王婷婷 劉玉苓 孫佩佩 韓 琳 王 霞 （棗莊市立醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科，棗莊 277100）

糖尿病前期表現(xiàn)為血糖調(diào)節(jié)受損、糖耐量減退，屬于糖尿病發(fā)生的過渡階段，具有可逆性，因此早期對(duì)糖尿病前期進(jìn)行診斷、干預(yù)是防控糖尿病發(fā)生的重要手段［1］。有報(bào)道稱，在糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程中，免疫所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)發(fā)揮重要作用［2］，因此有理由推測(cè)，早在糖尿病前期時(shí)患者已經(jīng)存在免疫炎癥反應(yīng)，隨著疾病的進(jìn)展，此反應(yīng)被逐漸放大，進(jìn)而導(dǎo)致糖尿病發(fā)生。Wnt 蛋白家族成員5a（Wnt protein family member 5a，Wnt5a）屬于分泌型糖蛋白，在炎癥相關(guān)信號(hào)通路作用下介導(dǎo)機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)，已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)參與包括糖尿病在內(nèi)的多種免疫炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生［3］。但檢索國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前關(guān)于Wnt5a與免疫炎癥的相關(guān)性研究較少，因此本研究進(jìn)一步探討Wnt5a在糖尿病前期及糖尿病中的表達(dá)差異及其與糖尿病前期患者免疫炎癥的相關(guān)性，為臨床上糖尿病前期的研究提供參考，以根據(jù)所分析的結(jié)果早期干預(yù)，降低糖尿病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 將2020 年11 月至2021 年11 月期間棗莊市立醫(yī)院收治的糖尿病前期者64 例作為A 組，糖尿病患者51 例作為B 組，體檢的健康人群50 例作為C 組。A 組男31 例，女33 例，平均年齡（42.14±6.86）歲，B 組男28 例，女23 例，平均年齡（42.76±6.90）歲，C 組男24 例，女26 例，平均年齡（41.97±6.22）歲。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：A 組診斷標(biāo)準(zhǔn)：6.1 mmol/L≤空腹血糖受損（空腹血糖）<7.0 mmol/L，7.8 mmol/L≤口服葡萄糖耐量試驗(yàn)2 h 血糖<11.0 mmol/L［4-5］。B 組診斷標(biāo)準(zhǔn)：空腹血糖≥7.0 mmol/L、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)2 h血糖≥11.1 mmol/L［4］。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～65 周歲；非初次確診；未接受疾病相關(guān)治療；C 組血糖正常，身體健康。本研究經(jīng)棗莊市立醫(yī)院倫理委員會(huì)準(zhǔn)許（zzslyykyll2020010702），患者均知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：非2 型糖尿??；有糖尿病并發(fā)癥；合并惡性腫瘤；交流障礙；精神異常；急慢性感染；重要臟器功能不全。

1.1.2 主要試劑 Wnt5a ELISA 試劑盒購(gòu)自上海富雨生物科技有限公司（貨號(hào)：FY-04136H2）；IFNγ、IL-17A、IL-22 ELISA 試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司（貨號(hào)：SEKH-0046、SEKH-0026、SEKH-0033）。

1.2 方法

1.2.1 基線資料采集及Wnt5a、免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)水平測(cè)定 基線資料采集：包括飲酒史、吸煙史、體質(zhì)量指數(shù)、腰臀比、空腹血糖（FGB）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、空腹胰島素（FINS）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）等。

Wnt5a 水平測(cè)定：采集3 組入組次日3 ml 空腹靜脈血，ELISA試劑盒測(cè)定Wnt5a水平。

免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)測(cè)定：包括免疫相關(guān)指標(biāo)CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群［輔助性T 細(xì)胞1（Th1）、Th17、Th22］、炎癥相關(guān)指標(biāo)（IFN-γ、IL-17A、IL-22）。使用BD 流式細(xì)胞儀FACSVia 測(cè)定Th1、Th17、Th22，使用ELISA測(cè)定IFN-γ、IL-17A、IL-22。

1.2.2 指標(biāo)觀察 ①對(duì)比3 組基線資料、Wnt5a 水平、免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)水平差異；②分析影響糖尿病前期發(fā)生的危險(xiǎn)因素；③Wnt5a 與糖尿病前期患者免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22 的相關(guān)性；④Wnt5a 對(duì)糖尿病前期、糖尿病發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本文所有數(shù)據(jù)均使用SPSS22.0軟件處理，Kolmogorov-Smirnov法進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗(yàn)，levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，計(jì)量資料以xˉ±s表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用單因素F分析或t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料使用比率表示，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)。Logistic回歸分析糖尿病前期發(fā)生的危險(xiǎn)因素；Pearson 檢驗(yàn)分析Wnt5a 與糖尿病前期患者免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22的相關(guān)性；受試者工作特征（receiver operator characteristics curve，ROC）曲線分析Wnt5a對(duì)糖尿病前期、糖尿病發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組基線資料對(duì)比 3組在一般特征資料中對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；3 組在實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)中對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，表1）。

表1 3組基線資料對(duì)比（±s）Tab.1 Comparison of baseline data in 3 groups （±s）

表1 3組基線資料對(duì)比（±s）Tab.1 Comparison of baseline data in 3 groups （±s）

Note：Compared with group C， 1）P<0.05； compared with group B， 2）P<0.05.

Indexes General characteristic data Group A（n=64）Group B（n=51）Group C（n=50）Gender （Male/Female）Average age/year Drinking history（Yes/No）Smoking history（Yes/No）BMI/（kg·m-2）Waist hip ratio 31/33 42.14±6.86 21/43 28/23 42.76±6.90 19/32 24/26 41.97±6.22 17/33 28/36 24/27 21/29 23.54±2.67 0.82±0.13 23.71±2.78 0.81±0.11 23.53±2.86 0.80±0.09 Laboratory index Fasting blood glucose/（mmol·L-1）HbA1c/%TC/（mmol·L-1）TG/（mmol·L-1）HDL-C/（mmol·L-1）LDL-C/（mmol·L-1）FINS/（mU·L-1）6.32±0.651）2）9.90±1.121）4.21±0.45 5.24±0.641）2）5.00±0.531）2）2.00±0.141）2）1.02±0.111）3.26±0.211）13.86±2.651）2）7.12±0.761）5.48±0.241）3.22±0.211）1.00±0.121）3.34±0.241）16.75±3.121）5.20±0.60 4.01±0.32 1.12±0.09 1.35±0.13 2.01±0.32 9.56±1.00

2.2 3組Wnt5a水平對(duì)比 A組［（50.42±5.57）pg/ml］及B 組［（69.89±7.98） pg/ml］Wnt5a 水平高于C 組［（33.24±4.65） pg/ml］，A 組Wnt5a 水平低于B 組（P<0.05）。

2.3 3 組免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)水平對(duì)比 A 組、B 組免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22 水平高于C 組，A 組免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22 水平低于B 組（P<0.05，表2）。

表2 3組Wnt5a水平、免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)水平對(duì)比（±s）Tab.2 Comparison of Wnt5a level and immune inflammation-related indicators levels in 3 group （±s）

表2 3組Wnt5a水平、免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)水平對(duì)比（±s）Tab.2 Comparison of Wnt5a level and immune inflammation-related indicators levels in 3 group （±s）

Note：Compared with group C， 1）P<0.05； compared with group B， 2）P<0.05.

Group C（n=50）8.96±1.06 0.76±0.08 0.88±0.09 0.53±0.03 1.02±0.10 27.86±2.13 Indexes Th1/%Th17/%Th22/%IFN-γ（pg·ml-1）IL-17A（pg·ml-1）IL-22（pg·ml-1）Group A（n=64）11.32±2.561）2）1.31±0.211）2）1.24±0.221）2）1.18±0.141）2）3.25±0.321）2）38.75±4.531）2）Group B（n=51）16.64±2.751）2.56±0.261）2.33±0.351）2.67±0.561）5.34±1.001）55.76±6.741）

2.4 糖尿病前期發(fā)生因素Logistic回歸分析 以糖尿病前期發(fā)生為因變量（未發(fā)生=0，發(fā)生=1），上述結(jié)果中有差異的變量作為自變量，納入Logistic回歸方程，原值錄入，結(jié)果顯示糖尿病前期的發(fā)生與空腹血糖、Wnt5a、Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22相關(guān)，屬于獨(dú)立因素（P<0.05）。見表3。

2.5 Wnt5a 與糖尿病前期患者免疫炎癥的相關(guān)性分析 Pearson 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，Wnt5a 與糖尿病前期患者免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22均呈正相關(guān)（P<0.05）。見圖1。

2.6 Wnt5a 對(duì)糖尿病前期、糖尿病發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值 ROC 曲線顯示，Wnt5a 預(yù)測(cè)糖尿病前期及糖尿病的AUC值分別為0.921、0.897，AUC均>0.7，表示W(wǎng)nt5a對(duì)糖尿病前期及糖尿病發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值較高（P<0.05）。見表4、圖2。

圖2 ROC 曲線分析Wnt5a 對(duì)糖尿病前期、糖尿病發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值Fig.2 ROC curve was used to analyze predictive value of Wnt5a for prediabetes and diabetes

表4 Wnt5a預(yù)測(cè)糖尿病前期及糖尿病發(fā)生的效能Tab.4 Wnt5a predicts efficacy of prediabetes and diabetes

3 討論

正常狀態(tài)下，免疫系統(tǒng)維持自我穩(wěn)定、防御監(jiān)視外界侵襲，但當(dāng)外界不良因素侵襲導(dǎo)致病變時(shí)，此系統(tǒng)被激活，且貫穿整個(gè)炎癥過程，在此過程中局部出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，誘導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)合成分泌，此種免疫炎癥反應(yīng)是多種疾病的重要表現(xiàn)之一［6］。WEAVER 等［7］研究發(fā)現(xiàn)，炎癥誘導(dǎo)的胰島素抵抗是糖尿病前期發(fā)生的重要特征之一。半數(shù)以上的糖尿病前期患者存在不同程度的免疫炎癥反應(yīng)，免疫炎癥反應(yīng)的發(fā)生可通過激活蛋白β 受體阻斷胰島素信號(hào)，引起胰島素抵抗，進(jìn)而誘導(dǎo)糖尿病發(fā)生［8］。

與免疫炎癥相關(guān)的信號(hào)通路一直是研究熱點(diǎn)，Wnt 屬于最常見的免疫炎癥信號(hào)通路，其參與細(xì)胞的癌變、增殖、凋亡、免疫應(yīng)激、免疫炎癥等過程［9］。Wnt5a 屬于Wnt 家族成員，參與免疫炎癥應(yīng)答調(diào)控，免疫炎癥是較為復(fù)雜的過程，此過程有巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞參與，在巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞受到刺激被激活后，Wnt5a 表達(dá)異常升高［10-11］。部分研究顯示，Wnt5a 屬于巨噬細(xì)胞中的促炎因子，在CD4+T 細(xì)胞的作用下誘導(dǎo)炎癥因子合成分泌，從而參與炎癥應(yīng)答［11-12］。一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，Wnt5a 高表達(dá)于2 型糖尿病患者外周血中，其升高可增加胰島素抵抗嚴(yán)重程度［13］。但目前臨床上關(guān)于Wnt5a是否在糖尿病前期及糖尿病中存在表達(dá)差異，且是否與糖尿病前期患者免疫炎癥有關(guān)尚未見報(bào)道。本研究認(rèn)為Wnt5a水平高低與糖尿病前期、糖尿病相關(guān)，在上述研究的基礎(chǔ)上推測(cè)Wnt5a 可能經(jīng)放大糖尿病前期免疫炎癥，增強(qiáng)胰島素抵抗，從而促使疾病進(jìn)展。結(jié)果顯示，糖尿病前期患者血清Wnt5a水平高于健康人，但低于糖尿病患者，且與糖尿病前期患者免疫炎癥相關(guān)。

糖尿病慢性炎癥發(fā)展過程中T細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)發(fā)揮重要作用，在上述過程中CD4+T 細(xì)胞亞群可維持機(jī)體免疫平衡，但Th1、Th17、Th22 表達(dá)失衡可打破機(jī)體原有的免疫平衡，促進(jìn)慢性炎癥的發(fā)生［14］。CD4+T 細(xì)胞可促進(jìn)IFN-γ、IL-17A、IL-22 等多種炎癥因子的合成分泌，而損傷胰島β細(xì)胞，誘導(dǎo)胰島素抵抗［15］。其中Th1 分泌的IFN-γ 可通過經(jīng)抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)黏附因子表達(dá)導(dǎo)致胰島β 細(xì)胞功能障礙［16-17］。IL-17A 由Th17 分泌，通過促進(jìn)IL-6 表達(dá)激活局部炎癥，降低其表達(dá)可緩解胰島素抵抗［18］。另外，Th22 分泌的IL-22 通過與其自身受體結(jié)合，誘發(fā)胰島β 細(xì)胞功能障礙發(fā)生［19-20］。本研究結(jié)果提示W(wǎng)nt5a可能通過放大糖尿病前期患者 局 部 免 疫 炎 癥 促 進(jìn)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22表達(dá)，從而增加胰島素抵抗程度，最終導(dǎo)致糖尿病發(fā)生。

本文經(jīng)ROC 曲線分析Wnt5a 對(duì)糖尿病前期及糖尿病的預(yù)測(cè)價(jià)值，結(jié)果顯示，Wnt5a預(yù)測(cè)糖尿病前期、糖尿病的AUC 均>0.7，提示預(yù)測(cè)作用良好。雖然本文認(rèn)為Wnt5a 在糖尿病前期、糖尿病中表達(dá)具有一定差異，且與糖尿病前期患者免疫炎癥有關(guān)，但本文并未進(jìn)一步分析Wnt5a如何經(jīng)免疫炎癥促進(jìn)糖尿病前期發(fā)生的機(jī)制，且納入的樣本量較少，數(shù)據(jù)可能存在偏倚，因此本文上述研究結(jié)果還需后續(xù)研究深入驗(yàn)證，提高臨床上對(duì)糖尿病前期的認(rèn)知。

綜上，本研究結(jié)果表明，Wnt5a在糖尿病前期及糖尿病中的表達(dá)具有一定差異，當(dāng)42.38 pg/ml≤Wnt5a 水平<62.50 pg/ml 時(shí)為糖尿病前期，Wnt5a 水平≥62.50 pg/ml 時(shí)則說明已經(jīng)從糖尿病前期過渡至糖尿病，且認(rèn)為Wnt5a 與糖尿病前期患者免疫炎癥有關(guān)，可能經(jīng)放大糖尿病前期患者局部免疫炎癥促進(jìn)Th1、Th17、Th22、IFN-γ、IL-17A、IL-22 表達(dá)，從而增加胰島素抵抗程度，最終導(dǎo)致糖尿病發(fā)生。