摘 要：【目的】采用高效液相色譜法對鮮黃花菜中的秋水仙堿進行檢測?！痉椒ā渴褂冒被燃淄閯驖{提取樣品中的秋水仙堿，經(jīng)C18固相萃取小柱凈化，高效液相色譜儀-紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量?！窘Y(jié)果】秋水仙堿在0.02～1.00 mg/L范圍內(nèi)線性方程為y=42 404 x，相關(guān)系數(shù)r為0.999 5，在鮮黃花菜中添加0.1、0.5、2.0 mg/L 3個水平的秋水仙堿，平均回收率為101%～106%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.9%～5.2%，檢出限為0.01 mg/kg?！窘Y(jié)論】該方法精密度和準(zhǔn)確性較高，能夠在實際樣品檢測中應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：黃花菜； 秋水仙堿； 高效液相色譜

中圖分類號：S644.3 " " " "文獻標(biāo)識碼：A " " "文章編號：1002-204X（2023）01-0068-04

doi：10.3969/j.issn.1002-204x.2023.01.018

Study on Determination of Colchicine in Fresh Daylily

Chen Xiang， Wu Yan， Zhao Zidan， Liu Xia

（Ningxia Institute of Quality Standards and Testing Technology for Agricultural Products，

Yinchuan， Ningxia 750002）

Abstract [Objective] The Colchicine in fresh daylily was detected by high performance liquid chromatography. [Methods] Colchicine was extracted from the samples with ammoniation of methanol by homogenate， purified by C18 solid phase extraction column， detected by high performance liquid chromatography-UV detector， and quantified by external standard method. [Results] The results showed that the linear equation of colchicine in the range of 0.02～1.00 mg/L was y=42 404 x， and the correlation coefficient r was 0.999 5. The average recoveries of colchicine in fresh daylily were 101%～106%， the relative standard deviations were 3.9%～5.2% at 0.1， 0.5 and 2.0 mg/L level. The detection limit was 0.01 mg/kg. [Conclusion] The method has high precision and accuracy， which can be applied in sample detection.

Key words Daylily; Colchicines; HPLC

黃花菜（Hemerocallis citrina Baroni）為百合科萱草屬植物，又名金針菜，在我國湖南祁東、湖南邵東、山西大同、陜西大荔，以及甘肅慶陽等地被廣泛種植[1-4]。近年來，寧夏吳忠市鹽池縣、紅寺堡區(qū)黃花菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展較快。截至2019年，寧夏黃花菜種植面積達(dá)11 333萬hm2，產(chǎn)值達(dá)2.5億元左右。黃花菜具有芳香氣味，脆爽可口，營養(yǎng)價值十分豐富，富含糖類、蛋白質(zhì)、維生素、胡蘿卜素、黃酮等物質(zhì)[5-8]，具有抗抑郁、抗腫瘤、改善睡眠等功效[9-11]。因此，適量食用黃花菜有益于人體健康。然而，食用不當(dāng)會導(dǎo)致人體出現(xiàn)腹瀉、嘔吐、眩暈等中毒癥狀。有研究者認(rèn)為黃花菜中引起食物中毒的物質(zhì)是秋水仙堿[12-13]，也有研究者認(rèn)為黃花菜中的有毒物質(zhì)可能是其他生物堿[14-15]。該文針對黃花菜中秋水仙堿開展了提取和高效液相色譜檢測方法研究，為黃花菜的安全食用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號：64-86-8，純度為95%，廣州佳途科技股份有限公司）；氨水（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；二氯甲烷（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（色譜純，美國默克公司）；C18固相萃取小柱（500 mg/6 mL，美國沃特世公司）；試驗用水為一級水。

供試材料為“大烏嘴”黃花菜鮮花，產(chǎn)自寧夏鹽池縣花馬池鎮(zhèn)。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（Waters e2695型配紫外檢測器，美國沃特世公司）；電子天平（PL202-L型，瑞士梅特勒-托利多公司，精度0.01 g）；離心機（TD-40L型，上海安亭科學(xué)儀器廠）；高速勻漿機（T18 basic型，德國IKA公司）；渦旋混勻器（MS3 digital型，德國IKA公司）。

1.3 樣品前處理

將采集的黃花菜鮮花樣品使用高速勻漿機勻漿，并在-18 ℃條件下保存待測。

1.4 樣品的提取及凈化

準(zhǔn)確稱取5.0 g樣品，加入1 mL氨水、20 mL二氯甲烷，勻漿提取3 min后，以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，吸取10 mL上清液，旋蒸濃縮至近干，待凈化。向濃縮瓶中加入4 mL試驗用水，充分溶解后，將其倒入已活化的C18固相萃取小柱進行吸附，重復(fù)上述步驟3次，棄去流出液。待液體近干后，分別加入4 mL水、4 mL甲醇-水溶液（V甲醇∶V水=4∶6）各淋洗1次，棄去上述濾液。最后加入6 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至近干后，用甲醇定容至2.5 mL，過0.22 μm有機相濾膜，待測。

1.5 液相色譜條件

色譜柱：Zorbax SB-C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；流速：0.5 mL/min；進樣量：10 μL；流動相：甲醇-水，采用梯度洗脫模式（表1）；檢測器波長：350 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

將1 000 mg/mL的秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋配制成10.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再稀釋為0.01、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相色譜條件下進行測定，秋水仙堿保留時間約為7.3 min，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1。以秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，曲線線性方程為y=42 404 x，相關(guān)系數(shù)為r=0.999 5。其中：y為秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積，x為秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見圖2。

2.2 方法的回收率和精確度

向黃花菜空白樣品中添加秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加質(zhì)量濃度分別為0.1、0.5、2.0 mg/L，靜置30 min之后按照1.4樣品的提取及凈化步驟進行測定，同時測定黃花菜空白樣品，每個添加水平作5個重復(fù)。由表2可知，鮮黃花菜中秋水仙堿的平均回收率為101%～106%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.9%～5.2%。該方法回收率和精確度均較高，具備可行性。相關(guān)譜圖見圖3。

3 結(jié)論

該文采用氨化二氯甲烷提取鮮黃花菜中秋水仙堿，經(jīng)C18固相萃取小柱凈化，對方法的回收率、精密度進行了探討。結(jié)果表明，秋水仙堿在鮮黃花菜中3個添加質(zhì)量濃度水平的回收率為101%～106%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.9%～5.2%，檢出限為0.01 mg/kg。說明該方法的精密度和準(zhǔn)確性較高，能夠在實際樣品檢測中應(yīng)用。

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責(zé)任編輯：達(dá)海莉