生成[18]。因此抑制Ras信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)或者降低Ras相關(guān)關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平可使Ras失活,從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和癌前病變血管的生成[19]。

本研究中另一個(gè)研究靶點(diǎn)為Hippo信號通路中的經(jīng)典蛋白YAP。Hippo信號通路為由一組保守的激酶構(gòu)成,對細(xì)胞生長具有重要作用的信號通路,通過調(diào)控細(xì)胞生長影響組織大小,在癌癥中,YAP的過表達(dá)影響下游因子轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)相關(guān)結(jié)構(gòu)域(Transcriptional Enhanced Associate Domain,TEAD)、腫瘤蛋白p73(Tumor Protein p73,p73)等一系列基因的表達(dá),從而達(dá)到使腫瘤細(xì)胞增殖不受控制的目的。由于TEADs是EGFR-RAS-RAF-MAPK通路的中間體,是腫瘤中最重要的非受控分子通路之一,因此TEAD在表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)、肉瘤病毒癌基因(Kirsten Rat Sarcoma Viral Oncogene,KRAS)或B-Raf原癌基因-絲氨酸/蘇氨酸激酶(B-Raf Proto-oncogene,Serine/Threonine Kinase,BRAF)瘤突變下游的抗藥性和活動過度的進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用[20]。與此同時(shí),RAS和Ras-GTP酶之間的相互作用阻礙了YAP1核定位。這些簡單的支架將不同RAS家族小G蛋白的活化與Hippo信號通路或p53調(diào)節(jié)聯(lián)系起來[21]。因此,YAP盡管是Hippo信號通路中的重要靶點(diǎn),其作用不僅僅是對Hippo信號通路的影響,Yap與Ras信號通路的相互作用仍舊是對腫瘤細(xì)胞增值甚至多重耐藥造成影響的重要因素,值得關(guān)注[22-23]。

槲皮素經(jīng)由調(diào)控Ras/MEK1途徑的下游可能是PI3K/AKT信號通路,研究表明槲皮素可以通過槲皮素-3-甲基醚抑制PI3K/AKT信號通路抑制人乳腺癌干細(xì)胞的形成[24]。PI3K/AKT/mTOR信號通路是一個(gè)影響多種生理活動的廣泛存在于體細(xì)胞中的信號通路。相關(guān)研究表明Raf1可以在MAPK/ERK和PI3K/AKT之間建立聯(lián)系,使2種不同代謝途徑之間可以進(jìn)行相關(guān)反饋[25]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)不同濃度的槲皮素干預(yù)后,乳腺癌MCF-7細(xì)胞中MEK1及RAS蛋白的表達(dá)水平出現(xiàn)顯著降低,當(dāng)干預(yù)濃度達(dá)到190 μmol/L時(shí)效果最佳。該結(jié)果表明,槲皮素通過抑制Ras信號通路MEK1、RAS蛋白進(jìn)而影響MCF-7細(xì)胞活性并促進(jìn)其凋亡。并且,本研究中槲皮素是否通過Ras信號通路作用于PI3K/AKT信號通路,為之后槲皮素相關(guān)作用機(jī)制研究提供了一個(gè)新思路。

乳腺癌在世界范圍內(nèi)是發(fā)病率最高的惡性腫瘤[26],隨著醫(yī)學(xué)水平的逐步提高,乳腺癌的遠(yuǎn)期生存率得到明顯升高,目前癌癥治療的主要困難是由于癌細(xì)胞逃避凋亡而對治療產(chǎn)生耐藥性[27],需要尋找新的藥物克服耐藥性。因此,尋找不良反應(yīng)小的天然抗腫瘤藥物成為大眾研究的新目標(biāo)。研究表明,天然植物及中藥中含有的黃酮類化合物具有比較好的抗腫瘤作用[28],如野菊花總黃酮抑制MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[29];木犀草素可以激活p53信號通路、上調(diào)miR-34a-5p表達(dá)水平,進(jìn)而抑制肺癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡[30]。通過臨床前研究表明,在癌癥治療的同時(shí)使用植物化學(xué)物質(zhì)可以改善疾病預(yù)后,對癌癥的化療具有增強(qiáng)療效的作用[31]。已有研究表明槲皮素可以增強(qiáng)MCF-7乳腺癌細(xì)胞對5-氟尿嘧啶的化學(xué)敏感性[32],槲皮素在本研究中可顯著提高M(jìn)CF-7細(xì)胞中雌激素受體(Estrogen Receptor,ER)、孕激素受體(Progesterone Receptor,PR)表達(dá),乳腺癌是激素依賴性腫瘤,表明槲皮素可以通過增加乳腺癌MCF-7細(xì)胞中ER、PR表達(dá)從而增加乳腺癌治療敏感性,為提高臨床癌癥治療效果及為臨床化療耐藥尋找新的突破口提供實(shí)驗(yàn)理論支持。

綜上所述,槲皮素對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖具有抑制作用,并可促進(jìn)其細(xì)胞凋亡,抑制作用隨著藥物濃度的增加而逐步增強(qiáng),這和既往其他相關(guān)研究結(jié)果一致。本研究創(chuàng)新之處在于初步探索槲皮素作用于Ras信號通路對乳腺癌MCF-7的影響,結(jié)果表明,槲皮素可能通過抑制RAS/RAF/ERK信號通路關(guān)鍵蛋白MEK1、RAS進(jìn)而降低MCF-7細(xì)胞活性,并促進(jìn)其凋亡。同時(shí)為后續(xù)研究槲皮素通過Ras信號通路作用于PI3K/AKT信號通路提供新思路。此外,在本實(shí)驗(yàn)中槲皮素可以提高M(jìn)CF-7細(xì)胞中ER、PR的表達(dá)水平,這為我們解決臨床耐藥、提高治療效果提供了一個(gè)新的角度。本研究的不足之處在于缺少對于槲皮素現(xiàn)有應(yīng)用的討論,但相信隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分子研究的發(fā)展,槲皮素可以早日克服難溶于水、口服生物利用度低的缺點(diǎn),更好更廣泛地應(yīng)用于臨床。

利益沖突聲明:無。