摘要 目的：觀察柚皮苷通過調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶2（JAK2）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3（STAT3）信號(hào)通路對(duì)急性缺血性腦梗死大鼠神經(jīng)損傷的影響。方法：將60只大鼠分為對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、模型＋生理鹽水組、模型＋柚皮苷組和模型＋柚皮苷＋白細(xì)胞介素（IL）-6組，每組10只大鼠。采用大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）法建立急性缺血性腦梗死模型。術(shù)后24 h對(duì)神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分，測(cè)定腦梗死面積，觀察腦組織病理形態(tài)；干/濕法檢測(cè)腦水腫；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法（TUNEL）檢測(cè)腦細(xì)胞凋亡；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)氧化應(yīng)激因子［過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）］和炎性因子［腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6］。結(jié)果：與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、水腫指數(shù)升高，腦梗死面積增加，細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙變寬，細(xì)胞空泡增多，細(xì)胞變性，細(xì)胞染色不均勻，變性細(xì)胞指數(shù)（DCI）、Bax、凋亡指數(shù)（AI）表達(dá)、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、磷酸化JAK2（p-JAK2）、磷酸化STAT3（p-STAT3）表達(dá)升高，凋亡細(xì)胞呈深褐色，Bcl-2表達(dá)、CAT、SOD和GSH-Px活性降低（P＜0.05）；與模型組和模型＋生理鹽水組比較，模型＋柚皮苷組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、水腫指數(shù)降低，腦梗死面積減小，細(xì)胞排列有序，細(xì)胞間隙少，細(xì)胞空泡少，細(xì)胞變性和細(xì)胞染色不均有所緩解，DCI、Bax、AI表達(dá)、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、p-JAK2、p-STAT3表達(dá)減少，深褐色凋亡細(xì)胞較少，Bcl-2表達(dá)、CAT、SOD和GSH-Px活性升高（P＜0.05）；與模型＋柚皮苷組比較，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、水腫指數(shù)升高，腦梗死面積增加，細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙和空泡增多，細(xì)胞變性且染色不均，DCI、Bax、AI表達(dá)、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、p-JAK2、p-STAT3表達(dá)升高，深褐色凋亡細(xì)胞增多，Bcl-2表達(dá)、CAT、SOD和GSH-Px活性降低（P＜0.05）。結(jié)論：柚皮苷對(duì)急性缺血性腦梗死大鼠神經(jīng)損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路及氧化應(yīng)激、炎癥和細(xì)胞凋亡有關(guān)。

關(guān)鍵詞 急性缺血性腦梗死；柚皮苷；蛋白酪氨酸激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3信號(hào)通路；神經(jīng)損傷；大鼠；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.16.012

Effect of Naringin on Neurological Injury in Rats with Acute Ischemic Cerebral Infarction by Regulating JAK2/STAT3 Signaling Pathway

ZHENG Guiming， LU Junyan， SHI Libin

Shijiazhuang Ping′an Hospital， Shijiazhuang 050000， Hebei， China， E-mail： 623611399@qq.com

Abstract Objective：To observe the effects of naringenin on neurological injury in rats with acute ischemic cerebral infarction by regulating the protein tyrosine kinase 2（JAK2）/signal transducer and activator 3（STAT3） signaling pathway.Methods：Sixty rats were divided into the control group，sham group，model group，model＋normal saline group，model＋naringenin group，and model＋naringenin＋interleukin（IL）-6 group，with 10 rats in each group.A acute ischemic cerebral infarction model was established using the middle cerebral artery occlusion（MCAO） method.Neurological function was scored at 24 h postoperatively.The area of cerebral infarction and brain histopathological morphology were determined.The cerebral edema was detected by dry/wet assay.JAK2/STAT3 signaling pathway proteins and the expression of Bax and Bcl-2 proteins were detected by Western Blot.The apoptosis of brain cell was detected by terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling assay（TUNEL）.The levels of esoxidative stress factors［catalase（CAT），superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px），malondialdehyde（MDA）］ and inflammatory factors［tumor necrosis factor-α（TNF-α），IL-1β，and IL-6］ were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Results：Compared with the control group and sham group，neurological deficit scores，edema index，and area of cerebral infarction in the model group" increased，cellular arrangement" disorganized，cellular gaps" widened，cellular vacuoles，cellular degeneration，uneven cellular staining ，degenerative cell index（DCI），Bax，AI expression，Bax/Bcl-2 ratio，MDA content，serum TNF-α，IL-1β，IL-6，phosphorylated JAK2（p-JAK2），and phosphorylated STAT3（p-STAT3） expression" increased，apoptotic cells were dark brown in color，and Bcl-2 expression，CAT，SOD，and GSH-Px activities decreased（P＜0.05）.Compared with the model group and the model＋normal saline group，neurological deficit scores，edema index，and cerebral infarct area in the model＋naringenin group decreased，orderly cellular arrangement，cellular gaps，and cellular vacuoles decreased，mitigated cellular degeneration and cellular staining irregularities，and DCI，Bax，and AI expression，Bax/Bcl-2 ratio，MDA content，serum TNF-α，IL-1β，IL-6，p-JAK2，and p-STAT3 expression decreased，dark brown apoptotic cells were fewer，and Bcl-2 expression，CAT，SOD，and GSH-Px activities increased（P＜0.05）.Compared with the model＋naringenin group，neurological deficit scores，edema index，and cerebral infarct area in the model＋naringenin＋I(xiàn)L-6 group increased，cellular arrangement disorganized，cellular gaps and vacuoles" increased，cellular degeneration and uneven staining，and expressions of DCI，Bax，AI，Bax/Bcl-2 ratio，MDA content，serum TNF-α，IL-1β，IL-6，p-JAK2，p-STAT3 expression increased，dark brown apoptotic cells，Bcl-2 expression，CAT，SOD，and GSH-Px activities" decreased（P＜0.05）.Conclusion：Naringin showed a protective effect of neurological injury in rats with acute ischemic cerebral infarction，and the mechanism might be related to the inhibition of the JAK2/STAT3 signaling pathway，oxidative stress，inflammation，and apoptosis.

Keywords acute ischemic cerebral infarction; naringin; protein tyrosine kinase 2/signal transducer and activator 3 signaling pathway; neurological injury; rats; experimental study

急性缺血性腦梗死是一種發(fā)病率高、死亡率高的腦血管疾?。?］。目前急性缺血性腦梗死的治療手段有限、醫(yī)療費(fèi)用昂貴且藥物副作用明顯，治療效果不確定［2］，因此，尋找一種新型急性缺血性腦梗死治療策略具有重要的臨床價(jià)值，闡明急性缺血性腦梗死的病理生理機(jī)制至關(guān)重要。急性缺血性腦梗死的病理過程及相關(guān)機(jī)制尚未明確，多項(xiàng)研究表明，急性缺血性腦梗死的機(jī)制可能與自由基、炎癥刺激、神經(jīng)元凋亡、氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸神經(jīng)毒性、腦組織代謝異常等有關(guān)；炎癥、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡可能在急性缺血性腦梗死中發(fā)揮著重要的作用［3-5］。因此，抑制炎癥、氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡可能是治療急性缺血性腦梗死的一種有效策略。柚皮苷是一種生物類黃酮，廣泛存在于柚子和柑橘類植物中，是一種無毒的保健品［6］。柚皮苷已發(fā)現(xiàn)存在于許多治療各種炎癥的中草藥中，相關(guān)研究表明，柚皮苷具有抗氧化、抗纖維化、抗炎、降脂等多種生物學(xué)作用［7-9］；柚皮苷在蛛網(wǎng)膜下腔出血［10］、創(chuàng)傷性腦損傷［11］等不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中均顯示出神經(jīng)保護(hù)作用；多項(xiàng)研究顯示，柚皮苷對(duì)腦梗死有一定的保護(hù)作用，但其潛在的調(diào)控機(jī)制尚未明確［12-13］；在骨質(zhì)疏松癥中，柚皮苷可抑制蛋白酪氨酸激酶2（JAK2）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3（STAT3）信號(hào)通路的激活［14］。然而，JAK2/STAT3信號(hào)通路是否參與柚皮苷在急性缺血性腦梗死后的神經(jīng)保護(hù)作用尚未明確。本研究觀察柚皮苷通過調(diào)節(jié)JAK2/STAT3信號(hào)通路對(duì)急性缺血性腦梗死大鼠神經(jīng)損傷的影響，進(jìn)一步證實(shí)柚皮苷對(duì)急性缺血性腦梗死的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥物和試劑

無特定病原體（SPF）級(jí)SD大鼠60只，6～8周齡，體質(zhì)量250～280 g，購(gòu)自華中科技大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（鄂）2021-0009。操作前將大鼠置于SPF級(jí)（24±2）℃環(huán)境中，濕度50%～60%，暗/光循環(huán)12 h，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。大鼠均自由飲食和飲水。本研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)授權(quán)批準(zhǔn)。

柚皮苷（成都普思生物科技股份有限公司），JAK2/STAT3信號(hào)通路激活劑、白細(xì)胞介素-6（IL-6）（美國(guó)Peprotech），戊巴比妥鈉（默克），氯化三苯基四氮唑（TTC）（南京建成生物工程研究所），Bax、Bcl-2、磷酸化JAK2（p-JAK2）、JAK2、磷酸化STAT3（p-STAT3）、STAT3、IgG抗體及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法（TUNEL）檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Abcam），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)試劑盒（武漢賽培生物科技有限公司）、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（上海碧云天生物公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、模型＋生理鹽水組、模型＋柚皮苷組和模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組，每組10只大鼠。模型＋柚皮苷組大鼠術(shù)前給予柚皮苷（10 mg/kg）預(yù)灌胃3 d，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組大鼠術(shù)前給予柚皮苷（10 mg/kg）和IL-6（0.1 μg/μL）預(yù)灌胃3 d，模型＋生理鹽水組大鼠術(shù)前給予生理鹽水（10 mg/kg）預(yù)灌胃3 d。柚皮苷劑量根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》中人與動(dòng)物給藥劑量換算系數(shù)，經(jīng)計(jì)算10 mg/kg為大鼠的給藥劑量［13］。IL-6劑量參照相關(guān)文獻(xiàn)［15］。模型組、模型＋生理鹽水組、模型＋柚皮苷組和模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組大鼠經(jīng)大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）誘導(dǎo)急性缺血性腦梗死。假手術(shù)組除不阻斷大腦中動(dòng)脈外，其余操作與模型組相同。對(duì)照組為正常飼養(yǎng)的大鼠。

1.3 MCAO造模

參考相關(guān)文獻(xiàn)［16］進(jìn)行MCAO造模：手術(shù)過程中，大鼠先用戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉，取仰臥位固定，核心體溫維持在37 ℃。切開大鼠右頸，充分暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，分離并結(jié)扎頸外動(dòng)脈及其分支。將3-0尼龍縫線鈍端插入頸內(nèi)動(dòng)脈，并延伸至大腦前動(dòng)脈阻斷大腦中動(dòng)脈，導(dǎo)致大腦中動(dòng)脈起始段及其側(cè)支供血區(qū)發(fā)生缺血壞死。MCAO 2 h后，拆除尼龍縫線恢復(fù)血流，之后縫合皮膚消毒，依次單籠飼養(yǎng)。24 h后，對(duì)大鼠神經(jīng)系統(tǒng)功能進(jìn)行評(píng)分并處死進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

1.4 神經(jīng)功能測(cè)定和腦組織病理形態(tài)觀察

采用雙盲法評(píng)價(jià)各組大鼠神經(jīng)功能。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分為無神經(jīng)損傷癥狀；1分為患側(cè)前爪不能完全伸展；2分為患側(cè)行走時(shí)前爪向內(nèi)旋轉(zhuǎn)；3分為大鼠行走時(shí)患側(cè)前爪向內(nèi)傾斜；4分為患側(cè)腳爪不能自主活動(dòng)且失去意識(shí)；5分為患側(cè)肢體完全不能活動(dòng)。若得分＞3分，認(rèn)為急性缺血性腦梗死造模成功。

腦組織制作石蠟切片，HE染色，觀察腦組織病理形態(tài)。在光鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)缺血區(qū)，視野不重疊。神經(jīng)元細(xì)胞核呈嗜酸性藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)和間質(zhì)呈嗜酸性紅色。采用變性細(xì)胞指數(shù)法測(cè)定缺血區(qū)細(xì)胞損傷程度。變性細(xì)胞指數(shù)（DCI）＝變性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.5 腦梗死區(qū)及腦組織水腫評(píng)估

再灌注24 h后，各組大鼠均斷頭處死，快速清除血塊和軟腦膜，收集腦組織。采用TTC染色法測(cè)定梗死面積，具體步驟參照相關(guān)文獻(xiàn)［17］，梗死面積/腦總面積的百分比為統(tǒng)計(jì)參數(shù)。采用干/濕重量法計(jì)算腦水腫指數(shù)，腦組織水腫指數(shù)＝（濕重－干重）/濕重×100%。

1.6 TUNEL檢測(cè)腦細(xì)胞凋亡

采用TUNEL試劑盒檢測(cè)腦細(xì)胞凋亡。所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。組織切片厚度為4～6 μm。將腦切片為與末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶在37 ℃孵育1 h，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗滌3次，之后室溫下與IgG孵育30 min。以0.02%過氧化氫（H2O2）為酶底物，四氯化鎳二氨基聯(lián)苯胺（DAB）為顯色劑。凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈深褐色，陰性細(xì)胞的細(xì)胞核無染色。凋亡細(xì)胞定義為TUNEL陽性，核碎裂，核固縮或核裂。凋亡指數(shù)（AI，%）＝陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.7 氧化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定

采用ELISA檢測(cè)腦組織氧化應(yīng)激水平及血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，參照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)。在450 nm波長(zhǎng)的紫外分光光度計(jì)上測(cè)定MDA、SOD、CAT和GSH-Px，并計(jì)算表達(dá)量。

1.8 蛋白免疫印跡法（Western Blot）

收集腦組織，使用蛋白酶抑制劑溶解于RIPA緩沖液中?？偟鞍滋崛〉木唧w步驟以說明書為依據(jù)。二喹啉甲酸（BCA）法檢測(cè)蛋白濃度，十二烷基酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離蛋白。之后蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上，用牛奶封閉。β-actin作為內(nèi)參。將膜與Bax、Bcl-2、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3和β-actin抗體在4 ℃條件下孵育過夜。之后用洗滌緩沖液（TBST）沖洗膜3次，與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的IgG二抗在37 ℃條件下孵育1 h。使用電化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑觀察條帶。使用Image J軟件計(jì)算灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦組織水腫及腦梗死面積比較

與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、水腫指數(shù)升高（P＜0.05），腦梗死面積增加（P＜0.05）；與模型組和模型＋生理鹽水組比較，模型＋柚皮苷組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、水腫指數(shù)降低，腦梗死面積減?。≒＜0.05）；與模型＋柚皮苷組比較，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組大鼠神經(jīng)功能缺損得分、水腫指數(shù)升高，腦梗死面積增加（P＜0.05）。詳見表1。

2.2 各組大鼠腦組織病理損傷改變

對(duì)照組和假手術(shù)組細(xì)胞排列整齊清晰，染色均勻，未見變性細(xì)胞。與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙變寬，細(xì)胞空泡增多，細(xì)胞變性，細(xì)胞染色不均勻；與模型組、模型＋生理鹽水組比較，模型＋柚皮苷組細(xì)胞排列有序，細(xì)胞間隙減小，細(xì)胞空泡少，細(xì)胞變性和細(xì)胞染色不均有所緩解；與模型＋柚皮苷組比較，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間隙和空泡增多，細(xì)胞變性且染色不均。詳見圖1。模型組DCI高于對(duì)照組和假手術(shù)組，模型＋柚皮苷組DCI低于模型組和模型＋生理鹽水組，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組DCI高于模型＋柚皮苷組（P＜0.05）。詳見表2。

2.3 各組大鼠腦細(xì)胞凋亡、Bax、Bcl-2表達(dá)及Bax/Bcl-2比值比較

與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組凋亡細(xì)胞呈深褐色，AI升高，Bax表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)降低，Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.05）；與模型組和模型＋生理鹽水組比較，模型＋柚皮苷組深褐色凋亡細(xì)胞較少，AI降低，Bax表達(dá)降低，Bcl-2表達(dá)增加，Bax/Bcl-2比值降低（P＜0.05）；與模型＋柚皮苷組比較，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組深褐色凋亡細(xì)胞增多，AI升高，Bax表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)降低，Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.05）。詳見圖2、圖3和表3。

2.4 各組氧化應(yīng)激因子比較

與對(duì)照組和假手術(shù)組比較，模型組CAT、SOD和GSH-Px活性降低，MDA含量增加（P＜0.05）；與模型組和模型＋生理鹽水組比較，模型＋柚皮苷組CAT、SOD和GSH-Px活性增高，MDA含量降低（P＜0.05）；與模型＋柚皮苷組比較，模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組CAT、SOD和GSH-Px活性降低，MDA含量增加（P＜0.05）。詳見表4。

2.5 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6比較

模型組血清TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)高于對(duì)照組和假手術(shù)組（P＜0.05）；模型＋柚皮苷組血清TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)低于模型組和模型＋生理鹽水組（P＜0.05）；模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組血清TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)高于模型＋柚皮苷組（P＜0.05）。詳見表5。

2.6 各組JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白表達(dá)比較

模型組p-JAK2、p-STAT3表達(dá)高于對(duì)照組和假手術(shù)組（P＜0.05）；模型＋柚皮苷組p-JAK2、p-STAT3表達(dá)低于模型組和模型＋生理鹽水組（P＜0.05）；模型＋柚皮苷＋I(xiàn)L-6組p-JAK2、p-STAT3表達(dá)高于模型＋柚皮苷組（P＜0.05）。詳見圖4、表6。

3 討 論

腦缺血缺氧是造成腦梗死后神經(jīng)功能損害的重要因素。一方面，神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺氧環(huán)境的耐受性差，缺血缺氧可直接損傷神經(jīng)細(xì)胞；另一方面，炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)的二次激活可加重細(xì)胞凋亡，進(jìn)而引起神經(jīng)功能損傷［18］。神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死面積、病理損傷和腦組織水腫是評(píng)價(jià)腦損傷的常用指標(biāo)。MCAO引起神經(jīng)功能缺損和腦水腫［16］。本研究采用線栓法建立急性缺血性腦梗死模型后，MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分和凋亡率均高于假手術(shù)組和對(duì)照組，說明急性缺血性腦梗死模型大鼠的梗死腦組織中存在明顯凋亡。柚皮苷預(yù)處理可改善神經(jīng)功能缺損，減小腦組織梗死面積，減輕病理損傷和水腫，減少腦細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步提示柚皮苷對(duì)急性缺血性腦梗死具有神經(jīng)保護(hù)作用，其作用機(jī)制與抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。

Bcl-2家族蛋白由促凋亡蛋白（Bax）和抗凋亡蛋白（Bcl-2）組成，可調(diào)控線粒體凋亡信號(hào)通路的激活，其機(jī)制與調(diào)節(jié)線粒體外膜（MEM）通透性有關(guān)［19］。Bax/Bcl-2比值是觸發(fā)MEM滲透的閾值［20］。本研究結(jié)果顯示，急性缺血性腦梗死可上調(diào)Bax/Bcl-2比值，降低Bcl-2表達(dá)，增加Bax表達(dá)，提示急性缺血性腦梗死誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是通過激活線粒體凋亡信號(hào)通路介導(dǎo)的。柚皮苷預(yù)處理可增加Bcl-2表達(dá)，降低Bax表達(dá)，下調(diào)Bax/Bcl-2比值，提示柚皮苷通過調(diào)節(jié)MEM的通透性，抑制急性缺血性腦梗死線粒體凋亡信號(hào)通路的激活。

炎癥和氧化應(yīng)激的二次激活是腦梗死過程中神經(jīng)元凋亡的重要因素［21-23］。TNF-α、IL-1β和IL-6細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)的激活中發(fā)揮著重要作用。TNF-α主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，可激活炎癥級(jí)聯(lián)，介導(dǎo)各種炎癥介質(zhì)級(jí)聯(lián)釋放；IL-1β和IL-6是由淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等分泌，其作用主要是加重炎癥，介導(dǎo)多種炎癥細(xì)胞向炎癥灶遷移和浸潤(rùn)［21］。CAT是保護(hù)細(xì)胞免受氧自由基損傷的主要細(xì)胞酶之一，可抑制過氧化氫損傷。SOD是線粒體基質(zhì)中對(duì)抗超氧陰離子的主要防御機(jī)制。GSH-Px是細(xì)胞中的一種抗氧化酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷方面發(fā)揮著重要作用。MDA是脂質(zhì)過氧化的關(guān)鍵產(chǎn)物，可間接反映細(xì)胞氧化應(yīng)激水平［23］。本研究中，模型組抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活性降低，MDA含量和炎性因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表達(dá)升高；柚皮苷預(yù)處理可提高SOD、CAT、GSH-Px活性，降低MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平，提示柚皮苷通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，減輕急性缺血性腦梗死后腦損傷。

JAK2是蛋白-酪氨酸激酶家族的成員，是許多生理和病理過程的重要調(diào)節(jié)器，包括炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖、分化，其他信號(hào)分子，如STAT1、STAT3和STAT5，也受JAK2調(diào)控，JAK2可誘導(dǎo)p-STAT3。多項(xiàng)研究顯示，JAK2/STAT3通路在炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激中發(fā)揮著重要作用［24-25］。有研究顯示，抑制JAK2/STAT3通路可抑制NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NLRP3）炎癥小體的激活，從而減輕缺血性腦卒中后的神經(jīng)炎癥反應(yīng)［26］；抑制JAK2/STAT3可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞線粒體改善腦缺血損傷和神經(jīng)炎癥［27］；柚皮苷可抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活［14］；相關(guān)研究表明，JAK2/STAT3信號(hào)通路可調(diào)控細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激［24］。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，柚皮苷預(yù)處理降低了JAK2、STAT3的磷酸化水平，提示柚皮苷可進(jìn)一步抑制急性缺血性腦梗死中JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活。采用JAK2/STAT3信號(hào)通路激活劑IL-6處理后，p-JAK2、p-STAT3水平升高，大鼠神經(jīng)損傷及腦細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激均加重，進(jìn)一步提示柚皮苷通過抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路在急性缺血性腦梗死中發(fā)揮著神經(jīng)保護(hù)作用。

綜上所述，急性缺血性腦梗死引起大腦氧化應(yīng)激，炎癥和細(xì)胞凋亡，損害神經(jīng)功能，柚皮苷預(yù)處理通過抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路，降低腦內(nèi)氧化應(yīng)激、炎癥和凋亡，從而改善急性缺血性腦梗死受損的神經(jīng)功能。本研究揭示了柚皮苷對(duì)急性缺血性腦梗死的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，提示柚皮苷可能是一種潛在的治療急性缺血性腦梗死的物質(zhì)。

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（收稿日期：2022-07-01）

（本文編輯薛妮）

基金項(xiàng)目 河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.11276174）

作者單位 石家莊平安醫(yī)院（石家莊" 050000），E-mail：623611399@qq.com

引用信息 鄭貴明，盧俊彥，史立彬.柚皮苷調(diào)節(jié)JAK2/STAT3信號(hào)通路對(duì)急性缺血性腦梗死大鼠神經(jīng)損傷的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2023，21（16）：2977-2983.